Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.

Artículo de método

Una nanoemulsión tripéptido-estabilizado del ácido oleico

8.6K visualizaciones

⸱

DOI:

10.3791/59034

⸱

27 de febrero de 2019

 ,  ,  ,  , 
1Department of Chemistry, Brooklyn College, The City University of New York, 2Ph.D. Program in Chemistry, The Graduate Center of The City University of New York, 3Ph.D. Program in Biochemistry, The Graduate Center of The City University of New York, 4Department of Genetics and Genomic Sciences, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 5Women's Health Research Institute, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 6Laboratory for Translational Research, Western Connecticut Health Network

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe un método eficiente para sintetizar una nanoemulsión de un conjugado de ácido oleico acids-platinum(II) estabilizado con un tripéptido de lisina-tirosina-fenilalanina (KYF). Las formas de nanoemulsión condiciones suaves sintético a través de autoensamblaje de lo KYF y el conjugado.

Resumen

Se describe un método para producir una nanoemulsión compuesto de un núcleo de ácido oleico acids-Pt(II) y una capa de (KYF) de fenilalanina-tirosina-lisina (KYF-Pt-NE). KYF-Pt-NE encapsula Pt(II) en 10% en peso, tiene un diámetro de 107 ± 27 nm y una carga superficial negativa. KYF-Pt-NE es estable en agua y suero y es biológicamente activo. La conjugación de un fluoróforo a KYF permite la síntesis de una nanoemulsión fluorescente adecuado para la proyección de imagen biológica. La síntesis de la nanoemulsión se realiza en un ambiente acuoso y las formas de KYF-Pt-NE a través de uno mismo-montaje de un péptido corto de KYF y un conjugado de ácido oleico acids-platinum(II). El proceso uno mismo-Asamblea depende de la temperatura de la solución, la fracción molar de los sustratos y la tasa de flujo de la adición del sustrato. Pasos cruciales incluyen mantener el ritmo óptimo de agitación durante la síntesis, permitiendo suficiente tiempo para uno mismo-Asamblea y la concentración la nanoemulsión gradualmente en un concentrador centrífugo.

Introducción

En los últimos años ha habido un creciente interés en la ingeniería de nanopartículas para aplicaciones biomédicas como la entrega de la droga y Bioimagen1,2,3,4. La multifuncionalidad de los sistemas basados en nanopartículas requiere a menudo incorporando múltiples componentes dentro de una formulación. Los bloques que se basan en lípidos o polímeros a menudo difieren en cuanto a sus propiedades fisicoquímicas así como su biocompatibilidad y biodegradabilidad, que podría afectar la función de la nanoestructura1, 5,6. Materiales derivados biológicamente, tales como proteínas y péptidos, durante mucho tiempo han sido reconocidos como componentes prometedores de nanoestructuras multifuncionales debido a su flexibilidad de secuencia7,8. Péptidos, uno mismo-montar en arquitecturas supramoleculares altamente ordenadas formación helicoidal cintas9,10, andamios fibroso11,12y muchos más, allanando así el camino para la construcción Nanoestructuras basados en biomoléculas híbrido utilizando un fondo enfoque13.

Péptidos se han explorado para aplicaciones en medicina y biotecnología, especialmente para la terapia contra el cáncer14 y enfermedades cardiovasculares15 así como en cuanto a desarrollo de antibiótico16,17, metabólicos trastornos18y19de las infecciones. Hay más de un centenar de pequeños péptidos terapéuticos sometidos a ensayos clínicos20. Péptidos son fáciles de modificar y a sintetizar a bajo costo. Además, son biodegradables, que facilita sus aplicaciones biológicas y farmacéuticas21,22. El uso de péptidos como componentes estructurales incluye la ingeniería de nanopartículas basada en péptidos, sensibles y depósitos de hidrogel para liberación controlada23,24,25,26 , 27, biosensores basados en péptidos28,29,30,31o dispositivos bio-electrónicos32,33,34. Lo importante, se encontraron péptidos cortos incluso con dos o tres residuos de aminoácidos que incluyen fenilalanina para guiar a la uno mismo-Asamblea35,36,37 los procesos y crear emulsiones estabilizadas38 .

