Artículo de método

Fabricación de dispositivos emparejados de índice refractivo para microfluidos biomédica

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DOI:

10.3791/58296

10 de septiembre de 2018

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe la fabricación de dispositivos microfluídicos de MY133-V2000 para eliminar los artefactos que se presentan a menudo en microcanales debido a los índices de refracción une mal entre estructuras de microcanales y una solución acuosa. Este protocolo utiliza un sostenedor de acrílico para comprimir el dispositivo encapsulado, mejorar la adherencia tanto química como mecánicamente.

Resumen

El uso de dispositivos microfluídicos ha surgido como una herramienta definitoria para aplicaciones biomédicas. Cuando se combina con técnicas de microscopía moderna, estos dispositivos pueden implementarse como parte de una plataforma robusta capaz de hacer mediciones simultáneas de complementarias. El principal reto creado por la combinación de estas dos técnicas es el desequilibrio en el índice de refracción entre los materiales tradicionalmente utilizados para hacer que los dispositivos de microfluidos y las soluciones acuosas en biomedicina. Este desajuste puede crear artefactos ópticos cerca de los bordes del canal o dispositivo. Una solución es reducir el índice de refracción del material utilizado para fabricar el dispositivo mediante el uso de un polímero fluorado como MY133-V2000 cuyo índice de refracción es similar a la del agua (n = 1.33). Aquí, se demuestra la construcción de un dispositivo de microfluidos de MY133-V2000 mediante técnicas de litografía blanda, utilizando plasma de O2 en conjunto con un sostenedor de acrílico para aumentar la adherencia entre el dispositivo de MY133-V2000 fabricado y el sustrato de polidimetilsiloxano (PDMS). El dispositivo entonces es probado por lo lleno de medios de cultivo celular de 24 h demostrar la capacidad del dispositivo para mantener condiciones de cultivo de células en el transcurso de un experimento típico de proyección de imagen incubando. Por último, la microscopia fase cuantitativa (QPM) se utiliza para medir la distribución de masa dentro de las células adherentes vivo en la MCP. Así, la mayor precisión, de fabricación del dispositivo de un polímero de bajo índice de refracción como MY133-V2000 sustituyen a materiales tradicionales litografía blanda como PDMS, está demostrada. En general, este enfoque para la fabricación de dispositivos microfluídicos puede integrarse fácilmente en flujos de trabajo existentes de litografía blanda para reducir artefactos ópticos y aumentar la precisión de la medida.

Introducción

El desarrollo de la tecnología de microfluidos ha permitido una amplia gama de nuevas técnicas biomédicas que aprovechan la única física de flujos de escala microscópica1,2. Esto incluye las técnicas diagnósticas construidas sobre plataformas de microfluidos que cuantifican biomarcadores clínicamente relevantes, incluyendo célula rigidez3, marcadores de superficie4y crecimiento5. Mediante la manipulación de las células, dispositivos microfluídicos también pueden utilizarse para medir la heterogeneidad de biomarcadores, por ejemplo como ind....

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Protocolo

1. fabricación de la negativa de polidimetilsiloxano

  1. Preparación de polidimetilsiloxano
    1. Medida 18 g de elastómero de silicona PDMS y 1,8 g de reactivo endurecedor. Verter el reactivo endurecedor en un bote de medición con el elastómero.
    2. Mezclar el elastómero y el reactivo endurecedor vigorosamente por 1 minuto y poner la mezcla en una cámara de vacío durante 30 minutos.
    3. Retire el PDMS del vacío, vierta 15 g sobre el negativo con un cortador de galletas (radio = 3,8 cm) para impedir el PDMS corriendo fuera de la cara y cubrir la mezcla restante de PDMS.
    4. Poner el molde que contiene el PDMS en la cáma....

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Resultados

Este protocolo describe la fabricación de MY133-V2000, un polímero fluorado con un bajo índice de refracción la del agua que. Una característica clave de este protocolo es cómo superar la falta de adherencia que es característica de los polímeros fluorados mediante plasma de oxígeno y por fabricar el dispositivo dentro de un sostenedor de acrílico para proporcionar la fuerza extra mecánica requerida para sellar el canal contra el sustrato PDMS (figura 1). El .......

