Suero humano Anti-Acuaporina-4 inmunoglobulina G detección por análisis Cell-based

Resumen

Ensayo basado en células es un método ampliamente utilizado para detectar la inmunoglobulina del suero de anti-Acuaporina-4 G. Este método podría aplicarse a diagnóstico clínico y las investigaciones científicas de los trastornos del espectro óptico de Neuromielitis óptica.

Resumen

Anti-Acuaporina-4 (AQP4) inmunoglobulina G (IgG) es el biomarcador diagnóstico base para trastornos del espectro de Neuromielitis optica (NMOSD). El ensayo celular (CBA) es un método ampliamente utilizado para la detección de IgG anti-AQP4 en suero humano con alta sensibilidad y especificidad. Brevemente, suero IgG anti-AQP4 es captada por células transfected AQP4 que es fijo en el biochip entonces detectado por un anticuerpo secundario marcado con fluoresceína. Microscopía de fluorescencia se utiliza para visualizar la fluorescencia, y la intensidad de fluorescencia es evaluada por al menos dos médicos experimentados. Puede hacer un diagnóstico definitivo de NMOSD basado en la combinación de resultados de detección de IgG anti-AQP4, manifestaciones clínicas y resultados neuroradiological. Según estudios previos, CBA es más sensible y específico que otros métodos de detección de IgG anti-AQP4, y puede ser aplicado al diagnóstico clínico y estudios de NMOSD. El método tiene limitaciones; por ejemplo, todavía carece de una escala internacional para evaluar los títulos de IgG del suero anti-AQP4. Aquí, se describe un protocolo detallado para la detección de IgG anti-AQP4 suero humano utilizando CBA.

Introducción

Suero IgG de AQP4 es un biomarcador diagnóstico base para Neuromielitis optica espectro trastornos (NMOSD)¹. El ensayo celular (CBA) es un método de detección de IgG anti-AQP4 ampliamente utilizado con alta sensibilidad y especificidad. Aquí, se presenta un protocolo detallado para el CBA.

AQP4, una proteína de canal de agua, tiene seis unidades que atraviesan la membrana y dos dominios helicoidales rodeando uno acuoso poro². IgG anti-AQP4 es implicar en la patogenesia de NMOSD mediante el enlace a su objetivo de AQP4, que se encuentra principalmente en el endfeet de astrocitos

Protocolo

Este procedimiento fue aprobado por el Comité de ética de la Universidad del primer Hospital de Jilin y se realizó en aproximadamente 1.500 temas.

1. paciente inscripción y recogida de muestras de sangre

1. Aplicar la detección de laboratorio del suero de que IgG anti-AQP4 en pacientes de la clínica con las principales quejas y los síntomas enumerado a continuación. Realizar exámenes físicos también.
   
   Neuritis óptica: pacientes sufren déficits visuales, tales como pérdida de campos visuales y reducción de la agudeza visual.
   Mielitis aguda: los pacientes pueden presentar con parálisis, déficits sensoriales y disfunción autonó....

Resultados

Utilizando el procedimiento descrito aquí, IgG específica anti-AQP4 en suero es detectable. Durante el procedimiento, las muestras, un control positivo y control negativo fueron agregados a los campos de reacción, que contienen áreas transfected y untransfected (figura 2). Fluorescencia del control negativo en un área de transfected indica principalmente la Unión inespecífica del anticuerpo secundario a las células transfected en biochips (

Discusión

Hemos descrito un método ampliamente accesible para la detección de IgG anti-AQP4 en suero humano. IgG anti-AQP4 se relaciona estrechamente con NMOSD y establecer un método de detección de IgG anti-AQP4 confiable es crucial para el diagnóstico clínico de NMOSD. En primer lugar, la IgG anti-AQP4 es específico para NMOSD. Esclerosis múltiple es una enfermedad mediada inmune del sistema nervioso central y comparte muchas similitudes con NMOSD¹². Sin embargo, IgG anti-AQP4 es sólo positiva en NMOSD

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Anti-acuaporina-4 IIFT	Euroimmun	FA 1128-2005-50	Contiene portaobjetos de biochip recubiertos con células AQP4-M1 transfectadas y no transfectadas de la UE 90, IgG anti-humanos marcadas con fluoresceína, anticuerpo anti-AQP4 como control positivo, muestra de anticuerpos negativos, sal para PBS pH 7.2, Tween 20 y medio de inclusión.
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