Fármacos basados en platino, debido a su alta eficacia, se utilizan en muchos regimenes de tratamiento del cáncer, tanto solos como en combinación con otros agentes39,40. Compuestos de platino inducen daño en el ADN por formación de enlaces cruzados de monoadducts e intrafilamentoso o interstrand. Las lesiones de Pt-ADN son reconocidas por la maquinaria celular y, si no se repara, conducen a la apoptosis celular. El mecanismo más importante, por que Pt(II) contribuye a la muerte de la célula de cáncer, es la inhibición de DNA transcripción41,42. Sin embargo, los beneficios de la terapia de platino son disminuidos por la toxicidad sistémica de Pt(II) que provoca efectos secundarios graves. Esto conduce a baja dosificación clínicos de Pt(II)43, que a menudo resulta en concentraciones subterapéuticas de platino alcanzando el ADN. Como consecuencia, la reparación del ADN que sigue contribuye a la supervivencia de la célula de cáncer y adquisición de resistencia de Pt(II). La quimio-resistencia del platino es un problema importante en la terapia contra el cáncer y la principal causa de fracaso de tratamiento44,45.

Hemos desarrollado un estable nanosistemas que encapsula al agente Pt(II) para proporcionar un efecto protector en la circulación sistémica y a disminuir los efectos secundarios inducidos por el Pt II. El sistema se basa en un núcleo de ácido oleico acids-Pt(II) estabilizado con un tripéptido KYF para formar una nanoemulsión (KYF-Pt-NE)46. Los bloques de edificio de KYF-Pt-NE, los aminoácidos de la tripéptido así como el ácido oleico, poseen el estado generalmente reconocido como seguro (GRAS) con alimentos y drogas (FDA). KYF-Pt-NE se prepara utilizando un método de nanoprecipitation47. En Resumen, el acids-Pt(II) oleico conjugado es disuelto en un solvente orgánico y luego se agrega gota a gota a una solución acuosa de KYF (figura 1) a 37 ° C. La solución se agita durante varias horas permitir que uno mismo-Asamblea de KYF-Pt-ne La nanoemulsión está concentrada en concentradores centrífugos de 10 kDa y lavaron tres veces con agua. La modificación química de KYF con un fluoróforo permite la síntesis de FITC-KYF-Pt-NE fluorescente adecuado para la proyección de imagen biomédica.

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Protocolo

1. síntesis del Acids–Platinum(II) ácido oleico conjugado

  1. Activación de cisplatino
    1. Suspender (0.167 mmol) de 50 mg de cisplatino, en 4 mL de agua (por ejemplo, nanopure) a 60 ° C.
    2. Añadir gota a gota 55,2 mg (0.325 mmol) de AgNO3 en 0,5 mL de agua a la solución de cisplatino y revuelva la reacción durante al menos 2 h a 60 ° C. El precipitado blanco de AgCl forma indicando el progreso de la reacción.
    3. Para determinar si la reacción de activación se ha completado, realice la prueba con 10% ácido clorhídrico la presencia de iones de Ag+ libre en solución. La prueba debe ser negativa (no debe formar más precipitado de AgCl).
    4. Centrifugar la mezcla de reacción a 3.220 x g por 10 min y remover el precipitado blanco de AgCl.
    5. Recoger el sobrenadante y filtrar a través de un filtro de jeringa de 0,2 mm. Prueba el sobrenadante para detectar la presencia de platino aplicando 2 ó 3 gotas de la solución mediante pipeta Pasteur al SnCl2 cristales. La prueba es positiva si el color del complejo coordinado de lata con platino es amarillo y naranja oscuro.
    6. Utilice el sobrenadante con Pt(II) activado para el segundo paso.
  2. Reacción de ácido oleico con Pt(II) activado
    1. Suspender 94,2 mg de ácido oleico (0.333 mmol) en 3 mL de agua a 60 ° C.
    2. Añadir 13,3 mg (0.333 mmol) de NaOH en 1 mL de agua y mezclar con la solución de Pt(II) activados en el paso 1.1
    3. Revuelva la reacción 2 h a 60 ° C y luego a temperatura ambiente durante la noche. El producto crudo es un precipitado marrón/amarillo aceitoso.
    4. Centrifugar la mezcla de reacción a 3.220 x g por 10 min y retirar el sobrenadante. Secar el producto crudo a 25 ° C utilizando un evaporador rotatorio. Purifique el producto por múltiples lavados con acetonitrilo. El color final de puro acids–Pt(II) ácido oleico conjugado es amarillo pálido.

