Método de preparación de muestras de microscopio electrónico de escaneo y transmisión para los apéndices del escarabajo carpintero

Summary

Con el fin de observar la ultraestructura de los insectos sensilla, se presentó en el estudio el protocolo de preparación de muestras de escaneo y transmisión electrónica (SEM y TEM, respectivamente). Se añadió Tween 20 en el fijador para evitar la deformación de la muestra en SEM. La microscopía de fluorescencia fue útil para mejorar la precisión del corte en TEM.

Abstract

Este informe describió métodos de preparación de muestras que escanear y transmisión observaciones del microscopio electrónico, demostrado mediante la preparación de apéndices del escarabajo carpintero de madera, Chlorophorus caragana Xie & Wang (2012), para ambos tipos de microscopía electrónica. El protocolo de preparación de muestras de microscopía electrónica de barrido (SEM) se basó en la fijación química de la muestra, la deshidratación en una serie de baños de etanol, el secado y el recubrimiento de esputo. Al añadir Tween 20 (Laurato de sorbitano de polioxietileno) al fijador y a la solución de lavado, la superficie del cuerpo de insectos del escarabajo carpintero se lavó más limpiamente en SEM. La preparación de muestras de microscopía electrónica de transmisión (TEM) de este estudio implicó una serie de pasos que incluyen fijación, deshidratación de etanol, incrustación en resina, posicionamiento mediante microscopía de fluorescencia, seccionamiento y tinción. Fixative con Tween 20 habilitado penetrar la pared del cuerpo del insecto de escarabajo de madera más fácilmente de lo que habría sido sin Tween 20, y posteriormente mejores tejidos fijos y órganos en el cuerpo, lo que produjo claras observaciones del microscopio electrónico de transmisión de insectos sensilla ultraestructuras. El siguiente paso de esta preparación fue determinar las posiciones de la sensilla de insectos en la muestra incrustada en el bloque de resina mediante el uso de microscopía de fluorescencia para aumentar la precisión del posicionamiento de la sensilla objetivo. Esta precisión de corte mejorada.

Introduction

La microscopía electrónica de barrido es una herramienta importante en muchos estudios morfológicos, que SEM muestra las estructuras superficiales^1,2. El atractivo de la microscopía electrónica de transmisión es que se puede utilizar para estudiar una amplia gama de estructuras biológicas a escala nanométrica, desde la arquitectura de las células y la ultraestructura de los orgánulos, hasta la estructura de complejos macromoleculares y proteínas. TEM muestra las estructuras internas^3,4,5.

C....

Protocol

ADVERTENCIA: Consulte las fichas de datos de seguridad de los materiales de los reactivos antes de utilizarlas. Varios de los productos químicos utilizados durante la preparación de la muestra son tóxicos, mutagénicos, cancerígenos y/o reprotóxicos. Use equipo de protección personal (guantes, abrigo de laboratorio, pantalones de cuerpo entero y zapatos de punta cerrada) y trabaje bajo una campana de humo mientras manipula la muestra.

1. Preparación de muestras SEM e imágenes

1. Fijación y limpieza de muestras
   1. Trabajando en un área donde se produce C. caragana, atraiga a los adultos a las trampas de campo cebadas con ....

Results

Utilizando la solución de limpieza y fijación con Tween 20, se observó una imagen SEM más limpia que la sin Tween 20(Figura 3). La solución de fijación De- 20 penetró la solución de fijación de glutaraldehído en el tejido. Se vio claramente la estructura del microtúbulo. La imagen TEM de la estructura interna de la muestra se desdibujó sin Tween 20(Figura 4).

Discussion

En este artículo, presentamos un esquema de preparación de muestras para escanear y transmisión de microscopía electrónica para el escarabajo carpintero. Utilizando el apéndice de insectos como sujeto de estudio representativo, demostramos varias mejoras con respecto a los métodos tradicionales de preparación de muestras.

El aceite líquido separado de la superficie sólida se emulsiona en pequeñas gotas, que pueden ser bien dispersadas y suspendidas en el medio de lavado para reducir el redepos.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Lente anatómica	Chongqing Auto Optical sociedad de responsabilidad limitada	1425277
Cinta adhesiva de carbono	SPI Supplies, División de Sondas de Estructura, Inc.	7311
Tetracloruro de carbono	Sigma	56-23-5
Rejillas de cobre	GilderGrids	G300
Fosfato de hidrógeno disódico	Grupo Sinopharm reactivo químico co., LTD	10039-32-4
Etanol	J.T. Baker	64-17-5
Moldes de incrustación planos	Hyde Venture (Pekín) Biotechnology Co., Ltd.	70900
Microscopio de fluorescencia	LEICA	DM2500
Glutaraldehído	Sigma-Aldrich	111-30-8
Anhidro Isophorone	Sigma	78-59-1
Citrato de plomo	Sigma	512-26-5
Metanol	Sigma	67-56-1
Fosfato de sodio monobásico	Su grupo reactivo químico co., LTD	7558-80-7
Micrómetro objetivo	Olympus	0-001-034
Tetróxido de osmio	Sigma	541-09-3
Placa de Petri	Aldrich	1998
Hoja de afeitar Gillette
Resina	Spurr	ERL4221
Bisturí	Lianhui	GB/ T19001-2008
SEM	Hitachi	S-3400
Desecante de gel de sílice	Suzhou Longhui Desecante Co., Ltd.	112926-00-8
Cepillo pequeño	Martol	G1220
Hidróxido de sodio	Sigma	1310-73-2
Instrumento de iones de pulverización catódica	Hitachi Koki Co. Ltd., Tokio, Japón	E-1010
Microscopio estereoscópico	Leica	EZ4 HD
TEM	Hitachi	H-7500
Tween 20	Tianjin Damao Reactivo químico	9005-64-5
Ultramicrótomo	Leica	UC6
Limpiador ultrasónico	GT Sonic	GT-X1
Acetato de uranilo	Sigma	6159-44-0