La proteína interactuable ZW10 (ZWINT) participa en el punto de control del husillo mitético y en la patogénesis del carcinoma. Aquí, introducimos una metodología de inmunomanchades de ZWINT en tejidos de cáncer de pulmón humano, seguida de la exploración digital de diapositivas enteras y análisis de imágenes. Esta metodología puede proporcionar imágenes digitales de alta calidad y resultados fiables.
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Artículo de método
Análisis digital de inmunomanchado de ZW10 Interacción de proteínas en tejidos pulmonares humanos
En este artículo
Resumen
Resumen
El propósito de este estudio es introducir una metodología de inmunomancha de los tejidos pulmonares humanos, seguida de un escaneo digital completo y análisis de imágenes. El escaneo digital es una forma rápida de escanear una pila de diapositivas y producir imágenes digitales con alta calidad. Puede producir resultados concordantes con la microscopía de luz convencional (CLM) por patólogos. Además, la disponibilidad de imágenes digitales hace posible que varias personas puedan observar simultáneamente la misma diapositiva. Además, las imágenes digitales de diapositivas se pueden almacenar en una base de datos, lo que significa que se evita el deterioro a largo plazo de las diapositivas de vidrio. Las limitaciones de esta técnica son las siguientes. En primer lugar, necesita tejido preparado de alta calidad y los toboganes originales de inmunohistoquímica (IHC) sin ningún daño o exceso de residuos de sellador. En segundo lugar, las áreas tumorales o no tumorales deben ser especificadas por patólogos experimentados antes del análisis utilizando software, con el fin de evitar cualquier confusión sobre el tumor o áreas no tumorales durante la puntuación. En tercer lugar, el operador necesita controlar la reproducción del color durante todo el proceso de digitalización en imágenes de diapositivas enteras.
Introducción
La proteína interactuable ZW10 (ZWINT) es un componente necesario del complejo kinetochore que participa en el punto de control del husillo mitotico1,2,3. Se ha informado de que el agotamiento de ZWINT conduce a una segregación prematura de cromosomas aberrante1,2,3. Estudios recientes han sugerido que ZWINT participa en la patogénesis de múltiples tumores promoviendo la proliferación de células tumorales4,5. Hemos informado ....
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Protocolo
Todos los métodos descritos aquí han sido aprobados por el Comité Ético del Hospital Zhongnan de la Universidad de Wuhan y el Hospital Renmin de la Universidad de Wuhan.
1. Preparación de diapositivas IHC
- Fijar la muestra de tejido pulmonar sumergiendo el fragmento de tejido pulmonar humano (alrededor de 3 x 3 cm) en 4% de paraformaldehído en solución salina con fosfato (PBS) durante 24 horas a temperatura ambiente (RT).
- Deshidratar el tejido en 80%, 95% y 100% etanol durante 15 min, 20 min y 20 min, respectivamente, a temperatura ambiente. Finalmente, sumerja el tejido en 100% xileno 3x durante 20 min cada uno a tempera....
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Resultados
Medimos los niveles de expresión de ZWINT en 28 pares de muestras de cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) (tejidos tumorales y no tumorales adyacentes), incluyendo 14 carcinomas de células escamosas (SCC) y 14 adenocarcinomas (ACC), de IHC. El escaneo digital de diapositivas de diapositivas proporcionó imágenes digitales de alta calidad (Figura1A). Los resultados mostraron que la puntuación H del cáncer de pulmón fue significativamente mayor que la.......
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Discusión
El escaneo de diapositivas enteras se está convirtiendo en un tema candente por su análisis robusto y la producción de imágenes de alta calidad con fines clínicos y de investigación11,12,13. Las imágenes pueden ser producidas por microscopios de escaneo deslizante en minutos11,12,13. Mediante la aplicación de esta metodología, obtuvimos.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este proyecto fue apoyado por la National Natural Foundation of China (No. 81500151, 81400121, 81270607, 81541027 y 81501352) y la Fundación Natural de la Provincia de Hubei (China) (No. 20177CFB631). Los autores expresan su agradecimiento a Guo Qin, Chang Min, Li Hui, y sus colegas de Wuhan Google Biological Technology Co., LTD por su apoyo técnico. Los autores también agradecen a Muhammad Jamal por la edición del lenguaje.
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Pannoramic MIDI | 3D HISTECH | Cat: PMIDI-040709 | Un escáner de diapositivas digital automatizado con un conjunto de características notables: capacidad de 12 diapositivas, escaneo de fluorescencia y muchas más. |
| QuantCenter | 3D HISTECH | Descargado de la página web oficial de la empresa | El marco para las aplicaciones de análisis de imágenes de 3DHISTCH. |
| LEICA RM2235 | Leica Microsystems | Cat: 14050038604 | La precisión mejorada de los nuevos accesorios añadirá comodidad para el enfoque de bloqueo a cuchilla, así como para la orientación de la muestra. |
| Anticuerpo anti-ZWINT anti-humano de conejo | Abcam | Cat: ab197794 | Análisis inmunohistoquímico de ZWINT en tejido pulmonar humano. |
| Anticuerpo secundario anti-conejo | Wuhan Goodbio Technology | Cat:GB23303-1 | Anticuerpo secundario para la tinción de IHC. |
| Solución salina tamponada con fosfato | Wuhan Goodbio Technology | Cat:G0002 | Una solución que contiene un tampón de fosfato. |
| OLYMPUS CX23 | OLYMPUS | Cat:6M87620 | Microscopio para la detección de H& Portaobjetos E o IHC. |
| Dimetilbenceno | Shanghai Lingfeng Reactivo químico | Cat:1330-20-7 | Un fluido incoloro e inflamable utilizado como solvente y agente clarificante en la preparación de secciones de tejido para estudio microscópico. |
| Solución de tinción de hematoxilina | Servicio de Wuhanbiotecnología | Cat: G1039 | Se usa comúnmente para estudios histológicos, a menudo colorea los núcleos de las células de azul. |
| Tween 20 | Baitg | Cat:2005-64-5 | Es un tensioactivo no iónico de tipo polisorbato formado por la etoxilación del sorbitán antes de la adición de ácido láurico. Se utiliza como disuasivo y emulsionante en aplicaciones farmacológicas. |
| Líquido reparador de ácido cítrico | Wuhan Servicebio technology | Cat: G1202 | Is se utiliza para reparar el antígeno después de la fijación durante el procedimiento IHC. |
| LEICA ASP200s | Leica | Cat: 14048043626 | Fue diseñado para la histopatología de rutina e investigación de hasta 200 casetes. |
| LEICA Arcadia H | Leica | Cat: 14039354103 | Es una estación de inclusión de parafina calentada y permite un funcionamiento sencillo y un control preciso, lo que se traduce en una calidad mejorada, un flujo de trabajo fluido y fiabilidad. |
| LEICA Arcadia C | Leica | Cat: 14039354102 | Es una placa fría que contiene más de 60/65 casetes en su gran superficie de trabajo. Fue diseñado con un módulo de control adaptable al entorno para garantizar que la temperatura de funcionamiento siempre se estabilice a -6 °C. |
| Software CaseViewer | 3DHISTECH |
Referencias
- Endo, H., Ikeda, K., Urano, T., Horie-Inoue, K., Inoue, S. Terf/TRIM17 stimulates degradation of kinetochore protein ZWINT and regulates cell proliferation. The Journal of Biochemistry. 151 (2), 139-144 (2012).
- Wang, H., et al.
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Reimpresiones y permisos
