Medición de cortisol en Koala (Phascolarctos cinereus) Piel

Resumen

Presentamos un protocolo para determinar el disolvente de extracción óptimo para medir el cortisol del pelaje de koala. Los disolventes utilizados en este protocolo son metanol, etanol e isopropanol. Determinar un disolvente de extracción óptimo ayudará a medir de forma fiable el pelaje para determinar el impacto del estrés crónico en las koalas.

Resumen

Los métodos óptimos de extracción hormonal utilizados para medir el estrés en animales a través de los tipos de muestra sin ser siempre los mismos. La icónica especie marsupial de Australia, el koala (Phascolarctos cinereus), se enfrenta a una exposición prolongada a factores de estrés inducidos por antropogénicos y la evaluación del estrés crónico en las poblaciones silvestres está justificada con urgencia. Una de las maneras más eficaces de medir el estrés crónico es a través del análisis de la hormona glucocorticoides cortisol en el cabello o el pelaje, ya que apoya las respuestas fisiológicas y conductuales. Este estudio de validación de laboratorio tiene como objetivo probar las técnicas actuales para validar un método óptimo de extracción hormonal que se utilizará como una medida no invasiva de cortisol en piel de koala. Se reconoce que el uso de técnicas no invasivas para medir las hormonas del estrés se prefiere sobre las técnicas tradicionales, invasivas debido a sus puntos de vista prácticos y éticos ideales. Además, es comparativamente más fácil adquirir piel de koalas que adquirir muestras de su sangre. Este estudio utilizó muestras de piel de koala adquiridas del Adelaide Koala and Wildlife Hospital para ejecutar una serie de técnicas de extracción de hormonas en un intento de validar un método óptimo de extracción de cortisol. Los resultados mostraron que el 100% de metanol proporcionaba la extracción de disolvente más óptima en comparación con 100% etanol o 100% isopropanol basado en resultados de paralelismo. En conclusión, este método de extracción de cortisol de piel de koala proporcionó un ensayo no invasivo fiable que podría utilizarse para estudiar el estrés crónico en koalas.

Introducción

Los ecosistemas australianos sostienen la vida humana mediante la prestación de servicios como alimentos y fibra entre muchas otras interacciones dinámicas¹. Irónicamente, es la actividad humana la que actúacomo el motor dominante de la interrupción del ecosistema a través del cambio de biodiversidad 2. La fragmentación del hábitat, conocida como el proceso de dividir grandes hábitats continuos en pequeños parchesde tierra, aislados entre sí, es el principal cambio de biodiversidad antropogénica que amenaza los ecosistemas australianos 2. La fragmentación del hábitat modifica la estructura y diver....

Protocolo

Este proyecto se llevó a cabo bajo estrictas pautas de cuidado animal y humano. La ética animal fue otorgada por la Western Sydney University (A12373). Además, la Universidad De Sídney presentó y aceptó una evaluación del riesgo de laboratorio y un formulario de bioseguridad y radiación para llevar a cabo esta investigación de forma segura (B12366).

NOTA: Las muestras de piel de Koala para este proyecto se obtuvieron del Adelaide Koala and Wildlife Hospital, ubicado en 282 Anzac Highway, Plympton South Australia. La piel fue tomada de un koala que había sido ingresado en el hospital y eutanasiado debido a sus graves lesiones. El koala falle....

Resultados

La detección de ensayos de metabolitos hormonales de interés se determina mediante paralelismo. Utilizando una curva de paralelismo, el punto de unión del 50% también determina el factor de dilución de la muestra en la curva estándar (Figura1). Como se muestra en el gráfico de paralelismo (Figura1), los extractos de 100% etanol y 100% isopropanol no proporcionaron desplazamiento paralelo contra el estándar de cortisol. Sin embargo, el extracto de metanol 100% proporcionó desplazamiento p.......

Discusión

Hay una serie de estudios que utilizan una serie de técnicas para detectar cortisol en piel de mamífero. Este estudio presenta resultados para la detección de cortisol en pieles recogidas de un koala salvaje expuesto al estrés antropogénico actual. Este estudio innovador utilizó el pelaje para probar cuáles de los tres disolventes comúnmente utilizados son los mejores en la extracción de cortisol, una medida de estrés crónico, de piel de koala. Los resultados mostraron que el 100% de metanol era el disolvente recomendado.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Tubos de centrífuga	n/a	n/a	1,5 mL
Perlas de acero al cromo	n/a	n/a	3
Kit de cortisol	Ensayos de eje	K003-H1W	Fabricado en Michigan, EE. UU.
Kit de inmunoensayo enzimático DetectX Cortisol	Ensayos de árbol	K003-H5	Utilizado por primera vez para pruebas de cortisol en piel de koala
Etanol	n/a	n/a
Isopropanol	n/a	n/a	grado HPLC
	n/a	n/a	grado HPLC
	n/a	n/a n/	a
Tamiz de microprecisión	n/a	n/a	0,5 mm
Lector de microplacas	Bio Radi	n/a	n/a
Lavadora de microplacas	Bio Radi	n/a	n/a
Agitador orbital	Bio Line	n/a	n/a
Barco de pesaje de plástico	n/a	n/a	n/a
Sellador de placas	n/a	n/a	n/a
Balanza de precisión	n/a	n/a	n/a
Mezclador de vórtice	Eppendorf	n/a	n/a

de grado HPLC Metanol de Micropipeta de