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Artículo de método

Un modelo de cáncer de endometrio ortotópico con linfadenopatía retroperitoneal hecha de células VX2 cultivadas y cultivadas en Vivo

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DOI:

10.3791/59340

12 de septiembre de 2019

En este artículo

Resumen

Este protocolo presenta un método estandarizado para cultivar células VX2 en cultivo y para crear un modelo ortotópico VX2 de cáncer endometrial con metástasis de ganglios linfáticos retroperitoneales en conejos. Los modelos de cáncer de endometrio ortotópico son importantes para el estudio preclínico de nuevas modalidades de diagnóstico por imágenes para el diagnóstico de metástasis de ganglios linfáticos.

Resumen

El cáncer de endometrio es la neoplasia maligna ginecológica más común en América del Norte y la incidencia está aumentando en todo el mundo. El tratamiento consiste en cirugía con o sin tratamiento adyuvante dependiendo de la afectación de los ganglios linfáticos según lo determinado por la linfadenectomía. La linfadenectomía es un procedimiento mórbido, que no ha demostrado tener un beneficio terapéutico en muchos pacientes, por lo que se requiere un nuevo método para diagnosticar metástasis de ganglios linfáticos. Para probar nuevos agentes de imágenes, se necesita un modelo fiable de cáncer endometrial con metástasis de ganglios linfáticos retroperitoneales. El modelo de cáncer de endometrio VX2 se ha descrito con frecuencia en la literatura; sin embargo, existe una variación significativa con respecto al método de establecimiento de modelos. Además, no se han reportado estudios sobre el uso de células VX2 cultivadas para crear este modelo, ya que sólo las células propagadas in vivo se han utilizado previamente. En este documento, presentamos un método quirúrgico estandarizado y un método de monitoreo postoperatorio para el establecimiento del modelo de cáncer de endometrio VX2 e informamos sobre el primer uso de células VX2 cultivadas para crear este modelo.

Introducción

El cáncer de endometrio, o cáncer del revestimiento del útero, es la segunda neoplasia maligna ginecológica más común a nivel mundial y la neoplasia maligna más común en las naciones desarrolladas1. La incidencia de cáncer de endometrio ha aumentado constantemente, aumentando un 2,3% anual entre 2005-2013, con un correspondiente aumento del 2,2% en la mortalidad1,2,3. El diagnóstico de metástasis de ganglios linfáticos es primordial ya que la presencia de ganglios linfáticos positivos es un fuerte predictor negativo de supervivencia4<....

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Protocolo

Cierre profundo de la pared abdominal: Identificar el ápice de la incisión peritoneal y agarrar el peritoneo, el músculo rectus y la fascia con fórceps tisulares. Todos los estudios en animales se llevaron a cabo en las instalaciones aprobadas por el Centro de Recursos Animales (ARC) de la Red Universitaria de Salud y de acuerdo con los protocolos aprobados de uso y cuidado de animales (AUP #3994/#4299). La línea celular VX2 se obtuvo del Laboratorio del Dr. Aken en la Red de Salud de la Universidad.

1. Creación de línea celular VX2 in vitro

  1. Cosecha el tumor VX2 del músculo del cuádriceps del conejo y el crecimiento en el flanco d....

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Resultados

Veintiocho conejos fueron utilizados para la creación del modelo de cáncer de endometrio. Los conejos tenían un peso promedio de 2,83 kg (2,71-3,58 kg) en el momento del experimento. Los tumores uterinos crecieron con éxito en 21 conejos para una tasa general de éxito del modelo del 75%. Antes de la inclusión de la sutura uterina en el protocolo, la tasa de éxito fue del 57% en comparación con el 81% después de que se añadiera la sutura uterina. Sutura uterina se añadió al protocolo despu.......

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Discusión

En este documento, hemos informado de un método quirúrgico estandarizado para el establecimiento de un modelo de cáncer de endometrio VX2 y reportado sobre el primer uso de células VX2 cultivadas para crear este modelo. La tasa de toma de tumores del 75% es inferior a la tasa del 100% reportada anteriormente en la literatura35,37,53,56; sin embargo, la tasa del 90% de metástasis de ganglios lin.......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Este estudio fue financiado por el Terry Fox Research Institute (PPG-1075), el Instituto Canadiense de Investigación Sanitaria (Foundation Grant #154326), el Canadian Cancer Society Research Institute (704718), Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada, Fundación para la Innovación y Fundación Princesa Margaret contra el Cáncer.

Me gustaría dar las gracias a la Dra. Marguerite Akens por proporcionar las células VX2 iniciales para el establecimiento del modelo VX2 inicial y los bloques tumorales VX2 congelados. Me gustaría agradecer a Marco DiGrappa por ayudar a realizar experimentos iniciales de cultivo celular VX2 y Lili ....

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
bisturí de 11 hojas, Estéril, DesechableAspen Surgical (VWR)80094-086
catéter para venas de oído de 22 hojasCDMV14332
3-0 sutura de polifilamento absorbible (Polysorb)Covidien356718
3-0 sutura reabsorbible trenzada (Polysorb)Filtro celular Covidien356718
70uM, Envuelto individualmente, NylonFalcon352350
Acepromazina (Atravet)CDMV1047
Jabón Betadine (Poviodona yodada 7.5%)CDMV4363
Solución de Betadine (Poviodona yodada 10%)UHN Stores457955
BuprenorfinaMcGill University
CefazolinUHN farmacia para pacientes hospitalizadosNo se necesita gato #
Solución de clorhexidinaCDMV119872
Corning BioCoatCellware, Colágeno Tipo I, platos de 100mmLa marca Corning354450no es importante
Corning BioCoatCellware, Colágeno Tipo I, placas de 24 pocillosLa marca Corning354408no es importante
Corning BioCoatCellware, Colágeno Tipo I, placas de 6 pocillosCorning354400marca no importante
Matriz de membrana basal Corning Matrigel * sin LDEV, 10 mLCorning 354234
DMEM/HAM F12 1:1Life Technologies11320marca no importante
DMSOCaledon Lab Chem1/10/4100
Enrofloxacina (inyectable de Baytril)CDMV11242
Falcon TubeCorning Centri-Star430828
Suero fetal bovino, calificado, origen canadiense, 500 mlLife Technologies12483020marca/fuente no importante
IsofluranoUHNhospitalizados No se necesita gato # Se necesita
contraste de IsohexolHealthcare
Meloxicam (Metacam 0.5%)CDMV104674
de solución salina normal(UofT Medstore)1011
PBSMulticell o Sigma331-010-CL o D8537-500mL
; 10000U Penicilina, 10000ug Estreptomicina)Corning-CellgroCA45000-652
Estéril Hanks Solución Salina Equilibrada (-Ca++, -Mg++, -Rojo de Fenol)T.C.M.F (Dr Bristow)28-Ene-11
Pegamento Quirúrgico (Adhesivo para Tejidos)3M Vetbond14695B
Tripsina (0.25%), Grado Proteómico SigmaT-6567-5X20UG
Tripsina-EDTA, 0.05%, 100mlLa marca Wisent Inc325-542-ELno es importante
farmacia para pacientes GE 407141210 Marca de la casa Penicilina/Estreptomicina (100mL

Referencias

  1. Ferlay, J., et al. Cancer incidence and mortality worldwide: Sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. International Journal of Cancer. 136, E359-E386 (2015).
  2. Canada, S. Canadian Cancer Statistics Special topic: Pancreatic canc....

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