Registro electrofisiológico de la actividad del sistema nervioso Central de tercer estadio de Drosophila Melanogaster

Resumen

Este protocolo describe un método para registrar la actividad eléctrica descendente de la sistema de nervioso central de Drosophila melanogaster para permitir pruebas de agentes farmacológicos, mutaciones genéticas de las proteínas neuronales, conveniente y rentable o el papel de los caminos fisiológicos inexplorados.

Resumen

La mayoría de los insecticidas disponibles actualmente atacar el sistema nervioso y mutaciones genéticas de las proteínas neuronales invertebradas a menudo producen consecuencias perjudiciales, sin embargo, los métodos actuales para el registro de actividad del sistema nervioso de un individuo animal es costoso y laborioso. Esta aspiración preparación del electrodo del sistema nervioso central de larvas tercer estadio de Drosophila melanogaster, es un sistema manejable para las pruebas de los efectos fisiológicos de los agentes neuroactivos, determinar el papel fisiológico de varios nervios caminos hacia la actividad del CNS, así como la influencia de las mutaciones genéticas a la función neuronal. Esta preparación ex vivo requiere sólo moderada disección electrofisiológico experiencia y habilidad generar grabaciones reproducibles de insecto actividad neuronal. Una amplia variedad de moduladores químicos, incluyendo péptidos, entonces puede aplicarse directamente al sistema nervioso en la solución con la solución fisiológica salina para medir la influencia en la actividad del CNS. Genéticas, otras tecnologías, como el sistema de GAL4/UAS, pueden aplicarse independientemente o conjuntamente con los agentes farmacológicos para determinar la función de canales iónicos específicos, transportadores o receptores a artrópodos función del CNS. En este contexto, los ensayos aquí descritos son de gran interés para toxicólogos insecticida insectos fisiólogos y biólogos del desarrollo para que D. melanogaster es un organismo modelo establecido. El objetivo de este protocolo es describir un método electrofisiológico para permitir la medición de la electrogenesis del sistema nervioso central en el insecto modelo, Drosophila melanogaster, que es útil para probar una diversidad de científicos hipótesis.

Introducción

El objetivo general de este enfoque es ayudar a los investigadores a medir rápidamente la electrogenesis del sistema nervioso central (SNC) en el insecto modelo, Drosophila melanogaster. Este método es confiable, rápida y costo-eficiente para llevar a cabo la experimentación fisiológica y toxicológica. El SNC es esencial para la vida y por lo tanto, los caminos fisiológicos críticos para funcionamiento neuronal han sido exploradas extensivamente en un esfuerzo por comprender o modificar la función neural. Caracterización de las vías de señalización dentro del CNS artrópodo ha permitido el descubrimiento de varias clases químicas de insecticidas que i....

Protocolo

1. equipos y materiales

1. Preparar los componentes necesarios (listados en la Tabla de materiales) de la plataforma de electrofisiología para realizar grabaciones de electrodo de succión de la Drosophila del CNS.
   Nota: Antes de la experimentación, es necesario construir cámaras para la disección de la Drosophila CNS y ser utilizado para bañarse los ganglios en solución salina durante las grabaciones. Un esquema paso a paso de construcción de la cámara se proporciona a continuación.
2. Prepare la cámara larval.
   1. Derretir la cera negra usando una placa caliente.
   2. Vierta 2 mL de cera derretida en una c....

Resultados

La actividad espontánea de los nervios periféricos descendentes del Drosophila del sistema nervioso central puede grabarse utilizando electrodos de succión extracelulares con reproducibilidad consistente. La actividad espontánea de la suprimida y seccionado Drosophila CNS produce un patrón cíclico de explosión con 1-2 s de disparo con aproximadamente 1 s de cerca la actividad de reposo. Por ejemplo, el SNC está quieto (1-2 Hz) de 0.5-1 s, seguido de una explosión (100-40.......

Discusión

Los datos facilitados en el vídeo asociado y texto han dado pasos para registrar la actividad y la espiga alta frecuencia de Drosophila CNS ex vivo. La eficacia de la disección es el aspecto más crítico del método ya corto o pocas neuronas descendentes reducirá la base disparando ritmo que dan lugar a grandes variaciones entre repeticiones. Sin embargo, una vez que domina la técnica de disección, los datos recogidos con este ensayo son altamente reproducibles y modificable para una amplia variedad de di.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Drosophila melanogaster (cepa OR)	Bloomington Drosophila Stock Center	2376
Mesa de aislamiento de vibraciones	Kinetic Systems	9200 series
Faraday Cage	Kinetic Systems	N/A
Microscopio de disección en un brazo	Nikon		SMZ800N Se pueden utilizar varios visores; el soporte de la pluma es crítico
AC/ amplificador diferencial de CC	ADInstrumentos	AM3000H	El modelo 1700 se puede utilizar en lugar del modelo 3000
monitor de audio	ADInstruments	AM3300
Hum Bug Noise Eliminator	A-M Systems	726300
Sistema de adquisición de datos (PowerLab)	pueden utilizar varios modelos de PowerLab	ADInstruments	PL3504
Lab Chart Pro Software	ADInstruments	N/A - Descarga
Luces de fibra óptica	Edmund Optics	89-740	Se pueden utilizar diferentes fuentes de luz, pero la fibra óptica es la más adaptable
Micromanipulador	World Precision Instruments	M325
Soporte de microelectrodo	World Precision Instruments	MEH715	Se aceptan diferentes modelos
Cables BNC	World Precision Instruments	múltiples según el tamaño
Capilares de vidrio	Precision Instruments	PG52151-4
Extractor de microelectrodos	Sutter Instruments	P-1000	También puede usar Narashige PC-100
Cera Negra	Carolina Biological Supply	974228
Alfileres de insectos sin recubrimiento, tamaño #2	Bioquip	1208S2
Pinzas Fince	Herramientas de Ciencia Fina	11254-20
Tijeras de resorte Vannas	Herramientas de Ciencia Fina	15000-03

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