Decellularized andamios derivados de cartílago pueden utilizarse como un andamio para reparación de cartílago de guía y como medio para regenerar tejido osteocondral. Este documento describe el proceso de descelularización en detalle y ofrece sugerencias para utilizar estos andamios en configuración in vitro.
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Artículo de método
Fabricación de andamios de Decellularized derivados de cartílago matriz
En este artículo
Resumen
Resumen
Los defectos osteocondrales carecen de suficiente capacidad de reparación intrínseca a regenerar el tejido óseo y cartílago funcionalmente sano. En este sentido, investigación de cartílago se ha centrado en el desarrollo de andamios regenerativos. Este artículo describe el desarrollo de andamios completamente derivadas de la matriz extracelular del cartílago natural, procedente de un donante de equino. Posibles aplicaciones de las matrices de soporte incluyen producción de aloinjertos para reparación de cartílago, que sirve como un andamio para tejido osteocondral ingeniería y proporcionando modelos in vitro para estudiar la formación del tejido. Por decellularizing el tejido, las células del donante se retiran, pero muchas de las señales naturales bioactivas se piensan para ser retenido. La principal ventaja de utilizar un andamio tan natural en comparación con un andamio sintético producido es que ninguna otra funcionalización de polímeros se requiere para regeneración de tejido osteocondral en coche. Los andamios derivados de cartílago matriz pueden utilizarse para la regeneración de tejido óseo y cartílago en entornos tanto in vivo como in vitro.
Introducción
Defectos del cartílago articular de la rodilla causada por eventos traumáticos pueden conducir a molestias y sobre todo pueden tener un gran impacto en la vida de la población joven y activa1,2,3. Por otra parte, daño del cartílago en una edad joven puede llevar a un inicio más rápido de la osteoartritis más adelante en vida4. Actualmente, la única terapia de salvamento para la osteoartritis generalizada de la rodilla es la cirugía de reemplazo articular. Como el cartílago es un tejido avascular, hipocelulares y aneural, su capacidad de regeneración es....
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Protocolo
Este protocolo, se obtuvo cartílago equino Babilla de caballos que habían muerto de otras causas de artrosis. Tejido se obtuvo con el permiso de los propietarios, conforme a las normas éticas institucionales.
Nota: Este protocolo describe la fabricación de andamios de decellularized cartílago equino, que puede utilizarse para aplicaciones tales como plataformas de cultivo de tejidos in vitro o en vivo la implantación de estrategias de la medicina regenerativa. Los pasos de tratamiento enzimático deben realizarse en el orden cronológico descrito.
1. recolección de cartílago Articul....
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Resultados
Descelularización de MDL andamios siempre debe ser confirmada usando los stainings histológicos, así como uso de cuantificación de ADN para medir la cantidad de restos de ADN. Descelularización insuficiente puede llevar a respuestas inmunológicas no deseadas que influyen en los resultados en entornos en vivo15,16,17. Para este método específico descelularización, ADN fue por debajo del rango de d.......
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Discusión
El ECM del cartílago articular es muy densa y bastante resistente a diversos tratamientos enzimáticos. El protocolo de la descelularización de varios pasos descrito en este artículo aborda de esa resistencia y con éxito genera matrices decellularized. Para ello, el proceso se extiende durante varios días. Muchos procesos de descelularización han sido propuestos para los diferentes tipos de tejidos18, y este artículo describe un protocolo adecuado para la descelularización de cartílago. En este pro.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros que compiten.
Agradecimientos
Los autores desean reconocer arranque W. asistencia en la producción de los andamios. K.E.M. dobladores es apoyado por el Alexandre Suerman Stipendium de la University Medical Center. Levato R. y J. Malda son apoyados por la fundación holandesa de artritis (conceder acuerdos CO-14-1-001 y LLP-12, respectivamente).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| cadavérica | : Se puede obtener como material de descanso en la carnicería o centro veterinario local. | ||
| Solución salina estéril tamponada con fosfato (PBS) | |||
| Penicilina-Estreptomicina | Gibco | 15140 | |
| Anfotericina B | Thermo Fischer Scientific 15290026 | ||
| Nitrógeno | |||
| Tripsina-EDTA (0,25%), rojo de fenol | Thermo Fischer Scientific | 25200072 | |
| Tris-HCl pH 7,5 | |||
| Desoxirribonucleasa I del páncreas bovino | Sigma-Aldrich | DN25 | |
| Ribonucleasa A del páncreas bovino | Sigma-Aldrich | R6513 | |
| Triton X-100 (octoxynol-1) | Sigma-Aldrich | X100 | |
| Papaína | Sigma-Aldrich | P3125 | |
| Citrato trisódico dihidratado | Sigma-Aldrich | S4641 | |
| Alginato | Sigma-Aldrich | 180947 | |
| Formalina | |||
| CaCl2 | |||
| etanol | |||
| Xileno | |||
| Parafina | |||
| Esterilización por óxido de etileno | Synergy Health, Venlo, Países Bajos | ||
| Las células estromales multipotentes | Las MSC y los condrocitos se pueden aislar de las articulaciones del donante que son material de reposo, procedente de la carnicería o centro veterinario local. | ||
| MEM alfa | Thermo Fischer Scientific | 22561 | |
| Ácido L-ascórbico 2-fosfato | Sigma-Aldrich | A8960 | |
| DMEM | Thermo Fischer Scientific | 41965 | |
| Albúmina sérica bovina inactivada por calor | Sigma-Aldrich 10735086001 | ||
| Factor de crecimiento de fibroblastos-2 (FGF-2) | R & Kit | de ADN D Systems 233-FB | |
| (Quant-iT PicoGreen dsDNA Reagent) | Thermo Fischer Scientific | P7581 | |
| Azul de 1,9-dimetil-metileno cloruro de zinc doble sal | Sigma-Aldrich | 341088 | |
| liofilizador | SALMENKIPP ALPHA | 1-2 LD plus | |
| Molino analítico | IKA | A 11 mortero básico | |
| Haldenwanger 55/0A | |||
| Plato de rodillo | CAT | RM5 | |
| Centrífuga (para tubos de 50 mL) | Eppendorf | 5810R | |
| Cápsula (molde cilíndrico) | TAAB | 8 mm plano | |
| Superlite S UV | Lumatec | 2001AV | |
| Microtomo | |||
| Tamiz (tamaño de malla 0,71 mm) | Bisturí | ||
| Soporte para | |||
| Cucharón |
Referencias
- Dunlop, D. D., et al. Risk factors for functional decline in older adults with arthritis. Arthritis and rheumatism. 52 (4), 1274-1282 (2005).
- Fitzpatrick, K., Tokish, J. M. A military perspective to articular cartilage defects. The journal of knee surger....
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Reimpresiones y permisos
