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Artículo de método

Con 22 3 anticuerpos Anti-PD-L1 concentrarse en biopsia y muestras citológicas de pacientes con cáncer pulmonar de células no pequeñas

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DOI:

10.3791/58082

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25 de septiembre de 2018

En este artículo

Resumen

Para ampliar la capacidad de los laboratorios en todo el mundo para evaluar la elegibilidad de los pacientes con cáncer de pulmón para el tratamiento con pembrolizumab, de una manera confiable y reproducible, hemos desarrollado un análisis que utiliza el concentrado 22 3 anticuerpo ampliamente disponible immunohistochemical autostainer, para muestras de biopsia y citología.

Resumen

Pembrolizumab monoterapia ha sido aprobado para el tratamiento de primera y segunda línea de pacientes con PD-L1-expresando avanzado cáncer de pulmón de células no pequeñas (CPCNP). Pruebas para la expresión de PD-L1 con el ensayo diagnóstico PD-L1 immunohistochemistry (IHC) 22 3 acompañante, que da una proporción de tumor puntuación (TPS), ha sido validado en tejido tumoral. Hemos desarrollado una optimizado desarrollado por el laboratorio prueba (LDT) que utiliza el concentrado 22 3 anticuerpo (Ab) en un autostainer IHC ampliamente disponible para las muestras de biopsia y citología. El TPS PD-L1 fue evaluado con 120 secciones de pares todo tumor del tejido y las muestras de biopsia y con 70 emparejado muestras de biopsia y citología (lavado bronquial, n = 40; derrames pleurales, n = 30). El 22 3 que LDT basada en concentrado mostró una alta tasa de concordancia entre (~ 100%) la biopsia y citología de muestras (~ 95%) en comparación con la expresión de PD-L1 IHC determinada mediante el ensayo del compañero 3 22 PD-L1 IHC en ambos TPS cortar puntos (≥1%, ≥ 50%). La LDT optimizada presentada aquí, usando el concentrado de Ab 22 3 para determinar la expresión de PD-L1 en tanto tejido del tumor y en muestras de citología, ampliará la capacidad de los laboratorios en todo el mundo para evaluar la elegibilidad de los pacientes con NSCLC para tratamiento con monoterapia de pembrolizumab de una manera confiable y reproducible.

Introducción

Recientes ensayos clínicos han demostrado la eficacia de la pembrolizumab, un humanizado IgG4 kappa isotipo anticuerpo monoclonal que bloquea la interacción entre la muerte celular programada 1 (PD-1) y sus ligandos, PD-L1 y PD-L2, en el tratamiento de pacientes con 2,1,de avanzado NSCLC del3,4.

Actualmente, pembrolizumab está aprobada para el tratamiento de NSCLC PD-L1-expresión en ambos pacientes de tratamiento con una expresión de PD-L1 TPS de ≥50% y no del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) o....

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Protocolo

Todos los procedimientos han sido aprobados por el Comité de ética local (Comité de ética de investigación humana, Centre Hospitalier Universitaire de Niza/Tumorothèque BB-0033-00025).

Nota: Este protocolo está ajustado específicamente para el uso del concentrado 22 3 anticuerpo en un stainer IHC automatizado disponible en el mercado (conocido como autostainer aquí, ver la Tabla de materiales) para muestras de citología y biopsias del tumor.

1. preparación de las muestras de tejido del Tumor

  1. Fijar el tejido del tumor en 10% formalina neutra tamponada (NBF) en un cassette.
    Nota: Tejid....

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Resultados

Utilizando el procedimiento presentado aquí y como se describe en detalle en recientes publicaciones10,11 de este grupo, LDT optimizada fue validada clínicamente con 120 archivo FFPE NSCLC biopsia las muestras de pacientes sometidos a cirugía resección o una biopsia en el Hospital Universitario de Pasteur, Niza, entre marzo de 2007 y marzo de 2016. Por otra parte, para la evaluación de la expresión de PD-L1 de muestras citológicas.......

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Discusión

Hemos validado una LDT optimizado usando el concentrado de anticuerpo 22 3 PD-L1, comparando con el validados clínicamente prueba comercial correspondiente10,11. 3 22 concentrados basados en anticuerpos LDT mostró una alta tasa de concordancia entre (~ 100%) la biopsia y muestras citológicas (~ 95%) en comparación con la expresión de PD-L1 IHC determinada usando el análisis de PD-L1 IHC 3 de 22 en ≥1% TPS y el ≥50% TPS puntos de corte. Como recientemente recomend.......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Este estudio fue patrocinado por Merck & Co., Inc., Kenilworth, NJ, USA. Los patrocinadores no desempeñó ningún papel en el diseño del estudio recolección de datos y análisis, publicación y preparación del manuscrito.

....

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
NovaPrep HQ1NovacytNASolución conservante para muestras de citología
Novaprep® HQ+ BNovacytNASolución mucolítica
Tissue-Tek VIP 6Sakura6042 VIP 6
Tissue-Tek TEC 5 Sistema de consola de inclusión de tejidosSakura5229 TEC 5
portaobjetos de vidrio para microscopio SuperFrost PlusThermo Fisher Scientific4951PLUS4
DL-Ditiothreitol en polvoSigma-AldrichD3801
Heidolph Multi Reax Agitador de vórticeThermo Fisher Scientific13-889-410
Shandon CytoblockThermo Fisher Scientific7401150
22C3 anticuerpo concentrado anti-PD-L1Agilent Dako#M365329
PD-L1 IHC 22C3 pharmDxAgilent DakoSK006
Autostainer Link 48Agilent DakoAS480
BenchMark ULTRA autostainerVentana#750-600
OptiView HQ Enlazador universalVentana#760-700
OptiView HRP MultimerVentana#760-700
OptiView Amplification H2O2Ventana#760-099
OptiView AmplifierVentana#760-099
OptiView Multímetro de AmplificaciónVentana#760-100
OptiView DABVentana#760-700
OptiView CobreVentana#760-700
Hematoxilina IIVentana#790-2208
Reactivo AzuladoVentana#760-2037
Acondicionamiento Celular 1 (CC1)Ventana#950-124
Cubreobjetos de película Tissue-TekSakura4742

Referencias

  1. Garon, E. B., et al. Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer. The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).
  2. Herbst, R. S., et al.

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Etiquetas

Inmunohistoquímica de PD-L1Concentrado de anticuerpo 22C3Puntuación de proporción tumoralMuestras de citología de biopsiaProtocolo de autoteñido de IHCProcesamiento de especímenes de citologíaInclusión de tejido tumoralAnálisis de la expresión de PD-L1Selección de pacientes para inmunoterapia