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Artículo de método

Forma de nanopartículas de plata para paliar el síndrome de Atresia biliar en ratones

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DOI:

10.3791/58158

13 de octubre de 2018

En este artículo

Resumen

Este artículo describe detalladamente un método basado en nanopartículas de plata para paliar el síndrome de atresia biliar en un modelo experimental de atresia biliar en ratones. Una sólida comprensión del proceso de preparación de reactivos y la técnica de inyección neonatal ratón ayudará a familiarizar a los investigadores con el método utilizado en estudios con ratones neonatales modelo.

Resumen

Atresia biliar (BA) es un tipo grave de colangitis con alta mortalidad en los niños de que la etiología es todavía no comprendida. Las infecciones virales pueden ser una posible causa. El típico modelo animal utilizado para el estudio de BA se establece por inocular un ratón neonatal con un rotavirus de rhesus. Nanopartículas de plata se ha demostrado para ejercer efectos antibacterianos y antivirales; en este estudio se evaluó su función en el modelo de ratón de BA. Actualmente, en experimentos con animales BA, los métodos utilizados para mejorar los síntomas de los ratones de BA son tratamientos sintomáticos generalmente dada a través de alimentos o a otros medicamentos. El objetivo de este estudio es para demostrar un nuevo método para paliar el síndrome de BA en ratones por la inyección intraperitoneal de nanopartículas de plata y para proporcionar métodos detallados para la preparación de la formulación de gel de nanopartículas de plata. Este método es simple y ampliamente aplicable y se puede utilizar para investigar el mecanismo de BA, así como en tratamientos clínicos. Basado en el modelo de ratón de BA, cuando los ratones presentan ictericia, el gel de nanopartículas de plata preparada se inyecta por vía intraperitoneal a la superficie del hígado más bajo. Se observa el estado de supervivencia, y se examinan los indicadores bioquímicos y la histopatología hepática. Este método permite una comprensión más intuitiva de ambos el establecimiento del modelo de BA y nuevos tratamientos de BA.

Introducción

BA es una forma de colestasis caracterizada por ictericia persistente y tiene alta mortalidad en ausencia de trasplante hepático. Las infecciones virales están estrechamente asociadas con la patogénesis de BA. El citomegalovirus, reovirus y rotavirus se han sugerido como patógenos en BA1,2,3. Durante el período neonatal, la respuesta del sistema inmune inmaduro a una infección viral produce dysregulation inmune contra extra - e intrahepáticos biliares, conduce a la apoptosis de la célula epitelial biliar, infiltración de células inflamatorias en el portal área, obstrucción de....

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Protocolo

Todos los protocolos experimentales de animales han sido aprobados por el cuidado de Animal institucional y Comité uso del Sun Yat-sensor del laboratorio Animal Centro Universitario (#IACUC-DB-16-0602).

1. establecer el modelo de ratón de Atresia biliar

  1. Mantener embarazadas ratones BALB/c en un ambiente libre de patógenos específico en un ciclo de luz/oscuridad de 12 h a 25 ° C, con acceso a autoclave chow ad libitum.
  2. Para preparar la cepa RRV MMU 18006, amplifican el virus en células MA104 y medir los títulos virales por un ensayo de placa19.
    Nota: Las células MA104 se cultivan en med....

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Resultados

Basado en el modelo de ratón BA establecido, los ratones neonatales infectados se administraron una inyección i.p. de la mezcla preparada de AgNP colágeno 2 x después de que la ictericia. Supervivencia del ratón fue revisada para diario, y se realizaron pruebas de función hepática, patología del hígado y citometría de flujo. En comparación con los ratones de control sin tratar BA, los ratones tratados con AgNP demostraron ictericia reducida y mantienen su peso corporal normal (

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Discusión

AgNPs exhiben potentes propiedades antibacterianas de amplio espectro y una permeabilidad fuerte22; Además, se utilizan para producir una gama de productos médicos antibacteriano23. Sin embargo, AgNPs puede tomar mucho tiempo para borrar una vez que se acumulan en órganos, y esta persistencia puede conducir a efectos tóxicos24,25. Un estudio examinó la toxicidad aguda y genotoxicidad de AgNPs después de una inyecció.......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

AgNPs aquí fueron un regalo de C. M. Che en el Departamento de química, Universidad de Hong Kong. Este trabajo fue financiado por la Fundación Nacional de Ciencias naturales de China (Nº 81600399), ciencia y tecnología proyecto de Guangzhou (No.201707010014).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Ratón BALB/cCentro Médico Experimental de Animales de GuangdongSYXK2017-0174Experimento con animales
Rhesus rotavirus (RRV)ATCCATCC  VR-1739Establecer atresia biliar modelo de ratón
MA104 células ATCCATCC  CRL-2378.1Solo para uso en laboratorio
DMEMThermo Fisher10569010Cultivo de células de mamíferos
Suero fetal bovinoThermo Fisher10099141Cultivo de células de mamíferos
colágeno tipo ICORNING354236Solo para uso en investigación
Tampón PBSOXOIDBR0014GPara lavado
NaOHSigma1310-73-2Ajustar el valor de PH
AgNP Antibacterial
Nota: El AgNps fue un regalo del Prof. CM Che. en el Departamento de Química de la Universidad de Hong Kong.
Jeringa de insulina con aguja integradaBD9161635SPara uso médico
Tubo de centrífuga de 15 mL Corning430791Solo para uso en laboratorio
Tubo de microcentrífuga de 1,5 mLGEBCT0200-B-NSolo para uso en laboratorio
MicroscopioNikonECLIPSE-CiPara uso en laboratorio
Microscopio de disección/intravitalNikonSMZ 1000Para uso en laboratorio
anti-Mouse NKp46 FITCeBioscience11-3351Solo para uso en investigación
anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5eBioscience15-0041Solo para uso en investigación
Ratón monoclonal Anti-Human CD4DAKO 20001673Solo para uso
en investigación anti-NKG2DRDMAB1547Solo para uso en investigación BD
Citómetro de flujo FACSCantoBD BiosciencesFACS Canto PlusSolo para uso en laboratorio

Referencias

  1. Szavay, P. O., Leonhardt, J., Czechschmidt, G., Petersen, C. The role of reovirus type 3 infection in an established murine model for biliary atresia. European Journal of Pediatric Surgery. 12 (04), 248-250 (2002).
  2. Coots, A., et al.

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Reimpresiones y permisos

Etiquetas

Nanopartículas de platamodelo de ratón neonatalrotavirus rhesusinyección intraperitonealgel de nanopartículas de platacolangiografía extrahepáticatinción con hematoxilina y eosinacitometría de flujohistopatología hepática