Los modelos de ratón de xenoinjerto de melanoma uveal de hígado humano ortotópico se crearon utilizando técnicas quirúrgicas de implantación ortotópica con técnicas de inyección de agujas y trozos tumorales derivados del paciente con líneas celulares de melanoma uveal humano cultivadas.
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Artículo de método
Generación de una plataforma de xenoinjerto de melanoma uveal humano ortotópico hepático en ratones inmunodeficientes
En este artículo
Resumen
Resumen
En las últimas décadas, los tumores de xenoinjerto derivados del paciente o las líneas celulares humanas cultivadas se han reconocido cada vez más como modelos más representativos para estudiar los cánceres humanos en ratones inmunodeficientes que las células humanas establecidas tradicionales líneas in vitro. Recientemente, se han desarrollado modelos de xenoinjerto tumoral derivado del paciente (PDX) implantados ortotótológicamente en ratones para replicar mejor las características de los tumores de los pacientes. Se espera que un modelo de ratón de xenoinjerto ortotópico hepático sea una plataforma útil de investigación del cáncer, proporcionando información sobre la biología tumoral y la terapia farmacológica. Sin embargo, la implantación de tumores ortotópicos hepáticos es generalmente complicada. Aquí describimos nuestros protocolos para la implantación ortotópica de tumores de melanoma uveal de hígado-metastásico derivados del paciente. Cultivamos líneas celulares de melanoma uveal metastásico hepático humano en ratones inmunodeficientes. Los protocolos pueden dar lugar a tasas de éxito técnico consistentemente altas utilizando una técnica de implantación ortotópica quirúrgica con trozos de tumor de melanoma uveal derivado del paciente o una técnica de inyección de aguja con línea celular humana cultivada. También describimos protocolos para la exploración por TC para detectar tumores hepáticos interiores y para técnicas de reimplantación utilizando tumores crioconservados para lograr el reinjerto. Juntos, estos protocolos proporcionan una mejor plataforma para los modelos de ratón tumor ortotópico hepático de melanoma uveal metastásico hepático en la investigación traslacional.
Introducción
El melanoma veal es el tumor maligno intraocular más común entre los adultos en el mundo occidental. Durante los últimos 50 años, la incidencia de melanoma uveal (5,1 casos por millón) se ha mantenido estable en los Estados Unidos1,2. El melanoma veal surge de melanocitos en el iris, cuerpo ciliar o coroides, y es una enfermedad extremadamente letal cuando desarrolla metástasis. La tasa de mortalidad de los pacientes con metástasis de melanoma uveal fue del 80% a 1 año y del 92% a los 2 años después del diagnóstico inicial de las metástasis. El tiempo entre el diagnóstico de metástasis y la muerte suele ser co....
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Protocolo
Los pacientes inscritos en el estudio deben proporcionar su consentimiento por escrito que permita el uso de muestras quirúrgicas descartadas con fines de investigación y estudios genéticos, de acuerdo con un protocolo aprobado por la Junta de Revisión Institucional. Este protocolo se llevó a cabo de acuerdo con las recomendaciones de la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio de los Institutos Nacionales de Salud y aprobado por el Comité Institucional de Cuidado y Uso Animal (IACUC).
1. Colección de tejido tumoral fresco derivado del paciente
- Obtenga tejido tumoral derivado del paciente a partir de ....
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Resultados
La implantación ortotópica quirúrgica mediante el método de bolsillo hepático puede trasplantar el tumor de melanoma uveal metastásico hepático humano en el hígado del ratón con una alta tasa de éxito del 80% en un plazo de seis meses. El tumor de xenoinjerto se injerta en el hígado como un tumor solitario sin nódulos de la hija(Figura 1 y Figura 3A). La técnica de inyección ortotópica quirúrgica en el hígado utilizando microaguj.......
