Métodos de medición de las respuestas simpáticas y cardiovasculares a las manipulaciones del sistema nervioso central (SNC) son importantes para el avance de la neurociencia. Este protocolo fue desarrollado para ayudar a los científicos medir y cuantificar los cambios agudos en la actividad nerviosa simpática renal (RSNA) en ratas anestesiadas (no supervivencia).
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Cuantificación de los cambios agudos en la actividad nerviosa simpática Renal en respuesta a las manipulaciones del sistema nervioso Central en ratas anestesiadas
En este artículo
Resumen
Resumen
Actividad nerviosa simpática renal (RSNA) y la presión arterial media son parámetros importantes en la investigación cardiovascular y autonómica; sin embargo, existen limitados recursos dirigir a científicos en las técnicas de medición y análisis de estas variables. Este protocolo describe los métodos para la medición de RSNA y la presión arterial media en ratas anestesiadas. El protocolo también incluye los métodos para acceder al cerebro durante grabaciones de RSNA para la manipulación del sistema nervioso central (SNC). Es compatible con la técnica de grabación de RSNA farmacológica, optogenetic, o estimulación eléctrica del SNC. El enfoque es útil cuando un investigador medir a corto plazo respuestas autónomas (min a h) en experimentos de supervivencia no correlacionan anatómicamente con los núcleos de la CNS. El enfoque no está diseñado para ser utilizado para obtener grabaciones de crónica (supervivencia) de RSNA en ratas. Descargas en RSNA, promediados rectificaron RSNA, y la presión arterial media puede ser cuantificados y analizados usando otras pruebas estadísticas paramétricas. También se describen métodos para obtener acceso venoso, la presión arterial media de grabación telemetrically y fijación de cerebro para futuros análisis histológico en el artículo.
Introducción
Los descubrimientos sobre el control autonómico del sistema cardiovascular informan estrategias para el manejo de trastornos tales como hipertensión, insuficiencia cardíaca y enfermedad renal crónica. Exceso de actividad del sistema nervioso simpático y disminución del tono vagal cardíaco contribuyen a la elevada presión arterial (PA)1. Crónicamente elevada salida simpática renal aumenta la secreción de catecolaminas y disminuye el flujo sanguíneo renal, con consecuencias deletéreas para los sistemas cardiovascular, renal2,3. Para definir las vías neurobiológicas que conduce a disfunció....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
Todos los métodos descritos fueron aprobados por el Comité institucional de cuidado Animal de la Universidad de Illinois en Chicago.
1. crear electrodos bipolares de RSNA
- Para crear el electrodo, corte dos trozos de alambre de acero inoxidable cada aproximadamente 18 mm de largo. Corte una pieza de polietileno (PE-50) tubería aproximadamente 15 mm de largo. Alimentación de dos piezas de alambre en el tubo, dejando el alambre que sobresalen de ambos extremos.
- Quitar el aislante de los extremos de los cables; Corte los hilos dejando 2-3 mm de alambre expuesto. En un extremo, apretar clavijas macho sobre el alambre expuesto....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
La figura 1 ilustra una grabación muestra RSNA y BP de una rata anestesiada de Nembutal. Una inyección intravenosa de fenilefrina fue utilizada para inducir un aumento en la presión arterial media y evocar el barorreflejo y transitorio sympathoinhibition4,6. Para cuantificar la RSNA, la RSNA cruda fue rectificada y promediada para los segmentos sin traslapo 10 s; la estimación del ruido fue restada de.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
Pasos críticos para la medición de RSNA incluyen: (1) evitar el estiramiento de la arteria renal y los nervios al separar el riñón de los músculos del paraspinal y al colocar el segmento del nervio en los electrodos de la grabación, disección (2) cuidadosamente las fibras del nervio renales desde el tejido circundante/buque, (3) asegurar que los cables del electrodo están libres de tejido, sangre o linfa y (4) prevenir el nervio de la desecación mediante la aplicación de aceite mineral para el nervio renal y el gel de si.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
Anne M. Fink es miembro del Consejo Asesor de clientes de datos internacional de Ciencias.
Agradecimientos
Este estudio fue apoyado por el Instituto Nacional de investigación en enfermería (K99/R00NR014369).
