Aislamiento, caracterización y diferenciación de células cardiacas desde el corazón de ratón adulto

Santosh K. Yadav; Paras K. Mishra

doi:10.3791/58448

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Artículo de método

Aislamiento, caracterización y diferenciación de células cardiacas desde el corazón de ratón adulto

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DOI:

10.3791/58448

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7 de enero de 2019

Santosh K. Yadav¹ , Paras K. Mishra¹^,²

¹Department of Cellular and Integrative Physiology, University of Nebraska Medical Center, ²Department of Anesthesiology, University of Nebraska Medical Center

En este artículo

Resumen

El objetivo general de este artículo es estandarizar el protocolo para el aislamiento, caracterización y diferenciación de células madre cardiacas (CSCs) desde el corazón de ratón adulto. Aquí, describimos un método de centrifugación del gradiente de densidad para aislar las CMC murinas y métodos elaborados por la cultura, la proliferación y la diferenciación en cardiomiocitos de CSC.

Resumen

Infarto de miocardio (IM) es una causa importante de morbilidad y mortalidad en el mundo. Una meta importante de la medicina regenerativa es reponer el miocardio muerto después de MI. Aunque se han utilizado varias estrategias para regenerar el miocardio, terapia de células madre sigue siendo un enfoque importante para reponer el miocardio muerto de un corazón de MI. La acumulación de pruebas sugiere la presencia de células cardíacas residentes (CSCs) en el corazón de adultos y sus efectos endocrinos o paracrinos en la regeneración cardiaca. Sin embargo, aislamiento de CSC y su caracterización y diferenciación hacia células del miocardio, especialmente cardiomiocitos, sigue siendo un desafío técnico. En el presente estudio, nos proporciona un método simple para el aislamiento, caracterización y diferenciación de las CMC desde el corazón de ratón adulto. Aquí, describimos un método de gradiente de densidad para aislamiento de CSC, donde se digiere el corazón por una solución de 0,2% colagenasa II. Para caracterizar las CSCs aislados, se evaluó la expresión de marcadores de CSCs cardíaca Sca-1, NKX2-5 y GATA4 y marcadores de pluripotencia/troncalidad OCT4, SOX2 y Nanog. También determinamos el potencial de proliferación de las CMC aislados por cultivo en una placa de Petri y la evaluación de la expresión del marcador de proliferación Ki-67. Para evaluar el potencial de diferenciación de las CMC, se seleccionaron siete a diez días cultivadas CSCs. Nos trasladaron a una nueva placa con un medio de diferenciación de cardiomiocitos. Se incuban en una incubadora de cultivo celular de 12 días, mientras que el medio de diferenciación se cambia cada tres días. El CSC diferenciada expresa marcadores específicos de cardiomiocitos: actinina y troponina I. Así, CSCs aislados con este protocolo tienen troncalidad y marcadores cardiacos, y tienen un potencial de proliferación y diferenciación hacia linaje de cardiomiocitos.

Introducción

Enfermedad isquémica del corazón, incluyendo infarto de miocardio (IM), es una causa importante de muerte en el mundo¹. Terapia de células madre para regenerar el miocardio muerto sigue siendo un enfoque principal para mejorar la función cardiaca de un MI corazón²^,³^,⁴^,⁵. Se han utilizado diferentes tipos de células madre para reponer el miocardio muerto y para mejorar la función cardiaca de un corazón de MI. Pueden categorizar ampliamente en células madre embrionarias⁶ y adulto células de vásta....