2. síntesis de KYF-Pt-NE y el marcado con FITC nanoemulsión FITC-KYF-Pt-NE

  1. Síntesis del tripéptido KYF y el tripéptido marcada fluorescencia FITC-KYF
    1. Sintetizar la KYF usando química de péptidos de estado sólido estándar. Utilice el estándar siguiente condiciones de acoplamiento para conectar cada aminoácido: Wang resina (2.19 mmol), protegido de Fmoc Aminoácidos (4.38 mmol), tetrafluoroborato 2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethylaminium (TBTU) (4.38 mmol) y diisopropylethylamine (DIPEA) (8.76 mmol). Disolver los aminoácidos con TBTU en dimetilformamida (DMF) y DIPEA.
    2. Remoje 5,7 g de resina de alcohol 4-alkoxybenzyl de Fmoc-L-Phe (0.382 meq/g) en 25 mL de DMF para 1 h antes de su uso.
    3. Desprotejera el grupo amino del aminoácido L-fenilalanina con 15 mL de solución al 20% piperidina/DMF durante 5 minutos, eliminar el disolvente y repetir el lavado con ciclo de 20 minutos.
    4. Lavar la resina durante 1 min con los siguientes solventes: DMF, alcohol isopropílico (IPA), DMF, IPA, DMF, IPA, DMF, DMF. Desechar el disolvente después de cada lavado.
    5. Realizar la prueba de Kaiser para determinar la presencia de grupo de2 NH libre en la resina (ver pasos) y positivo (la semilla de la resina es morada), añadir los aminoácidos Fmoc-L-tirosina y realizar el acoplamiento durante la noche.
      1. Preparar a Kaiser prueba soluciones en botellas separadas.
      2. Disolver 5 g de ninhidrina en 100 mL de etanol.
      3. Disolver 80 g de fenol en 20 mL de etanol.
      4. Mezclar 2 mL de solución acuosa de 0,001 M de cianuro de potasio con
        98 mL de piridina.
      5. Añadir 2-3 gotas de cada Kaiser probar soluciones muestra y calor en agua hirviendo durante 5 minutos.
    6. Al acoplamiento exitoso del segundo aminoácido, realice la prueba de Kaiser y en caso negativo continuar con protocolo de desprotección (pasos 2.1.3 a 2.1.5). Repita el proceso con el aminoácido fenilalanina Fmoc.
      1. Al acoplamiento de los aminoácidos, lave la resina durante 1 minuto con 5 mL de DMF, IPA, DMF, metanol, diclorometano y éter dietílico, después de cada lavado deseche el solvente. Guardar la resina para su posterior procesamiento.
      2. Utilizar la mitad de la resina para los siguientes pasos (2.1.7-2.1.9) para modificar el péptido con FITC. Para obtener el tripéptido KYF sin modificar, siga el procedimiento a partir de 2.1.10.
    7. Modificar el aminoácido N-terminal de KYF KYF-N3 con ácido 6-azidohexanoic. Para ello, mezcle 1 g (0.382 mmol) de resina de KYF Wang y 120,1 mg (0.764 mmol) de ácido 6-azidohexanoic con 245,2 mg (0.764 mmol) de TBTU y 197,1 mg (1.528 mmol) de DIPEA en 30 mL de DMF. Revuelva la reacción durante la noche a temperatura ambiente.
    8. Obtener KYF-FITC de la síntesis de KYF-N3 con fluoresceína propargyl vía una reacción de clic. Para ello, mezcle de 253 mg (0.097 mmol) de KYF-N3 Wang resina 3,78 mg (0.019 mmol) de CuI sólido, 71,9 mg (0.193 mmol) de fluoresceína propargyl y 2,24 mg (0.017 mmol) de DIPEA. La reacción debe cambiar de color de verde a marrón.
    9. Después de 24 h, lavar tres veces la resina durante 1 min alternativamente con 5 mL de DMF y IPA cinco veces, metanol y agua tres veces, DMF y tres veces y con diclorometano y éter dietílico. Desechar el disolvente después de cada lavado.
    10. Hender el KYF-FITC o péptido KYF de la resina con una solución de ácido trifluoroacético (TFA) / Triisopropilsilano (consejos) / h2O en el cociente del 95/2.5/2.5 más de 3 horas.
    11. Precipitar el crudo péptido en un éter dietílico frío, luego seco bajo el vacío y lavar tres veces con éter frío.
  2. Síntesis de nanoemulsión FITC-KYF-estabilizado con ((FITC-KYF-Pt-NE) II) y Pt-KYF-NE
    1. Disolver 10 mg (0.0126 mmol) de acids–Pt(II) ácido oleico conjugado en 1,5 mL de isopropanol y coloque en una jeringa de 5 mL.
    2. Colocar la jeringa con acids–Pt(II) ácido oleico conjugado en una bomba de jeringa y ajuste el flujo a 0,1 mL/min.
    3. Para sintetizar el FITC-KYF-Pt-NE, disolver 1 mg (0.00105 mmol) de FITC-KYF y 1 mg (0.00219 mmol) de KYF (relación molar 1:2 de FITC-KYF:KYF) en 20 mL de agua y ajustar la temperatura de la solución a 37 ° C. Cubren las paredes del recipiente con papel de aluminio para evitar el fotoblanqueo de fluoróforo FITC. Para sintetizar la NE-Pt-KYF, disolver 2 mg (0,0044 mmol) de tripéptido KYF en 20 mL de agua y ajustar la temperatura de la solución a 37 ° C.
    4. Añadir el conjugado de ácido oleico acids–Pt(II) gota a gota a la solución de FITC-KYF/KYF o KYF tripéptido. Realizar este paso bajo el capó.
    5. Agitar la solución durante la noche a temperatura ambiente para evaporar los solventes orgánicos y permitir el uno mismo-Asamblea de FITC-KYF-Pt-NE o KYF-Pt-ne
    6. Concentrar el FITC-KYF-Pt-NE o KYF-Pt-NE en un concentrador centrífugo (10k MWCO) y lavar tres veces con 4 mL de agua nanopure.
    7. Almacenar las soluciones acuosas de KYF-Pt-NE y FITC-KYF-Pt-NE a 4 ° C.
    8. Análisis de contenido de platino mediante espectroscopia de absorción atómica (AAS), después guía48 del fabricante de la.
      1. Preparar normas de platino en la solución de ácido clorhídrico 10% para la curva de calibración (alcance efectivo de AAS es entre 100 a 1.200 ppb (partes por billón)).
      2. Disolver 50 μl de solución de KYF-Pt-NE de paso 2.2 en 100 μl de agua regia (una mezcla 3:1 de ácido clorhídrico concentrado y ácido nítrico) y dejar a temperatura ambiente durante la noche. Agregar 850 μl de agua para alcanzar un volumen de muestra final de 1 mL. Análisis de la muestra mediante AAS. La concentración final de ácido debe ser de 10% en todas las muestras analizadas.
      3. Registrar la lectura de la concentración de Pt en el MPP y calcular el contenido final de platino de la muestra (cuenta para dilución de la muestra y el volumen inicial de nanoemulsión).

