El componente de complemento C1q es una molécula proinflamatoria altamente expresada en el microambiente tisular que puede interactuar con la matriz extracelular. Aquí, describimos un método para probar cómo C1q unido al ácido hialurónico afecta la adhesión celular.
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Artículo de método
Evaluación de la interacción entre el complemento proteína C1q y el ácido hialurónico en la promoción de la adhesión celular
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Resumen
Resumen
Se ha demostrado cada vez más que el microambiente tumoral desempeña un papel activo en el crecimiento de la neoplasia y la metástasis. A través de diferentes vías, las células tumorales pueden reclutar eficientemente células estromales, inmunes y endoteliales mediante el secreto de factores estimulantes, quimioquinas y citoquinas. A su vez, estas células pueden alterar las propiedades de señalización del microambiente mediante la liberación de señales, metabolitos y componentes de matriz extracelular que promueven el crecimiento para mantener una alta proliferación y competencia metastásica. En este contexto, identificamos que el componente de complemento C1q, altamente expresado localmente por una serie de tumores malignos humanos, al interactuar con la matriz extracelular de ácido hialurónico, afecta fuertemente el comportamiento de las células primarias aisladas del tumor humano Especímenes. Aquí, describimos un método para probar cómo C1q unido al ácido hialurónico (HA) afecta la adhesión de las células tumorales, subyacente al hecho de que las propiedades biológicas de los componentes clave de la matriz extracelular (en este caso HA) pueden ser moldeadas por señales bioactivas hacia el tumor Progresión.
Introducción
El microambiente tumoral (TME) influye en el desarrollo y la progresión del cáncer, ya que puede proporcionar un nicho permisivo para la supervivencia celular, el crecimiento y la invasión. La identificación de nuevos actores clave en TME puede ser útil para el descubrimiento de nuevas herramientas moleculares para la terapia diana. TME incluye una red compleja y dinámica de células no malignas, como células endoteliales, fibroblastos y células del sistema inmunitario, incrustadas en los componentes de la matriz extracelular (ECM) circundantes, incluyendo colágenos, laminines, fibronectinas, proteoglicanos e hialuronanos. Tanto las células tumorales como las no tumora....
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Protocolo
Las muestras de tejido de los pacientes fueron recogidas después del consentimiento informado tras la aprobación de las consideraciones éticas por el Consejo Institucional del Hospital Universitario de Trieste, Italia.
1. Aislamiento y cultivo de células tumorales (Día 1)
- Aísle las células del mesotelioma humano de las muestras sólidas de MPM. Picar finamente el tejido con un cortador para obtener fragmentos de aproximadamente 2-3 mm2 de tamaño e incubar en 5 ml de solución de digestión compuesta por la Solución De Sal Equilibrada (HBSS) de Hanks complementada con 0,5 mM Ca2+/Mg2+,0,5% de trippsina....
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Resultados
La HA es un polisacárido de alto peso molecular cargado negativamente, que se compone de unidades de disacárido de repetición (1-4)-D-glucurónico-(-,1-3)-N-acetil-D-glucosamina disacárido (Figura1B)7. La aparición de la unión de HA en la placa de 96 pocillos, así como la eficiencia de su inmovilización se probaron aprovechando el HA biotinilado (bio-HA). Las diferentes concentraciones de Bio-HA, que van desde 10 g/ml a 1 mg/ml, se resu.......
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Discusión
Describimos un método fácil para investigar cómo el componente de complemento C1q, interactuando con el ácido hialurónico, es capaz de modular el comportamiento de las células primarias aisladas de los tejidos tumorales humanos. Tanto HA como C1q están abundantemente presentes en el microambiente tisular tanto en condiciones fisiológicas como patológicas, participando en varios procesos biológicos celulares. Por ejemplo, se ha demostrado que C1q está presente en el microambiente de la placenta, donde favorece la invasión.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que la investigación se llevó a cabo en ausencia de cualquier relación comercial o financiera que pudiera interpretarse como un posible conflicto de intereses.
Agradecimientos
Agradecemos a Ivan Donati por proporcionar ha, Leonardo Amadio, Gabriella Zito (Departamento de Ginecología de IRCCS "Burlo Garofolo", Trieste, Italia) y Andrea Romano (Unidad Clínica Operativa de Anatomía e Histología Patológica, Hospital Cattinara, Trieste, Italia ) para la recogida de muestras de tejido. Agradecemos también a Nicolá Morosini por la ayuda en la preparación del video y a Alex Coppola, la voz. Este trabajo fue apoyado por subvenciones del Instituto de Salud Maternoinfantil, IRCCS "Burlo Garofolo", Trieste, Italia (RC20/16) y Fondazione Cassa di Risparmio Trieste a R.Bulla.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 100 y micro; m filtro de poros | BD Falcon | 352360 | |
| Solución de anfotericina B (fungizona) | Sigma-Aldrich | 1397-89-3 | |
| básico FGF | Ciencias Inmunológicas | GRF-15595 | |
| Cloruro de calcio | Sigma-Aldrich | C-4901 | |
| Colagenasa tipo I | Worthington Biochemical Corporation, DBA | MX1D12644 | |
| D-Glucosa | Sigma-Aldrich | 50-99-7 | |
| DNasa I | Roche | 10 104 159 001 | |
| EDTA | Sigma-Aldrich | 60-00-4 | |
| EGF | Ciencias Inmunológicas | GRF-10544 | |
| FAST DiI | Sondas moleculares, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific | D7756 | |
| Suero fetal bovino | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 10270-106 | |
| Fibronectina | Roche | 11051407001 | |
| Matraz para cultivo celular | Corning | 430639 | estéril y ventilada |
| Sigma-Aldrich | G1397-10ML | ||
| Hank' s Solución salina equilibrada (HBBS) | Sigma-Aldrich | H6648 | Suplementado con EDTA, glucosa, penicilina-estreptamicina, gentamicina y fungizone |
| Ácido hialurónico de alto peso molecular | Amable regalo del Prof. Ivan Donati | ||
| libre de suero endotelial humano | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 11111-044 | Suplementado con EGF (5 ng/mL), FGF básico (10 ng/mL), y 1% de penicilina y ndash; estreptomicina (Sigma-Aldrich) |
| Cloruro de magnesio | Carlo Erba | 13446-18-9 | |
| Medio 199 con Hank' s sal | Sigma-Aldrich | M7653 | |
| Penicilina-Estreptomicina | Sigma-Aldrich | P0781 | |
| Microscopía time-lapse | Nikon | Sistema de imagen BioStation IM-Q | |
| Titertek Multiskan ELISA Reader | Flow Labs | ||
| Trypsin | , Sigma-Aldrich | T4674 |
Referencias
- Zamboni, F., Vieira, S., Reis, R. L., Oliveira, J. M., Collins, M. N. The potential of hyaluronic acid in immunoprotection and immunomodulation: Chemistry, processing and function. Progress in Materials Science. 97, 97-122 (2018).
- Lorusso, G., Ruegg, C.
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Reimpresiones y permisos
