Aquí, presentamos tres diferentes experimentos para estudiar la infección por Aeromonas en C. elegans. Usando estos métodos convenientes, es fácil evaluar la toxicidad entre y dentro de las especies de Aeromonas .
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Artículo de método
Evaluación de la virulencia y patogenia de la infección por Aeromonas en un modelo elegans de Caenorhabditis
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Resumen
Resumen
El patógeno humano Aeromonas se ha demostrado clínicamente para causar gastroenteritis, infecciones de heridas, septicemia y las infecciones del tracto urinario. Enfermedades más humanas se han divulgado para ser asociado de cuatro especies de bacterias: Aeromonas caviae, Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophilay Aeromonas veronii. El organismo modelo Caenorhabditis elegans es un bacterivore que proporciona un modelo de infección excelente por que estudiar la patogénesis bacteriana de Aeromonas. Aquí, presentamos tres diferentes experimentos para estudiar la infección por Aeromonas utilizando un modelo de C. elegans , incluyendo supervivencia, toxicidad líquida y ensayos de necrosis muscular. Los resultados de los tres métodos de determinación de la virulencia de Aeromonas eran constantes. A. dhakensis fue demostrado para ser el más tóxico entre las 4 principales especies de Aeromonas causando infecciones clínicas. Estos métodos aparecen para ser una forma conveniente para evaluar la toxicidad entre y dentro de las especies de Aeromonas y contribuir a la comprensión de la patogenia de la infección por Aeromonas .
Introducción
El patógeno humano, Aeromonas, se ha demostrado clínicamente para causar gastroenteritis, infecciones de heridas, septicemia y las infecciones de vías urinarias1,2. Más enfermedades humanas asociadas se han divulgado para ser asociado a cuatro especies bacterianas: Aeromonas caviae , Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophilay Aeromonas veronii 2,3 , 4 , 5. entre las enfermedades infecciosas Aeromonas , infecciones de tejidos bland....
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Protocolo
1. preparación de medio de cultivo
Nota: Ver tabla 1 para la preparación de la solución.
- Para preparar el medio M912, disolver 1.5 g de KH2PO4, 5,66 g de Na2HPO4y 2.5 g de NaCl en 500 mL de agua desionizada. Autoclave a 121 ° C durante 20 min esperar hasta que haya enfriado a temperatura ambiente y añadir 0,5 mL de 1 M MgSO4 antes del primer uso.
- Para preparar el crecimiento de nematodos medio (NGM)12, disolver 3 g de NaCl, 2.5 g peptona bacteriana y agar 20 g en 1 L de agua desionizada. Autoclave a 121 ° C durante 20 m....
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Resultados
Siguiendo los protocolos descritos anteriormente, es fácil diferenciar la toxicidad de las cuatro cepas de Aeromonas . El ensayo de supervivencia de C. elegans se muestra en la figura 1. Las tasas de supervivencia de C. elegans infectados con especies de Aeromonas , se muestra en la orden de alta a la baja fueron: a. caviae, a. veronii y a. hydrophila y a. dhakensis. Aunque existe diversidad en cuanto a la.......
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Discusión
C. elegans es un nematodo de bacterivorous que naturalmente las bacterias de las tomas como alimento y ha desarrollado una inmunidad innata complicado a las bacterias durante su proceso evolutivo. Dos de los principales órganos mantener y apoyar la inmunidad son la epidermis y el intestino9,13. La epidermis y bandas de músculo de C. elegans se asemejan a las estructuras de tejido blando en los mamíferos y los seres humanos6
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Estamos muy agradecidos por la ayuda de la instalación de base de C. elegans en Taiwán y en la microbiología de diagnóstico y aísla los antimicrobianos resistencia laboratorio de nacional Cheng Kung University Hospital para proporcionar la Aeromonas . También reconocemos el centro de genética de Caenorhabditis (CGC) y la WormBase. También agradecemos a Savana Moore para editar el manuscrito.
Este estudio fue parcialmente financiado por becas del Ministerio de ciencia y tecnología de Taiwán (más 105-2628-B-006-017-MY3) y el Hospital de la Universidad Nacional Cheng Kung (NCKUH-10705001) a P.L. Chen.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Incubadora agitadora | YIH DER | LM-570R | Incubación de bacterias |
| K2HPO4 | J.T.Baker | MP021519455 | Preparación del medio de cultivo |
| KH2PO4 | J.T.Baker | 3246-05 Preparación del | medio de cultivo |
| Na2HPO4 | J.T.Baker | MP021914405 | Preparación del medio de cultivo |
| NaCl | SIGMA | 31434 | Preparación del medio de cultivo |
| MgSO4 | SIGMA | M7506 | Preparación del medio de cultivo |
| agar | Difco | 214530 | Preparación del medio de cultivo |
| CaCl2 | SIGMA | C1016 | Preparación del medio de cultivo |
| colesterol | SIGMA | C8503 | Preparación del medio de cultivo |
| etanol | SIGMA | 32205 | Preparación del medio de cultivo |
| KOH | SIGMA | P5958 | Preparación del medio de cultivo |
| Placa de Petri de 6 cm | ALPHA PLUS | 46 | preparación de la placa de agar |
| placa de 96 pocillos | FALCON | 353072 | ensayo líquido |
| peptona bacteriana | Affymetrix/USB | AAJ20048P2 | Preparación del medio de cultivo |
| extracto de levadura | SIGMA | 92144 | Preparación del medio de cultivo |
| ácido cítrico y toro; H2O | SIGMA | C1909 | Preparación del medio de cultivo |
| citrato tripotásico y toro; H2O | SIGMA | 104956 | Preparación del medio de cultivo |
| FudR | SIGMA | 1271008 | Preparación del medio de cultivo |
| EDTA disódico | SIGMA | E1644 | Preparación del medio de cultivo |
| FeSO4• 7 H2O | SIGMA | 215422 Preparación del medio de cultivo | |
| MnCl2• 4 H2O | SIGMA | 221279 Preparación del medio de cultivo | |
| ZnSO4• 7 H2O | SIGMA | 204986 Preparación del medio de cultivo | |
| CuSO4• 5 H2O | SIGMA | C8027 | Preparación del medio de cultivo |
| triptona | SIGMA | 16922 | Preparación del medio de cultivo |
| Sistema de microscopio | Nikon | Eclipasa Ti invertida | Imágenes de microscopio |
| Cámara CCD científica | QImaging | Retiga-2000R Rápido 1394 | Imágenes de microscopio |
Referencias
- Parker, J. L., Shaw, J. G. Aeromonas spp. clinical microbiology and disease. Journal of Infection. 62 (2), 109-118 (2011).
- Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. Skin and soft-tissue infections caused by Aeromonas species.....
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Reimpresiones y permisos