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| alambre de acero inoxidable | ; Sequim, WA | 791000 | Electrodo RSNA |
| Tubo de polietileno (PE-50) | VWR; Radnor, PA | 63019-048 | Electrodo RSNA; canulación de recipientes |
| Conector de clavija en miniatura | A-M Systems; Sequim, WA | 520200 | de electrodo RSNA |
| Daniels Manufacturing Corp.; Orlando, FL | M22520 | Tira de conector de electrodo RSNA | |
| Amphenol; Municipio de Clinton, MI | 221-2653 | Electrodo RSNA | |
| J-B Kwik Epoxi | J-B Soldadura, Sulphur Springs, TX | 8270 | Electrodo RSNA |
| Permatex de silicona | ; Hartford, CT | 2222 | Electrodo RSNA |
| Heparina sódica; Inyectable (vial de 10 mL, 1000 U/mL) | KV Suministro Veterinario; David City, NE | P03466 | Patency de la línea venosa |
| Fenilefrina HCl; Inyectable (vial de 1 mL; 10 mg/mL) | Suministro quirúrgico ACE; Brockton, MA | 950-6312 Pruebas de | simpatatioinhibición renal |
| Estancias quirúrgicas elásticas de un solo gancho Aparato de | Harvard; Holliston, MA | 72-2595 | Incisión |
| Cinta quirúrgica de seda | 3M, Minneapolis, MN | 1538-0 | Estancias quirúrgicas seguras |
| Agujas, 20 G | Sigma-Aldrich; St. Louis, MO | Z192554-100EA | Canulación de vasos |
| Dumont #7 pinzas curvas Fine | Science Tools; Foster City, CA | 11274-20 | Canulación de vasos |
| 5-0 lazos de sutura de seda | Braintree Scientific; Braintree, MA | SUT-S 106 | Canulación de vasos |
| Pinzas hemostáticas delicadas | Roboz Surgical Instrument Co.; Gaithersburg, MD | RS-7117 | Canulación de vasos y cirugía de ARSR |
| Pinzas hemostáticas Crile | Fine Science Tools; Foster City, CA | 13004-14 | Doblado de aguja |
| Transmisor de telemetría | Data Sciences International; Minneapolis, MN | PA-10 Monitoreo de | la presión arterial media (telemetría) |
| Jeringa de re-gel | Data Sciences International; Minneapolis, MN | 276-0038-001 | Reutilización de transmisores (telemetría) |
| Transductor de presión desechable | Transpac; San Clemente, CA | MI-1224 | Monitoreo de la presión arterial media |
| Infusor de presión de manguito transparente | MILA International Inc.; Florence, KY | 2281339 Monitoreo de | la presión arterial media |
| Pinzas de canulación de vasos | Fine Science Tools; Foster City, CA | 00574-11 | Inserción de catéter |
| Monofilamento negro nylon 4-0 sutura en aguja de corte inverso | McKesson Medical-Surgical; San Francisco, CA | S661GX | Transmisor de telemetría seguro Receptor |
| telemetría | Data Sciences International; Minneapolis, MN | RPC-1 | Monitoreo de la presión arterial media (telemetría) |
| LabChart Pro (software), PowerLab (hardware de adquisición) | AD Instruments; Colorado Springs, CO | ML846, MX2 matrix 2.0 (compatible con la telemetría de Data Science International) | 3 opciones de software/hardware de adquisición |
| SciWorks (software), DataWave (hardware de adquisición) | DataWave Technologies, Loveland, CO | N/A | |
| Spike 2 (software), Micro1401-3 | Cambridge Electronic Design Ltd., Londres Reino Unido | 1401-3 | |
| Micro-drill | Roboz Instrumento Quirúrgico Co.; Gaithersburg, MD | RS-6300 | Cirugía del SNC |
| Marco de cirugía estereotáxica | Stoelting; Wood Dale, IL | 51600 | Amplificador de microelectrodo para cirugía CNS |
| con preamplificador 10X | Sistemas A-M; Sequim, WA | 1800-2 | RSNA grabación |
| Retractores | Fine Science Tools; Foster City, CA | 17009-07 | Cirugía RSNA |
| Pinzas de microdisección | Herramientas de ciencia fina; Foster City, CA | 11251-10 | Cirugía RSNA |
| Micro-gancho | Herramientas de ciencia fina; Foster City, CA | 10064-14 | Cirugía RSNA |
| Aceite mineral | Fisher Scientific; Waltham, MA | 8042-47-5 | Cirugía RSNA |
| Monitor de audio | A-M Systems; Sequim, WA | 3300 | RSNA cirugía |
| Gel de sílice | Wacker, München; Alemania | RT601A-B | Cirugía RSNA |
| Pinzas eléctricas | Tyco Electronics; Schaffhausen, Suiza | EB0283-000 | Aguja de perfusión de conexión a tierra o fijación |
| Tijeras Bonn, puntas rectas/afiladas | Roboz Surgical Instrument Co; Gaithersburg, MD | RS-5840 | Aguja |
| perfusión por sonda nasogástrica | Aparato de Harvard; Holliston, MA | 75-0286 | Perfusión |
| Masterflex bomba de perfusión | Cole-Parmer; Vernon Hills, IL | 7524-10 | Tubo |
| de silicona curado con platino Masterflex | Perfusion Cole-Parmer; Vernon Hills, IL | 96410-15 | Formalina de perfusión |
| (solución tamponada al 10%; 4 L) | Sigma-Aldrich; St. Louis, MO | HT501128 | Sacarosa de perfusión |
| Sigma-Aldrich; St. Louis, MO | S0389 | Crioprotección |
Referencias
- Mancia, G., Grassi, G. The autonomic nervous system and hypertension. Circulation Research. 114 (11), 1804-1814 (2014).
- Kannan, A., Medina, R. I., Nagajothi, N., Balamuthusamy, S. Renal sympathetic nervous system and the effects of denervation on renal arteries. <....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
