Aislamiento y cultivo de células endoteliales aórticas primarias de cerdos en miniatura

Yanli Zhao; Chengjiang Zhao; David K.C. Cooper; Ying Lu; Kewang Luo; Huiyun Wang; Pengfei Chen; Changchun Zeng; Shaodong Luan; Lisha Mou; Hanchao Gao

doi:10.3791/59673

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Artículo de método

Aislamiento y cultivo de células endoteliales aórticas primarias de cerdos en miniatura

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DOI:

10.3791/59673

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14 de agosto de 2019

Yanli Zhao¹^,²^,³ , Chengjiang Zhao⁴ , David K.C. Cooper⁵ , Ying Lu² , Kewang Luo⁶ , Huiyun Wang³ , Pengfei Chen³ , Changchun Zeng³ , Shaodong Luan¹ , Lisha Mou² , Hanchao Gao¹^,²^,³

¹Department of Nephrology, Shenzhen Longhua District Central Hospital, Affiliated Central Hospital of Shenzhen Longhua District, Guangdong Medical University, ²Shenzhen Xenotransplantation Medical Engineering Research and Development Center, Shenzhen Second People's Hospital, First Affiliated Hospital of Shenzhen University, Shenzhen University School of Medicine, ³Department of Medical Laboratory, Shenzhen Longhua District Central Hospital, Affiliated Central Hospital of Shenzhen Longhua District, Guangdong Medical University, ⁴Department of Endocrinology, Shenzhen Longhua District Central Hospital, Affiliated Central Hospital of Shenzhen Longhua District, Guangdong Medical University, ⁵Xenotransplantation Program, Department of Surgery, University of Alabama at Birmingham, ⁶People's Hospital of Longhua

En este artículo

Resumen

Se describe un método enzimático eficaz para el aislamiento de las células endoteliales aórticas porcinas primarias (pAEC) de los cerdos en miniatura. Los pAEC primarios aislados se pueden utilizar para investigar la respuesta inmunitaria y de la coagulación en el xenotrasplante.

Resumen

El xenotrasplante es una forma prometedora de resolver la escasez de órganos humanos para los pacientes con insuficiencia orgánica terminal, y el cerdo se considera como una fuente de órganos adecuada. El rechazo inmune y la coagulación son dos obstáculos importantes para el éxito del xenotrasplante. La lesión y la disfunción de la célula endotelial vascular (EC) son importantes para el desarrollo de las respuestas de inflamación y coagulación en xenotrasplante. Por lo tanto, el aislamiento de las células endoteliales aórticas porcinas (PAECs) es necesario para investigar el rechazo inmune y las respuestas de coagulación. Aquí, hemos desarrollado un enfoque enzimático simple para el aislamiento, caracterización y expansión de pAECs altamente purificados de cerdos en miniatura. En primer lugar, el cerdo en miniatura fue anestesiado con ketamina, y se extirpado una longitud de aorta. En segundo lugar, la superficie endotelial de la aorta fue expuesta a 0.005% solución digestiva de colágeno IV durante 15 min. En tercer lugar, la superficie endotelial de la aorta fue raspada en una sola dirección con un rascador celular (<10 veces), y no se comprimió durante el proceso de Raspado. Finalmente, los pAEC aislados del Día 3, y después del paso 1 y el pasaje 2, fueron identificados por citometría de flujo con un anticuerpo anti-CD31. Los porcentajes de células cd31 positivas fueron del 97,4% al 1,2%, del 94,4 % al 1,1% y del 92,4% al 1,7% (media de SD), respectivamente. La concentración de Colagenasa IV, el tiempo digestivo, la dirección y la frecuencia e intensidad del raspado son fundamentales para disminuir la contaminación por fibroblastos y obtener alta pureza y un gran número de CE. En conclusión, nuestro método enzimático es un método altamente eficaz para aislar las EF de la aorta de cerdo en miniatura, y las células se pueden ampliar in vitro para investigar las respuestas inmunitarias y de coagulación en el xenotrasplante.

Introducción

La escasez de órganos disponibles para trasplantes es un problema pendiente en todo el mundo¹. Según la Cruz Roja de China, sólo un pequeño número de pacientes con insuficiencia orgánica en etapa terminal recibieron un órgano adecuado en China en 2018.

El xenotrasplante es una forma prometedora de resolver el problema de la escasez de órganos. Los órganos de cerdo son considerados los órganos másadecuados para los seres humanos debido a las similitudes anatómicas y fisiológicas 2,³. El fracaso de un xenoinjerto de cerdo está en gran medida relacionado con el ....