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Discusión
Los modelos de xenoinjerto ortotópicos actuales son intensivos en mano de obra, requieren mucho tiempo y son costosos de crear. Modelos de ratón xenoinjerto tumoral para el cáncer de hígado se establecieron hace más de dos décadas19,20,21. Sin embargo, esta técnica es complicada y requiere el uso de equipos especiales, como un soporte de microagujas y de 6-0 a 8-0 suturas finas bajo un microscopio. El tumor y el tejido hepático .......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Estamos agradecidos a M. Ohara, K. Saito y M. Terai, por revisar el manuscrito. Los autores reconocen la crítica para la asistencia editorial y en inglés de este manuscrito por el Dr. R. Sato en Fox Chase Cancer Center. El trabajo descrito aquí fue apoyado por el Bonnie Kroll Research Fund, el Mark Weinzierl Research Fund, el Eye Melanoma Research Fund en La Universidad Thomas Jefferson, the Osaka Community Foundation y JSPS KAKENHI Grant Number JP 18K15596 en Osaka City Universidad. Los estudios en el laboratorio del Dr. A. Aplin fueron apoyados por la subvención de NIH R01 GM067893. Este proyecto también fue financiado por un Dean's Transformative Science Award, un ....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Materiales, tejidos y animales | |||
| Buprenorfina | |||
| CO2 tanque | |||
| Cryomedium | |||
| Exitron nano 12000 (Agente de contraste de nanopartículas a base de metales alcalinotérreos) | Miltenyl Biotec | 130-095-700 | |
| HBSS 1x, con calcio & magnesio | Corning | 21-020-CM | |
| celular de melanoma uveal metastásico hepático humano | |||
| Tejido de melanoma uveal humano en el hígado | Toda la manipulación de tejidos debe realizarse en una capucha de nivel de bioseguridad 2. Tenga cuidado al trabajar con tejido humano; Utilice siempre guantes y evite el contacto directo con la piel. Supongamos que los pacientes pueden haber sido infectados con el VIH u otros organismos altamente transmisibles. No procese muestras que se sabe que son portadoras de infecciones. | ||
| Isoflurano de yodo | |||
| Productos Purdue | 67618-150-17 | ||
| Isopropanol | Fisher scientific | A416-1 | Evite el contacto directo con la piel y los ojos y la inhalación de agentes anestésicos. |
| Nitrógeno | |||
| Matrigel HC | BD | 354248 | |
| NOD. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) | ratones Jackson Lab | 5557 | 4 a 8 semanas |
| de edad 1x, sin calcio ni magnesio | Corning | 21-031-CM | |
| RPMI 1640 | Corning | 10-013-CV | |
| Almohadilla de preparación con alcohol estéril (70% de alcohol isopropílico) | Productos Nice-Pak | B603 | |
| Solución tampón de fosfato de paraformaldehído al 4% | Wako | 163-20145 | |
| Solución de alcohol etílico al 70% | Fisher Scientific | 04-355-122 | |
| Name | Company | Número de catálogo | Comments |
| >Equipments | |||
| Hemostático absorbible | Johnson and Johnson | 63713-0019-61 | |
| Autoclave | |||
| Medida | |||
| Cauterio | Bovie Medical | MC-23009 | |
| Contador | |||
| Centrífuga | |||
| Contenedor de congelación criogénica | NALGENE | 5100-0001 | |
| Cryotube | SARSTEDT | 72.379 | |
| Tijeras curvas | World Precision Instruments | 503247 | |
| Pinzas ultrafinas curvas | World Precision Instruments | 501302 | |
| Lámina | |||
| Congelador | |||
| Bote de filtro F/AIR | Harvard Apparatus 600979 | ||
| Almohadilla | |||
| Vaporizador de isoflurano | Artisan Scientific | 66317-1 | |
| Nitrógeno | |||
| Tarro de nitrógeno líquido | Thermo Fisher Scientific | 2123 | |
| Micro-CT scan | Siemens | ||
| Portaagujas | World Precision Instruments | 501246 | |
| Placas de Petri | Fisher Scientific | FB0875713 | |
| Pipeta | |||
| Frasco | |||
| Campana estéril Armario | bioseguridad de nivel 2 | ||
| Bisturí estéril n.º 11 | AD Surgical | A300-11-0 | |
| Pinza recta | World Precision Instruments | 14226 | |
| Paño | |||
| Sujetador de venas de cola | Braintree Scientific | TV-150-STD | |
| Baño | |||
| Jeringa TB de 1 mL con aguja de 27 G | BD | 309623 | |
| tubo de 1,7 mL | Bioexpress | C-3260-1 | |
| 5-0 PDO Sutura | AD Surgical | S-D518R13 | |
| 15 mL tubos cónicos | AZER SCIENTIFIC | ES-9152N | |
| Aguja de 27 G | BD | 780301 | |
| Aguja de 27 G | Hamilton | 7803-01 | |
| Tubos cónicos de 50 mL | AZER SCIENTIFIC | ES-9502N | |
| 50 µ L micro jeringa | BD | 80630 | |
| 50 µ L micro jeringa | Hamilton | 7655-01 | |
| Contenedor de 100 mL | Fisher Scientific | 12594997 | |
| 200μ Punta en L |
Referencias
- Aronow, M. E., Topham, A. K., Singh, A. D. Uveal Melanoma: 5-Year Update on Incidence, Treatment, and Survival (SEER 1973-2013). Ocular Oncology and Pathology. 4 (3), 145-151 (2018).
- Krantz, B. A., Dave, N., Komatsubara, K. M., Marr, B. P., Carvajal, R. D.
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Reimpresiones y permisos