3. confocal proyección de imagen de la captación celular de FITC-KYF-Pt-NE

  1. 6 líneas de células de cáncer de ovario (A2780 CP70, SKOV3, OV90, TOV21G y ES2), la semilla en 4 platos confocales de cámara bien en la densidad de 4.7 x 104 células por cámara y la cultura durante la noche a 37 ° C.
  2. Después de 24 h, lavar las células tres veces con solución salina buffer fosfato (PBS) e Incube con FITC-KYF-Pt-NE en medio de cultivo celular (ver paso 6.1 para celular línea detalles específicos) por 15 min a 37 ° C.
  3. Después de la incubación, retirar los medios de comunicación y lavar las células 3 veces con PBS.
  4. Fijar las células con metanol frío por 5 min a-20 ° C y lavar tres veces con 1 mL de PBS.
  5. Permeabilizar las células con 1 mL de 0.1% de Triton X durante 10 min a temperatura ambiente y lavar tres veces con 1 mL de PBS.
  6. Incube las células durante 90 minutos con LAMP1 anticuerpo conjugado con Alexa Fluor 647 (1 mL) en 1:50 dilución en PBS a temperatura ambiente. A continuación, lavar las células 3 veces con PBS.
  7. Diluir la solución madre de DAPI (1 mg/mL) a 1 mg/mL en PBS. Luego, añadir 1 mL de la solución diluida a cada cámara e incubar por 15 min a temperatura ambiente. Lavar las células 3 veces con PBS.
  8. Monte el cubreobjetos sobre un portaobjetos con medio de montaje.
  9. Imagen de las células con el microscopio confocal de células vivas en longitud de onda de excitación de 405 nanómetro, 488 nm y 633 nm. Configurar los parámetros de detección como sigue: energía del laser de 0.2% y no más del 1%, unidad Pinole 1 ventilado, Gain master offset Digital de 650-750, 0.
  10. Imagen abierta en software de imágenes. En imagen visualizada, seleccionar gráficos y seleccione Insertar barra de escala, para insertar la barra de escala a la imagen.

4. drogas liberación estudios

  1. Realizar los estudios de liberación de droga en PBS. Ajuste los valores de pH de tres buffers PBS a 7.4, 6.8 y 5.0 respectivamente.
  2. Diluir 5 μL de KYF-Pt-NE en 180 μL de tampón PBS de pH apropiado, transferencia a 3.5 taza de diálisis mini de MWCO kDa e incubar a 37 ° C en PBS.
  3. Elimine el tampón cada tres tubos de diálisis mini en 2, 4, 6, 24, 48 y 140 h y medir las concentraciones de platino por AAS. Preparar las muestras según el paso 2.2.8 pero ajustar el volumen final de la muestra de 500 μl.

