Establecimiento de líneas de células Overexpressing DR3 para evaluar la respuesta apoptótica a la terapéutica anti-mitotic

Xin Wang; Jiamin Zhou; Chen Qi; Gelin Wang

doi:10.3791/58705

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Artículo de método

Establecimiento de líneas de células Overexpressing DR3 para evaluar la respuesta apoptótica a la terapéutica anti-mitotic

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DOI:

10.3791/58705

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11 de enero de 2019

Xin Wang ^*¹ , Jiamin Zhou^*² , Chen Qi^*¹ , Gelin Wang¹^,³

¹School of Pharmaceutical Sciences, Tsinghua University, ²Department of Radiology, University of California, San Francisco, ³Beijing Advanced Innovation Center for Structural Biology

^* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Estableciendo una línea estable de células overexpressing un gen de interés para el estudio de funciones de los genes puede hacerse estables recogida de transfección clones solo después de la transferencia de ellos a través de la infección retroviral. Aquí mostramos que las líneas de celulares HT29-DR3 generadas de esta manera dilucidar los mecanismos por el cual la muerte receptor 3 (DR3) contribuye a la apoptosis inducida por antimitotics.

Resumen

Estudiar la función de un gen de interés se logra mediante la manipulación de su nivel de expresión, como su expresión con líneas celulares de sobreexpresión de aumentando o disminuyendo su expresión con líneas celulares de precipitación. Transfección transitoria y estable son dos métodos que se utilizan para la expresión de genes exógenos. Transitorios de la transfección sólo es útil para la expresión a corto plazo, mientras que la transfección estable permite genes exógenos a integrarse en el genoma de la célula huésped donde se se expresa continuamente. Como resultado, la transfección estable se emplea generalmente para la investigación en regulación genética a largo plazo. Aquí describimos un protocolo simple para generar una línea celular estable overexpressing muerte etiquetado receptor 3 (DR3) para explorar la función DR3. Seleccionamos clones solo después de una infección retroviral para mantener la homogeneidad y la pureza de las líneas celulares estables. Las líneas celulares estables generadas mediante este protocolo representan células HT29 DR3-deficiente sensibles a drogas antimitótica, reconstituyendo así la respuesta apoptótica en células HT29. Además, la etiqueta de la bandera en DR3 compensa la falta de buena anticuerpo DR3 y facilita el estudio bioquímico del mecanismo molecular por el cual agentes antimitótica inducen apoptosis.

Introducción

Expresión de genes heterólogos se emplea a menudo para estudiar la función de los genes de interés. Dos métodos, transfección transitoria y estable, se utilizan predominantemente en las células y biología molecular para insertar un segmento de ADN o ARN en un anfitrión célula¹^,². Transitorio transfected ADN o ARN no puede transmitirse a células de la hija, por lo que la alteración genética puede conservarse sólo durante un período corto de tiempo. Por otra parte, en las células transfected estable, genes exógenos se integran en el genoma de la célula anfitrión, mantener su expresión en la línea celular. Así, l....