En este protocolo, describimos el proceso completo de gafas de inducción en ratones usando nuevo diseñada experimental de miopía y la técnica necesaria para el logro de resultados estables y reproducibles en las mediciones de parámetros oculares.
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Artículo de método
Aplicación y evaluación de un modelo murino de miopía Experimental
En este artículo
Resumen
Resumen
Modelo murino de la miopía puede ser una poderosa herramienta para la investigación de la miopía debido a la relativamente fácil manipulación genética. Una forma de inducir miopía en animales es poner claro menos lentes al frente de los ojos durante semanas (inducida por la lente de miopía, LIM). Sin embargo, han conservado protocolos de inducción y evaluación varían de laboratorio a laboratorio. Aquí, describimos un método muy práctico y reproducible para inducir anteojos LIM en ratones con nuevo diseñada. Las correcciones del método el objetivo estable frente a los ojos de ratón mientras que permite la lente a quitarse para la limpieza o tópico drogas administración. El fenotipo es robusto y eficiente, y la varianza es pequeña. El método aquí descrito puede aplicarse a los ratones justo después del destete que extiende la duración posible para los experimentos. También dimos técnica aconseja para lograr resultados reproducibles en refracción y medición de longitud axial. Esperamos el protocolo paso a paso descrito aquí y el artículo detallado puede ayudar a los investigadores a realizar experimentos de miopía con miopía más suavemente y hacer los datos comparables entre laboratorios.
Introducción
La prevalencia de la miopía ha aumentado drásticamente recientemente, mientras que el mecanismo de su aparición y la progresión son todavía en gran parte desconocido1. El fenotipo más característico de la miopía es el alargamiento de la longitud axial (AL), que aumenta el riesgo de complicaciones retinianas o incluso ceguera2. Para mejor comprender la patogénesis de la miopía y desarrollar tratamientos eficaces, robustos modelos animales miopes y evaluación del fenotipo estable son necesarios.
Brevemente, existen dos métodos para inducir estados miopes en animales: forma privación miopía (FDM)....
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Protocolo
Todos los procedimientos fueron aprobados por el Comité de ética en investigación Animal de la Facultad de medicina de la Universidad de Keio se adhirió a la declaración de ARVO para el uso de animales en oftálmica y la investigación de visión, las directrices institucionales sobre animales de experimentación en Keio Universidad y la investigación Animal: informes de en Vivo experimentos (llegar) directrices para el uso de animales en investigación.
1. montaje de los anteojos para ratones
- Preparación de piezas necesarias para montar las gafas (Figura 1a). Para cada ratón, prepare los siguientes: marco....
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Resultados
En primer lugar, compruebe si todas las piezas están preparadas (Figura 1a). En la Figura 1bse muestra un ejemplo de un pedazo de anteojos montados. Excepto el cuerpo principal de los marcos y la tuerca, todas las demás partes son desechables para cada ratón. Un conjunto de lentes completadas se muestra en la figura 1C. Cambiar el ángulo entre los dos bastidores para el ratón con diferentes edades.
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Discusión
Para asegurarse de que las gafas de fijación estable de la cabeza de ratón, varios pasos en este protocolo deben prestarse gran atención. El periostio debe eliminarse completamente antes de usar el sistema adhesivo dental. La sangre en el cráneo también deben limpiarse con cuidado. Mientras que una pequeña puesta a punto es aceptable después de la aplicación del adhesivo, no mueva el palo con frecuencia ante el sistema de adhesivo seco para arriba. Siga las instrucciones del sistema adhesivo cuidadosamente, especialmente.......
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Divulgaciones
El diseño de la lente del ratón se ha solicitado una patente (aplicación no. 201741349).
Agradecimientos
Agradecemos a M.T. Pardue para obtener consejos sobre lo SDOCT, F. Schaeffel para asesoramiento sobre medidas de refracción y curvatura corneal, el Sr. Sanshouo para recrear los datos de estructura tridimensional, Miyauchi M.; K. Tsubota; Y. Tanaka; S. Kondo; C. Shoda; M. Ibuki; Y. Miwa; Y. Hagiwara; A. Ishida; Y. Tomita; Y. Katada; E. Yotsukura; K. Takahashi; y Y. Wang para los debates críticos. Este trabajo fue apoyado por inAid subvenciones para la investigación científica (KAKENHI, número 15K 10881) del Ministerio de educación, cultura, deportes, ciencia y tecnología (MEXT) a los CC.TT. Este trabajo también es apoyado por la beca de investigación de la miopía de l....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| tornillo | NBK | SNZS-M1.4-10 | |
| arandela | MonotaRO | tuerca 42166397 | |
| MonotaRO | 42214243 | ||
| varilla | DMM Make | none | diseñada por authers y producida por la impresora 3D alquilada a DMM Make. |
| marco | DMM Make | none | diseñado por authers y producido por la impresora 3D alquilada a DMM Make. |
| lentes | RAINBOW CONTACT LENS | none | personalizado para uso en ratones por la empresa |
| pegamento de cianoacrilato | OK MODEL | MP 20g | |
| adhesivo dental resina cemento | SUN MEDICAL | super bond | contiene el líquido de grabado utilizado para eliminar el periostio del cráneo del ratón |
| fotorefractor infrarrojo | Steinbeis Transfer Center | ninguno | diseñado y ofrecido por el Dr. Frank Schaeffel de la Universidad de Tü bingen |
| Dominio espectral OCT | Leica | R4310 | |
| Tropicamida, Penilefrina Solución de clorhidrato Santen | Mydrin-P | ||
| midazolam | Sandoz K.K. | Componentes SANDOZ | para el anestésico |
| medetomidina | dómito | Orion Corporation | para el anestésico |
| tartrato de butorfanol | Meiji Seika Pharma | Vetorphale | componentes para el anestésico |
| hialuronato de sodio purificado al 0,1 % | Santen | Hyalein | |
| clorhidrato de atipamezol | Zenoaq | antisedan |
Referencias
- Dolgin, E. The myopia boom. Nature. 519 (7543), 276-278 (2015).
- Ohno-Matsui, K. Pathologic Myopia. Asia-Pacific Journal of Ophthalmology (Philadelphia, Pa). 5 (6), 415-423 (2016).
- Morgan, I. G., Ashby, R. S., Nickla, D. L.
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Reimpresiones y permisos