5. métodos de cultivo celular

  1. Cultivo celular líneas A2780, CP70, SKOV-3, OV-90, TOV - 21G, ES-2 en la célula cultura medio (DMEM) suplementado con 10% (A2780, CP70, SKOV-3, ES-2) o con suero bovino fetal (FBS), de 15% (TOV 21G, OV-90) con L-glutamina y penicilina/estreptomicina. Crecen todas las células en un 5% CO2, ambiente saturado de agua a 37 ° C.
  2. Semillas 3 x 105 células cada placa de 96 pocillos y la cultura durante la noche para los experimentos de incubación in vitro. Preparar las soluciones KYF-Pt-NE, el cisplatino y el carboplatino en el agua. Ajustar la concentración de Pt(II) en KYF-Pt-NE para que coincida con la concentración de carboplatino y cisplatino para cada línea celular. Incubar por 72 horas a 37 ° C.
  3. Después de la incubación, evaluar la viabilidad celular mediante un ensayo colorimétrico (el ensayo de MTT la proliferación celular). Brevemente, quite medio y añadir 110 μL de 10% MTT en medio a cada uno bien e incubar por 2 h a 37 ° C. Luego agregar 100 detergente μL a cada pozo e incubar durante 5 h a 37 ° C.
  4. Compruebe la absorbancia a 570 nm usando el lector de placas. Analizar los resultados utilizando el análisis estadístico con la prueba Z y prueba de P.

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Resultados

Imagen de TEM representante de KYF-Pt-NE preparado mediante este protocolo se muestra en la figura 2A. KYF-Pt-NEs son esféricos en morfología, bien dispersa y uniforme en tamaño. El diámetro del núcleo de KYF-Pt-NEs, medido directamente en tres imágenes TEM con un mínimo de 200 medidas hecho, es 107 ± 27 nm. Diámetro hidrodinámico de KYF-Pt-NE, analizada mediante espectroscopia de luz dinámica (DLS), fue encontrado para ser 240 nm con un índice de polidispers...

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Discusión

Pasos críticos en la síntesis de nanoemulsión incluyen ajustar la relación molar de los substratos, mantener la temperatura y el flujo de control de la frecuencia durante acids–Pt(II) oleico además, proporcionando suficiente tiempo para uno mismo-Asamblea y purificar el producto usando un columna del concentrador centrífugo. Estos parámetros influyen en el tamaño y la morfología de KYF-Pt-NE; por lo tanto, es particularmente importante mantener la relación molar apropiada y ajustar correctamente las condiciones sintético...

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Divulgaciones

Autores no tienen un conflicto de interés que revelar.

Agradecimientos

Agradecemos el apoyo financiero del Instituto Nacional del cáncer, concesión de SC2CA206194. No se declaran intereses financieros que compiten.

