El protocolo actual incluye una metodología para la clasificación y limpieza de las poblaciones de edad comparable de elegans de Caenorhabditis. Utiliza un simple, barato y eficaz herramienta a la medida para obtener una población experimental de nematodos para la investigación.
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Artículo de método
Caenorhabditis Tamiz: Un instrumento de baja tecnología y metodología para la clasificación de los organismos multicelulares pequeños
* These authors contributed equally
En este artículo
Resumen
Resumen
Elegans de Caenorhabditis (C. elegans) es un organismo modelo bien establecido usado en una amplia gama de investigación básica y biomédica. Dentro de la comunidad de nematodos de la investigación, hay una necesidad de una forma asequible y eficaz mantener poblaciones grandes, edad comparable de C. elegans. Aquí, presentamos una metodología para la clasificación mecánica y limpieza C. elegans. Nuestro objetivo es proporcionar un proceso rentable, eficiente, rápido y simple para obtener animales de tamaños uniformes y estadios para su uso en experimentos. Esta herramienta, el tamiz de Caenorhabditis , utiliza un sistema de tapa a la medida que los hilos de rosca en tubos de laboratorio cónico común y tipo C. elegans basado en tamaño de cuerpo. También demostramos que el tamiz de Caenorhabditis efectivamente transfiere animales de placa de un cultivo a otro lo que permite una rápida clasificación, sincronización y limpieza sin afectar a los marcadores de salud, incluyendo la movilidad e inducible por estrés Reporteros de gene. Esta herramienta accesible e innovador es una opción rápida, eficiente y no estresante para el mantenimiento de las poblaciones de C. elegans .
Introducción
El gusano nematodo Caenorhabditis elegans, es un organismo modelo principal. Además de la naturaleza sencilla y controlada de su cultivo en el laboratorio, es de su genoma completo secuenciado1 y el destino del desarrollo de cada célula se conoce2. Debido a estas características, C. elegans es un organismo modelo ampliamente utilizado para los estudios genéticos. Sin embargo, junto con estas características beneficiosas vienen algunos desafíos para los investigadores. Debido a su tiempo de generación rápido, las poblaciones de C. elegans pueden quedarse rápidamente sin alimentos o mezcladas pob....
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Protocolo
1. construcción de tamiz de Caenorhabditis y el uso
-
Protocolo de construcción
- Adquirir 2 tapas de tubos cónicos de 50 mL (figura 1A).
- Quitar el área de centro dentro del borde interno de los párpados (cuando se mira desde la parte inferior, figura 1B) utilizando un mechero Bunsen y una sonda de metal caliente o un soldador o caminó broca.
Nota: Usando el calor para cortar la tapa de plástico es preferible una hoja porque hay menos riesgo de lesiones. - Limpiar y lijar los bordes de corte y superior la superficie con un archivo de curva o un....
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Resultados
El tamiz de Caenorhabditis consta de 2 tapones, asegurando una superficie de malla de monofilamento de nylon tejido más pequeño que el diámetro del cuerpo de la edad del desarrollo deseado, usado para extraer energizadas poblaciones de organismos usando una técnica simple lavado. Fijaciones para tubos cónicos y la malla se utiliza para ordenar mecánicamente animales por el diámetro del cuerpo, dejando los animales deseados en el tubo lista para más mantenimiento y experimentación.......
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Discusión
En este documento, presentamos el diseño y el uso del tamiz de Caenorhabditis accesible, eficaz como herramienta para ordenar y mantener la C. elegans. Esta herramienta tiene varias ventajas para escoger manualmente cada animal, el lavado de las poblaciones, tratamientos químicos (p. ej., FUDR) y más costosos métodos de segregación de animales. En primer lugar, el Caenorhabditis tamiz de forma eficiente y rápida (menos de 20 min) clases descendientes de grandes poblaciones mixtas de an.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar. Los autores declaran que la investigación se llevó a cabo en ausencia de cualquier relación comercial o financiera que pueda interpretarse como un potencial conflicto de interés.
Agradecimientos
Los autores desean agradecer a Heather Currey por su contribución inicial para el diseño del estudio y el Dr. Swarup Mitra por su revisión crítica del manuscrito. También nos gustaría agradecer al Dr. Michael B. Harris comentarios, refinamientos y asistencia en la producción de la demostración de esta metodología. Las cepas fueron proporcionadas por el centro de genética de Caenorhabditis, que está financiado por la oficina de NIH de investigación programas de infraestructura (P40 OD010440). La investigación en esta publicación fue apoyada por el Instituto Nacional de General médica Ciencias de los institutos nacionales de salud, bajo la concesión número UL1GM118991, ....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Gafas de seguridad | Uline | S-21076 | |
| Guante protector resistente al calor | Grainger | Artículo # 3AT17 Mfr. Modelo # 3AT17 Catálogo Página # 1703 | |
| Tubo cónico de 50 mL | Falcon | 14-432-22 | |
| Malla de nylon sintético | Dynamic Aqua-Supply Ltd | NTX20 y NTX50 | |
| Pegamento de cianoacrilato | Scotch Super Glue Liquid | SAD114 | |
| Alicates | Vampliers | VMPVT-001-8 | |
| Herramienta Dremmel con lima circular | Lowe's | Artículo # 525945 Modelo # 100-LG | |
| FUDR | Sigma | F0503 | |
| M9 productos químicos ( NaCl, Na2HPO4, KH2PO4, MgSO4) | Sigma | S7653, RES20908-A7, 1551139, M7506 | |
| Productos químicos en placa NGM (Bactopeptona, Agar, KH2PO4, K2HPO4, CaCl2, Colesterol, Estreptomicina) | BD Biosciences (bactopeptona), Lab express (agar), Sigma (resto) | BD bioscience 211677, Lab Express 1001, Sigma 1551139, 1551128, C1016, C8667, S6501 | |
| Pluronic F-127 | Sigma | P2443 | |
| Hidrato de dicloruro de paraquat | Sigma | 36541 | |
| Microscopio de fluorescencia invertida | Olympus | FSX100 |
Referencias
- C elegans Sequencing Consortium. Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology. Science. 282 (5396), 2012-2018 (1998).
- Herman, M. A. Hermaphrodite cell-fate specification. WormBook. , 1-16 (2006).
- Stiernagle, T.
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Reimpresiones y permisos
