Se describe un método para evaluar el efecto de la inmunidad preexistente contra el virus del dengue en la infección del virus Zika mediante el uso de suero humano, las células humanas primarias y cuantificación de la infección por reacción en cadena cuantitativa de la polimerasa en tiempo real.
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Artículo de método
Cuantificación de estimulación dependiente de los anticuerpos del Virus Zika en células humanas primarias
En este artículo
Resumen
Resumen
La reciente aparición del flavivirus Zika y complicaciones neurológicas, tales como síndrome de Guillain-Barré y microcefalia en los bebés, ha llevado a preocupaciones graves de seguridad pública. Entre los factores de riesgo, estimulación dependiente de anticuerpos (ADE) representa la amenaza más significativa, como el reciente resurgimiento del virus Zika (ZIKV) es principalmente en las zonas donde la población ha estado expuesta y está en un estado de inmunidad previa a otros estrechamente relacionados flaviviruses, especialmente el virus del dengue (DENV). Aquí, describimos un protocolo para cuantificar el efecto de los anticuerpos del suero humano contra DENV en infección por ZIKV en las células humanas primarias o líneas celulares.
Introducción
Entre las enfermedades virales transmitidas por mosquitos, la infección Zika es uno de los más clínicamente importantes1. La infección es causada por un flavivirus ZIKV que, en la mayoría de los casos, Aedes aegypti el vector primario1,2. Sin embargo, hay estudios que han reportado Aedes albopictus como vector primario en algunos brotes ZIKV3. Aunque la infección es asintomática en muchos casos, los síntomas más comunes son fiebre, dolor de cabeza y musculares dolor2. No existe ninguna cura o una vacuna para la infección ....
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Protocolo
Las muestras de suero utilizadas en este estudio se obtuvieron de los humanos participantes de una cohorte de Columbia. Recogida de la muestra fue aprobada por la Junta de revisión interna (IRB) en Universidad de Pamplona (Colombia, América del Sur) y Los Potios Hospital8. Las muestras se anónimamente y los investigadores no tenían acceso a información para el paciente. Se revisaron las muestras de suero para el serotipo DENV. Las muestras más fueron confirmadas para neutralizar la infección por DENV in vitro. Para el control, se utilizaron muestras de suero de individuos sanos (HC) de los Estados Unidos.
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Resultados
En la figura 1, hay una ilustración diagramática paso a paso de todos los pasos necesarios para llevar a cabo el protocolo de ADE. Es un diagrama esquemático mostrando el procedimiento entero de ADE de ZIKV debido a inmunidad preexistente a DENV. La figura 2 muestra cómo humano suero muestras se categorizaron en tres grupos diferentes: muestras de la infección confirmada de DENV se refieren como el grupo de infectados con DENV, D.......
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Discusión
Reactividad cruzada de anticuerpos contra DENV hacia ADE de otros serotipos DENV ha obstaculizado el desarrollo de una vacuna eficaz11. ZIKV pertenece a la misma familia, Flaviviridae y tiene una considerable homología con otros flaviviruses, especialmente DENV12. El objetivo principal de anticuerpos neutralizantes por ZIKV y DENV es la proteína, que comparte una homología de secuencia estructural y cuaternario muy alto entre los dos virus13,
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que declarar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado generosamente por 1R21AI129881-01 (a Interpetative), fondos de puesta en marcha de los laboratorios nacionales de emergentes infecciosas enfermedades y la escuela de medicina de la Universidad de Boston.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Suero fetal bovino | GEMINI | 100-106 | |
| iCycler | BioRad | 785BR02188 | N.º de modelo Módulo óptico CFX96 |
| Microfuge 18 Centrífuga | Beckman Coulter | 367160 | |
| Nanodrop-1000 | Termocientífico | 1072 | |
| Quantifast SYBR-Kit de RT-PCR de un solo paso | Qiagen | 204154 | RT-qPCR |
| RNeasy de 1 paso | Qiagen | 74106 | Utilizado para la extracción de ARN |
| RPMI-medium | Gibco | 11875093 |
Referencias
- Hayes, E. B. Zika virus outside Africa. Emerging Infectious Diseases. 15, 1347-1350 (2009).
- Grard, G., et al. Zika virus in Gabon (Central Africa) - 2007: a new threat from Aedes albopictus. PLoS Neglected Tropical Diseases. 8 (2), ....
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Reimpresiones y permisos