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio
tetrafluoroborato (TBTU)		ANASPEC INC.:AS-20376SPPS
Plato confocal de 4 pocillosLab-Tek II, Thermo Fisher Scientific154526Para la obtención de imágenes
ácido 6-bromohexanoicoChem-Impex INT' L INC.24477Modificación de clic para el péptido
A2780Generosamente realizado por el profesor John Martignetti del HospitalLínea celular de cáncer de ovario
BarnsteadNanopure Thermo FisherD11901sistema de filtración de agua
BUCHI rotavapor R-3BuchiZ568090Para la eliminación de disolventes y el secado de muestras
Centrífuga 5810 Reppendorf5811FPara la separación de complejos de platino
Cis-diclorodiaminaplatino (II) 99%Acros Organics19376-0050pruebas in vitro
CP70Generosamente diseñado por el profesor John Martignetti del Hospitalcáncer de ovario
Baño de agua digitalVWR97025-134Para calentar medios para cultivos celulares
Dispersión dinámica de la luz (DLS)Brookhaven Instrument CorporationPara mediciones de tamaño de nanopartículas
ES-2ATCCCRL-1978línea celular de cáncer de ovario
Fmoc-L-Lys (Boc)-OH 99.79%Chem-Impex INT' L INC.00493SPPS
Fmoc-L-Phe Resina de alcohol 4-alcoxibencílico (0,382 meq/g),Chem-Impex INT' L INC.01914SPPS
Fmoc-LTyr(tBu)-OH 98%Alfa AesarH59730SPPS
Incubadora de CO2 HERACELL 150iIncubadora Thermo Scientific Fisher
Bomba de jeringa de alta presiónNew Era1010-USPara la adición de complejos de platino en la síntesis de nanopartículas
Placa calefactora/agitadorVWR12365-382Para la agitación y el calentamiento
de muestrasAnticuerpo LAMP-1 (cojugado con Alexa Fluor 647)Santa Cruz Biotechnologysc-18821 AF647Para imágenes
de N,N-diisopropiletilamina (DIPEA)Oakwood Chemical 005027SPPS
Ninhidrina 99%Alfa AesarA10409Prueba Kaiser
Ácido oleicoChem-Impex INT' L INC.01421Para la síntesis de complejo de platino
OV90ATCCCRL-11732Línea celular de cáncer de ovario
PBSCorning21-031-CVPara lavado de células
Medio de montaje PermountFisher ChemicalSP15-100Para la obtención de imágenes
FenolFisher ChemicalA92500Prueba Kaiser
Ácido fosfotúngstico FisherChemicalA248-25tinción negativa para TEM
Piperidina 99%BTC219260-2.5L
SPPS Platino AAS estándar soultionAlfa Aesar880861000ug/ml para curva de calibración
Bromuro de propargilo 97%Alfa AesarL10595Para la modificación alquina de la fluoresceína
Gabinete biológico científicoThermo Scientific Fisher1385Bio-hood para cultivo celular
Sistema de vacío autolimpianteWelch2028Bomba de vacío para rotavapor
Nitratode plata Acros Organics19768-0250Activación de cisplatino
SKOV3ATCCHTB-77Línea celular de cáncer de ovario
Hidróxido de sodioFisher ScientificS313-1Para la síntesis del complejo de platino
Cloruro deestaño (II)Sigma Aldrich208256Prueba de presencia de platino
TOV21GATCCCRL-11730Línea celular de cáncer de ovario
Ácido trifluoroacético 99% (TFA)Alfa AesarL06374SPPS
Triisopropilsilano (TIPS)Chem-Impex INT' L INC.01966SPPS
Triton-XSigma AldrichT8787-100MLPara la obtención de imágenes
Polvo de uranina 40%Fisher Scientific S25328APara la modificación de alquinos de la fluoresceína
Vivaspin 20 (10000 MWCO)SartorioVS2001Para el lavado y la condensación de nanopartículas
Microscopio invertido VWRVWR89404-462Para la monitorización de cultivos celulares
del Mount Sinai Mount Sinai Línea celular de

