Aquí, presentamos un protocolo para evaluar el resultado de la aplicación de luz roja en el crecimiento de biofilm de Candida albicans . Un dispositivo de luz roja no coherente con la longitud de onda de 635 nm y densidad de energía de 87,6 J·cm-2 se aplicó durante todo el crecimiento de Candida albicans biofilms durante 48 h.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Diario fototerapia con luz roja para regular crecimiento de Biofilm de Candida albicans
En este artículo
Resumen
Resumen
Aquí, presentamos un protocolo para evaluar los resultados de viáticos luz roja tratamiento sobre el crecimiento de biofilm de Candida albicans . Para aumentar el crecimiento planctónico de C. albicans SN425, el inóculo creció en medio de la Base de nitrógeno de la levadura. Para la formación de biofilm, se aplicaron medios RPMI 1640, que tienen altas concentraciones de aminoácidos, para ayudar a crecimiento de biopelícula. Biopelículas de 48 h fueron tratados dos veces al día durante un período de 1 minuto con un dispositivo de luz no coherente (luz roja, longitud de onda = 635 nm; densidad de energía = 87,6 J·cm-2). Como control positivo (PC), 0,12% de clorhexidina (CHX) fue aplicado y como control negativo (NC), 0,89% NaCl se aplicó a los biofilms. Colonias formando unidades (UFC), peso seco, solubles e insolubles exopolisacáridos se cuantificaron después de tratamientos. Brevemente, el protocolo que presentamos es simple, reproducible y proporciona respuestas con respecto a la viabilidad, cantidades de polisacárido extracelular y seco-peso después del tratamiento de la luz roja.
Introducción
El aumento de la incidencia de diabetes, usos de la terapia inmunosupresora, infección por el VIH, epidemia, procedimientos clínicos invasivos y consumo de antibióticos del amplio-espectro en los últimos años han aumentado la incidencia de Candida albicans relacionados con enfermedades1,2. Infecciones por C. albicans son comúnmente relacionados con el desarrollo de biofilm y pueden causar manifestaciones clínicas, tales como candidiasis o manifestaciones sistémicas, como la candidemia1,2. Uno de los factores de virulencia más notables....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
1. preparación de medios de cultivo
- Preparar el agar dextrosa de sabouraud (SDA). Suspender 65 g del SDA suplementado con cloranfenicol (50 mg/L) en 1.000 mL de agua destilada. Ebullición para disolver el medio completamente. Esterilizar en autoclave a 15 PSI (121° C) durante 30 minutos, enfriar a 45-50 ° C. Mezclar bien y verter 20 mL de SDA en placas de Petri estériles (tamaño: 100 x 15 mm).
- Preparar la levadura nitrógeno base (YNB) suplementado con glucosa 100 mM mezclando 6,7 g de YNB y 18 g de dextrosa en 1000 mL de agua ultrapura. Mezclar con un agitador y esterilizar el medio utilizando un sistema de vacío del filtro de 0,22 μm.
- Pr....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
La figura 2 muestra los resultados de Log10 UFC/mL de C. albicans después de dietas tratamientos con luz roja para 1min rojo redujo significativamente el Log10 UFC/mL en comparación con la NC (p = 0.004). Figura 3 presenta los resultados de la biomasa (mg) de biopelículas de C. albicans después de tratamientos diarios. Todos los grupos mostraron una reducción de la biomasa en comparación co.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
Los pasos más críticos para el cultivo exitoso de biopelículas de C. albicans son: 1) hacer el inóculo previo y el inóculo en medio YNB con 100 mM de glucosa; 2) y esperar 90 minutos para la fase de adhesión cuidadosamente lavar dos veces los pozos con 0,89% NaCl para eliminar las células no adheridas; y 3) para agregar Medio RPMI a las células adheridas para iniciar formación de biopelículas, ya que RPMI será estimular el crecimiento de hifas. Aneuploidías pueden ocurrir cuando el cultivo de C. albicans
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Agradecemos a Dr. Paula da Silveira, Dr. Cecilia Atem Gonçalves de Araújo Costa, Shawn M. Maule, Shane M. Maule, Dr. N. Malvin Janal y Dr. Iriana Zanin para el desarrollo de este estudio. También reconocemos el Dr. Alexander D. Johnson (UCSF) por donar la cepa analizada en este estudio.
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Clorhexidina 20% | Sigma-Aldrich | C9394 | |
| Dextrosa (D-glucosa) Anhidro | Fisher Chemical | D16-500 | |
| Etanol 200 prueba | Decon Laboratories | DSP-MD.43 | |
| LumaCare LC-122 A | LumaCare Medical Group, Newport Beach, CA, EE. UU. | ||
| NaCl | Fisher Chemical | S641-500 | |
| NaOH | Biorreactivos de Fisher | BP 359-500 | |
| Fenol 5% | Milipore Sigma | 843984 | |
| RPMI 1640 tamponado con 3-(N-morfolino) | Sigma | R7755 | |
| agar dextrosa Sabouraud suplementado con cloranfenicol | Acumedia | 7306A | |
| Ácido sulfúrico | Fisher Chemical | SA200-1 | |
| Base de nitrógeno para levaduras | Difco | DF0392-15-9 | |
| Ácido 3-(N-morfolino)propanosulfónico MOPS | Sigma-Aldrich | M1254 | |
| Placa de poliestireno de 24 pocillos | Halcón | 353935 |
Referencias
- Sardi, J. C. O., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, J. M. Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options. Journal of Medical Microbiology. 62 (Pt 1), 10-24 (2013).
- Harriott, M. M., Noverr, M. C.
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
