Aislamiento de células madre mesenquimales del tejido de la pulpa y cocultivo con células de cáncer para estudiar sus interacciones

Resumen

Ofrecemos protocolos para la evaluación de las células madre mesenquimales aisladas de la pulpa dental e interacciones de la célula de cáncer de próstata basadas en métodos directos e indirectos de la cultura Co. Condición media y trans-bien membranas son adecuadas analizar actividad paracrina indirecta. Siembra diferencialmente teñidas células juntos es un modelo apropiado para la interacción directa de la célula.

Resumen

Cáncer como un proceso de varios pasos y enfermedad complicada no sólo reglamentado por el crecimiento y proliferación de células individuales sino también controlado por las interacciones de medio ambiente y la célula de tumor. Identificación del cáncer y de las interacciones de la célula de vástago, incluyendo cambios en el ambiente extracelular, interacciones físicas y factores secretados, podría permitir el descubrimiento de nuevas opciones de tratamiento. Combinamos técnicas de cocultivo conocido para crear un sistema modelo para el cáncer de las células madre mesenquimales (MSCs) y las interacciones de la célula. En el estudio actual, las células madre de pulpa dental (DPSCs) y las interacciones de la célula de cáncer de próstata PC-3 fueron examinadas por técnicas de cocultivo directos e indirectos. Medio (CM) de la condición de DPSCs y 0,4 μm tamaño de poro bien trans membranas fueron utilizadas para estudiar la actividad paracrina. Co-cultivo de diversos tipos celulares juntos fue realizado para estudio de la interacción directa de la célula. Los resultados revelaron que CM aumenta la proliferación celular y disminuye la apoptosis en cultivos de células de cáncer de próstata. CM y sistema de trans-así mayor capacidad de migración de la célula de células PC-3. Células teñidas con tintes de membrana diferentes fueron sembradas en los mismos recipientes de cultivo, y DPSCs participó en una estructura autoorganizada con células PC-3 bajo esta condición de la cultura de cooperación directa. En general, los resultados indicaron que técnicas de cocultivo podrían ser útiles para el cáncer y las interacciones de MSC como sistema modelo.

Introducción

Las células madre mesenquimales (MSCs), con la capacidad de diferenciación y contribución a la regeneración de los tejidos mesenquimales como hueso, cartílago, músculo, ligamento, tendón y adiposo, se han aislado de casi todos los tejidos en el cuerpo adulto^{1 , 2}. aparte proveer homeostasis del tejido produciendo células residentes en caso de inflamación crónica o una lesión, que producen vital citoquinas y factores de crecimiento para orquestar la angiogénesis, sistema inmune y tejido remodelación³. La interacción de MSCs con tejido de cáncer no es bien entendida, pero acumulando evide....

Protocolo

Se obtuvo consentimiento informado de los pacientes después de la aprobación del Comité de ética institucional.

1. cultivo y aislamiento de CEDIP

1. Transferencia de dientes de la sabiduría de los adultos jóvenes de edades comprendidos entre 17 y 20 a 15 mL tubos que contengan completa de Dulbecco modificado Eagle Medium (DMEM) [bajo medios glucosa DMEM suplementados con 10% suero bovino fetal (FBS) y 1% de penicilina/estreptomicina / solución de anfotericina (PSA)], dentro de las 8 h después de la resección. Mantenga el material tejido frío (4 ° C) durante la transferencia para evitar la potencial muerte de la célula.
2. Elim....

Resultados

La figura 1 muestra las características generales de la maestría de DPSCs bajo condiciones de cultivo. DPSCs ejercer morfología de fibroblasto-como de la célula después de la galjanoplastia (figura 1B). Antígenos de superficie de MSC (CD29, CD73, CD90, CD105 y CD166) se expresan altamente mientras que los marcadores hematopoyéticos (CD34, CD45 y CD14) son negativos (figura 1). Cambios a nivel morfoló.......

Discusión

Contribución de MSCs al entorno del tumor está regulada por varias interacciones incluyendo híbrido celular generación vía celular fusiones, actividades entosis o citoquinas y quimioquinas entre células madre y células de cáncer²⁸. Organización estructural, las interacciones célula-célula y secretadas factores determinan el comportamiento de la célula de cáncer en términos de promoción del tumor, la progresión y la metástasis al tejido circundante. Adecuada ex vivo sistemas model.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
DMEM	Invitrogen	11885084	Para cultivo celular
FBS	Invitrogen	16000044	Para cultivo celular
PSA	Lonza	17-745E	Para cultivo celular
Tripsina	Invitrogen	25200056	Para la disociación celular
PBS	Invitrogen	10010023	Para lavados
Dexametasona	Sigma	D4902	Componente del medio de diferenciación
β-Glicerofosfato	Sigma	G9422	Componente del medio de diferenciación osteogénica
Ácido ascórbico	Sigma	A4544	Componente del medio de diferenciación osteogénico y condrogénico
Insulina-Transferrina-Selenio (ITS − G)	Invitrogen	41400045	Componente del medio de diferenciación condrogénica
TGF-β	Sigma	SRP3171	Componente del medio de diferenciación condrogénica
Insulina	Sigma	I6634	Componente del medio de diferenciación adipogénico
Isobutil-1-metilxantina (IBMX)	Sigma	I7018	Componente del medio de diferenciación adipogénico
Indometacina	Sigma	I7378	Componente del medio de diferenciación adipogénico
Reactivo MTS	Promega	G3582	Análisis de viabilidad celular
Ensayo TUNEL Sigma 11684795910			Análisis apoptóticos
Insertos de placa de 24 pocillos	Corning	3396	Para el ensayo de migración transpocillo
PKH67	Sigma	PKH67GL	Para la tinción celular de cocultivo
PKH26	Sigma	PKH26GL	Para la
tinción celular de cocultivoParaformaldehído	Sigma	P6148	Para la fijación celular
von Kossa Kit	BioOptica	04-170801.A	Para la tinción celular (diferenciación)
Azul alcián	Sigma	A2899	Para la tinción celular (diferenciación)