Referencias

  1. Agrahari, V., Agrahari, V., Mitra, A. K. Nanocarrier fabrication and macromolecule drug delivery: challenges and opportunities. Therapeutic Delivery. 7 (4), 257-278 (2016).
  2. Anselmo, A. C., Mitragotri, S. Nanoparticles in the clinic. Bioengineering & Translational Medicine. 1 (1), 10-29 (2016).
  3. Peer, D., Karp, J. M., Hong, S., Farokhzad, O. C., Margalit, R., Langer, R. Nanocarriers as an emerging platform for cancer therapy. Nature Nanotechnology. 2 (12), 751-760 (2007).
  4. Roy Chowdhury, M., Schumann, C., Bhakta-Guha, D., Guha, G. Cancer nanotheranostics: Strategies, promises and impediments. Biomedicine & Pharmacotherapy. 84, 291-304 (2016).
  5. Jeevanandam, J., Chan, Y. S., Danquah, M. K. Nano-formulations of drugs: Recent developments, impact and challenges. Biochimie. , 99-112 (2016).
  6. Meerum Terwogt, J. M., Groenewegen, G., Pluim, D., Maliepaard, M., Tibben, M. M., Huisman, A., ten Bokkel Huinink, W. W., Schot, M., Welbank, H., Voest, E. E., Beijnen, J. H., Schellens, J. M. Phase I and pharmacokinetic study of SPI-77, a liposomal encapsulated dosage form of cisplatin. Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 49 (3), 201-210 (2002).
  7. Fan, Z., Sun, L., Huang, Y., Wang, Y., Zhang, M. Bioinspired fluorescent dipeptide nanoparticles for targeted cancer cell imaging and real-time monitoring of drug release. Nature Nanotechnology. 11 (4), 388-394 (2016).
  8. Jeong, Y., et al. Enzymatically degradable temperature-sensitive polypeptide as a new in-situ gelling biomaterial. Journal of Controlled Release. 137 (1), 25-30 (2009).
  9. Uesaka, A., et al. Morphology control between twisted ribbon, helical ribbon, and nanotube self-assemblies with his-containing helical peptides in response to pH change. Langmuir. 30 (4), 1022-1028 (2014).
  10. Hwang, W., Marini, D. M., Kamm, R. D., Zhang, S. Supramolecular structure of helical ribbons self-assembled from a B-sheet peptide. Journal of Chemical Physics. 118 (1), 389-397 (2003).
  11. Svobodova, J., et al. Poly(amino acid)-based fibrous scaffolds modified with surface-pendant peptides for cartilage tissue engineering. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 11 (3), 831-842 (2017).
  12. Kumar, V. A., et al. Highly angiogenic peptide nanofibers. ACS Nano. 9 (1), 860-868 (2015).
  13. Romera, D., Couleaud, P., Mejias, S. H., Aires, A., Cortajarena, A. L. Biomolecular templating of functional hybrid nanostructures using repeat protein scaffolds. Biochemical Society Transactions. 43 (5), 825-831 (2015).
  14. Medina, S. H., Schneider, J. P. Cancer cell surface induced peptide folding allows intracellular translocation of drug. Journal of Controlled Release. 209, 317-326 (2015).
  15. Recio, C., Maione, F., Iqbal, A. J., Mascolo, N., De Feo, V. The Potential Therapeutic Application of Peptides and Peptidomimetics in Cardiovascular Disease. Frontiers in Pharmacology. 7, 526(2016).
  16. McCarthy, K. A., et al. Phage Display of Dynamic Covalent Binding Motifs Enables Facile Development of Targeted Antibiotics. Journal of the American Chemical Society. 140 (19), 6137-6145 (2018).
  17. Lazar, V., et al. Antibiotic-resistant bacteria show widespread collateral sensitivity to antimicrobial peptides. Nature Microbiology. 3 (6), 718-731 (2018).
  18. Czeczor, J. K., McGee, S. L. Emerging roles for the amyloid precursor protein and derived peptides in the regulation of cellular and systemic metabolism. Journal of Neuroendocrinology. 29 (5), (2017).
  19. Branco, M. C., Sigano, D. M., Schneider, J. P. Materials from peptide assembly: towards the treatment of cancer and transmittable disease. Current Opinion in Chemical Biology. 15 (3), 427-434 (2011).
  20. Cheetham, A. G., et al. Targeting Tumors with Small Molecule Peptides. Current Cancer Drug Targets. 16 (6), 489-508 (2016).
  21. Ndinguri, M. W., Solipuram, R., Gambrell, R. P., Aggarwal, S., Hammer, R. P. Peptide targeting of platinum anti-cancer drugs. Bioconjugate Chemistry. 20 (10), 1869-1878 (2009).
  22. Eskandari, S., Guerin, T., Toth, I., Stephenson, R. J. Recent advances in self-assembled peptides: Implications for targeted drug delivery and vaccine engineering. Advanced Drug Delivery Reviews. 110, 169-187 (2017).
  23. Zhou, J., Du, X., Yamagata, N., Xu, B. Enzyme-Instructed Self-Assembly of Small D-Peptides as a Multiple-Step Process for Selectively Killing Cancer Cells. Journal of the American Chemical Society. 138 (11), 3813-3823 (2016).
  24. Sun, J. E., et al. Sustained release of active chemotherapeutics from injectable-solid beta-hairpin peptide hydrogel. Biomaterials Science. 4 (5), 839-848 (2016).
  25. Lock, L. L., Reyes, C. D., Zhang, P., Cui, H. Tuning Cellular Uptake of Molecular Probes by Rational Design of Their Assembly into Supramolecular Nanoprobes. Journal of the American Chemical Society. 138 (10), 3533-3540 (2016).
  26. Kalafatovic, D., Nobis, M., Son, J., Anderson, K. I., Ulijn, R. V. MMP-9 triggered self-assembly of doxorubicin nanofiber depots halts tumor growth. Biomaterials. 98, 192-202 (2016).