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Discusión

MY133-V2000 puede utilizarse como alternativa a los materiales de fabricación tradicional litografía blanda como PDMS. Trabajo previo ha demostrado que los materiales con un alto índice de refracción, como PDMS, introducen artefactos importantes cerca de las paredes del canal debido a los índices de refracción une mal entre el material de fabricación y la solución acuosa dentro del canal 13. MY133-V2000 permite emparejar el índice de refracción del dispositivo de microfluidos para las soluciones a.......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Este trabajo fue financiado por la Universidad de Utah, el Vicerrectorado de investigación, así como por los fondos junto con grant CA042014 P30 otorgado al Instituto de cáncer Huntsman y CRR al programa en el Instituto de cáncer Huntsman.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
MY133-V2000MY PolímerosMY133-V2000
Sylgard 184Ellsworth Adhesivos184 SIL ELAST KIT 0.5KG
Portaobjetos de microscopio Fisher PremiumFisher Scientific12-544-4.118
" (3.0mm) x 12" x 12" Lámina acrílicaUnited States Plastic Corp44290.060
"(1.5mm) x 12" x 12" Lámina acrílicaUnited States Plastic Corp44200
SCIGRIP 3 Cemento acrílico de fraguado muy rápidoUnited States Plastic Corp45735
Papel de aluminio estándar (.6 mm de grosor)VWR89107-726
Toallitas Kim FisherScientific06-666
Insta-Cure+ Super GlueBob Smith IndustriesBSI-109
1/8" Tubo de PVCMcMaster Carr5231K55
McCormick Colorante AlimentarioTarget13353207
X-Acto #1 Cuchillode precisión X-ActoX3201
X-Acto #18 Hoja de cincelado para madera de alto gramajeX-ActoX218
VWR Hojas de afeitar VWRVWR55411-055
Platos de cultivo celular tratados en superficieFisher ScientificFBO12922
Fibronectina Plasma HumanoSigma-AldritchF0895-1MG
Tripsina-EDTA 10xFisher Scientific15-400-054
Corning Dulbecco's Phosphate Buffered SalineFisher ScientificMT21030CM
Gibco Penicilina-EstreptomicinaFisher Scientific15-140-148
HyClone Aminoácidos No Esenciales 100xFisher ScientificSH3023801
Suero Fetal BovinoOmega ScientificFB-12
Corning DMEM con L-glutamina y glucosaFisher ScientificMT10013CV
Tricloro(1H,1H,2H,2H-perfluorooctyl)silanoSigma-Aldritch448931Reacciona violentamente con el agua
Etanol, 200 pruebas Decon LabsFisher Scientific04-355-223
AcetonaFisher ScientificA18P-4
Bel-Art 42025 Desecador de plásticoCole-ParmerEW-06514-30
Epilog Fusion Laser Cutter, 120 WEpilog Laser EpilogFusion M2 32 Laser
Isotemp Stirring HotplateFisher ScientificSP88850200
Ateco 14111 Cortador de acero inoxidable de 1,5 pulgadasAteco14111
Pyrex Plato de cultivo celularde vidrio Fisher Scientific08-747B
Limpiador de plasma de radiofrecuenciaHarrick PlasmaPDC-32GUtilizado con gas oxígeno
Laboratorios de agujeros negros DigivacLaboratorios de agujeros negros Modelo215
Intelli-Ray Horno ultravioletaUvitronUVO338
recubrimiento por centrifugaciónMTI CorporationVTC-100A
Horno Isotemp de la marcaFisher Fisher Scientific15-103-0510Convección de aire forzado
Gilson Pipeta de desplazamiento positivo P1000Fisher ScientificFD10006G
HeraCell VIOS 160iFisher Scientific13 998 212PM
Máquina compacta de

Referencias

  1. Zare, R. N., Kim, S. Microfluidic platforms for single-cell analysis. Annual Review Biomedical Engineering. 12, 187-201 (2010).
  2. Neuzi, P., Giselbrecht, S., Lange, K., Huang, T. J., Manz, A. Revisiting lab-on-a-chip technology for drug discovery. Nature Reviews Drug Discovery. 11 (8), 620-632 (2012).
  3. Xu, W., et al.

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