  27. Frederix, P. W., et al. Exploring the sequence space for (tri-)peptide self-assembly to design and discover new hydrogels. Nature Chemistry. 7 (1), 30-37 (2015).
  28. Horsley, J. R., et al. Photoswitchable peptide-based 'on-off' biosensor for electrochemical detection and control of protein-protein interactions. Biosensors and Bioelectronics. 118, 188-194 (2018).
  29. Hoyos-Nogues, M., Gil, F. J., Mas-Moruno, C. Antimicrobial Peptides: Powerful Biorecognition Elements to Detect Bacteria in Biosensing Technologies. Molecules. 23 (7), 1683(2018).
  30. Xiao, X., et al. Advancing Peptide-Based Biorecognition Elements for Biosensors Using in-Silico Evolution. ACS Sensors. 3 (5), 1024-1031 (2018).
  31. Puiu, M., Bala, C. Peptide-based biosensors: From self-assembled interfaces to molecular probes in electrochemical assays. Bioelectrochemistry. 120, 66-75 (2018).
  32. Wang, J., et al. Developing a capillary electrophoresis based method for dynamically monitoring enzyme cleavage activity using quantum dots-peptide assembly. Electrophoresis. 38 (19), 2530-2535 (2017).
  33. Etayash, H., Thundat, T., Kaur, K. Bacterial Detection Using Peptide-Based Platform and Impedance Spectroscopy. Methods in Molecular Biology. 1572, 113-124 (2017).
  34. Handelman, A., Apter, B., Shostak, T., Rosenman, G. Peptide Optical waveguides. Journal of Peptide Science. 23 (2), 95-103 (2017).
  35. Chen, C., Liu, K., Li, J., Yan, X. Functional architectures based on self-assembly of bio-inspired dipeptides: Structure modulation and its photoelectronic applications. Advances in Colloid and Interface Science. 225, 177-193 (2015).
  36. Reddy, S. M., Shanmugam, G. Role of Intramolecular Aromatic pi-pi Interactions in the Self-Assembly of Di-l-Phenylalanine Dipeptide Driven by Intermolecular Interactions: Effect of Alanine Substitution. Chemphyschem. 17 (18), 2897-2907 (2016).
  37. Marchesan, S., et al. Unzipping the role of chirality in nanoscale self-assembly of tripeptide hydrogels. Nanoscale. 4 (21), 6752-6760 (2012).
  38. Scott, G. G., McKnight, P. J., Tuttle, T., Ulijn, R. V. Tripeptide Emulsifiers. Advanced Materials. 28 (7), 1381-1386 (2016).
  39. Galanski, M., Jakupec, M. A., Keppler, B. K. Update of the preclinical situation of anticancer platinum complexes: novel design strategies and innovative analytical approaches. Current Medicinal Chemistry. 12 (18), 2075-2094 (2005).
  40. Wheate, N. J., Walker, S., Craig, G. E., Oun, R. The status of platinum anticancer drugs in the clinic and in clinical trials. Dalton Transactions. 39 (35), 8113-8127 (2010).
  41. Oberoi, H. S., Nukolova, N. V., Kabanov, A. V., Bronich, T. K. Nanocarriers for delivery of platinum anticancer drugs. Advanced Drug Delivery Reviews. 65 (13-14), 1667-1685 (2013).
  42. Fichtinger-Schepman, A. M., van Oosterom, A. T., Lohman, P. H., Berends, F. cis-Diamminedichloroplatinum(II)-induced DNA adducts in peripheral leukocytes from seven cancer patients: quantitative immunochemical detection of the adduct induction and removal after a single dose of cis-diamminedichloroplatinum(II). Cancer Research. 47 (11), 3000-3004 (1987).
  43. Englander, E. W. DNA damage response in peripheral nervous system: coping with cancer therapy-induced DNA lesions. DNA Repair. 12 (8), 685-690 (2013).
  44. Galluzzi, L., et al. Molecular mechanisms of cisplatin resistance. Oncogene. 31 (15), 1869-1883 (2012).
  45. Boeckman, H. J., Trego, K. S., Turchi, J. J. Cisplatin sensitizes cancer cells to ionizing radiation via inhibition of nonhomologous end joining. Molecular Cancer Research. 3 (5), 277-285 (2005).
  46. Dragulska, S. A., et al. Tripeptide-Stabilized Oil-in-Water Nanoemulsion of an Oleic Acids-Platinum(II) Conjugate as an Anticancer Nanomedicine. Bioconjugate Chemistry. 29 (8), 2514-2519 (2018).
  47. Martinez Rivas,, J, C., et al. Nanoprecipitation process: From encapsulation to drug delivery. International Journal of Pharmaceutics. 532 (1), 66-81 (2017).
  48. Agilent Technologies. Analytical Methods for Graphite Tube Atomizers, User's Guide Manual, 8th edition. , (2012).
  49. Park, S. Y., et al. A smart polysaccharide/drug conjugate for photodynamic therapy. Angewandte Chemie. 50 (7), 1644-1647 (2011).
  50. Canton, I., Battaglia, G. Endocytosis at the nanoscale. Chemical Society Reviews. 41 (7), 2718-2739 (2012).
  51. Lokich, J., Anderson, N. Carboplatin versus cisplatin in solid tumors: an analysis of the literature. Annals of Oncology. 9 (1), 13-21 (1998).

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Reimpresiones y permisos

Etiquetas

Conjugado de ácido oleico y platinorecubrimiento con péptido KYFproceso de autoensamblajeconcentración centrífugananoemulsión fluorescenteliberación de platinocélulas de cáncer de ovariomicroscopía electrónica de transmisiónmétodo de bomba de jeringa
Una nanoemulsión tripéptido-estabilizado del ácido oleico
Contáctenos
Recomendar a la biblioteca

Privacidad

Términos de uso

Políticas

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Todos los derechos reservados.