Extracción de cortisol de las matrices de aleta de esturión y mandíbula

Jalil Ghassemi Nejad; Mohammad Ataallahi; Mohammad H. Salmanzadeh; Kyung T. Park; Hong G. Lee; Alireza Shoae; Atieh Rahimi; Kyung I. Sung; Kyu H. Park

doi:10.3791/59961

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Extracción de cortisol de las matrices de aleta de esturión y mandíbula

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DOI:

10.3791/59961

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10 de septiembre de 2019

Jalil Ghassemi Nejad¹^,² , Mohammad Ataallahi¹ , Mohammad H. Salmanzadeh³ , Kyung T. Park³ , Hong G. Lee²^,⁴ , Alireza Shoae⁵ , Atieh Rahimi⁶ , Kyung I. Sung¹ , Kyu H. Park¹

¹College of Animal Life Sciences, Kangwon National University, ²Team of An Educational Program for Specialists in Global Animal Science, Brain Korea 21 Plus Project, Konkuk University, ³Persian Gesture, ⁴Department of Animal Science and Technology, College of Animal Bioscience and Technology, Konkuk University, ⁵Department of Animal Science, Animal Physiology, AgResearch, ⁶Faculty of Agriculture, Animal Science Department, Ferdowsi University of Mashhad

En este artículo

Resumen

En este estudio, presentamos un protocolo para la extracción de cortisol de la aleta y la mandíbula de las especies de esturión. Los niveles de cortisol de aleta y mandíbula se examinaron más adelante comparando dos disolventes de lavado seguidos de ensayos ELISA. Este estudio pilotó la viabilidad del cortisol maxilar como un indicador de estrés novedoso.

Resumen

Los objetivos de este estudio fueron desarrollar una técnica para la extracción de cortisol a partir de aletas de esturión utilizando dos disolventes de lavado (agua e isopropanol) y cuantificar cualquier diferencia en los niveles de cortisol de aleta entre tres especies principales de esturión. Las aletas fueron cosechadas de 19 esturiones sacrificados, incluyendo siete beluga(Huso huso),siete siberianos(Acipenser baerii)y cinco sevruga (A. stellatus). Los esturiones se criaron en granjas iraníes durante 2 años (2017-2018), y el análisis de extracción de cortisol se llevó a cabo en Corea del Sur (enero-febrero de 2019). Los jawbones de cinco H. huso también se utilizaron para la extracción de cortisol. Los datos se analizaron mediante el procedimiento de modelo lineal general (GLM) en el entorno SAS. Los coeficientes de variación intra y entre ensayos fueron de 14,15 y 7,70, respectivamente. Brevemente, la técnica de extracción de cortisol implicó el lavado de las muestras (300 x 10 mg) con 3 ml de disolvente (agua ultrapura e isopropanol) dos veces, rotación a 80 rpm durante 2,5 min, secado al aire de las muestras lavadas a temperatura ambiente (22-28 oC) durante 7 días, secado posterior las muestras que utilizan un batidor de perlas a 50 Hz durante 32 minutos y la molienda en polvo, aplicando metanol de 1,5 ml al polvo seco (75 x 5 mg), y rotación lenta (40 rpm) durante 18 horas a temperatura ambiente con mezcla continua. Después de la extracción, las muestras se centrifugaron (9.500 x g durante 10 min) y se transfirieron un sobrenadante de 1 ml a un nuevo tubo de microcentrífuga (1,5 ml), se incubaron a 38 oC para evaporar el metanol y se analizaron mediante un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) . No se observaron diferencias en los niveles de cortisol de aleta entre las especies o en los niveles de cortisol de aleta y mandíbula entre los disolventes de lavado. Los resultados de este estudio demuestran que la matriz jawbone de esturión es un indicador de tensión alternativo prometedor a matrices sólidas.

Introducción

El cortisol es un indicador fiable del estrés animal. La extracción de cortisol proporciona un marco válido para que los investigadores supervisen los niveles de estrés y los patrones generales en los factores de estrés. Por ejemplo, estudios previos han llevado a cabo la validación metodológica de mediciones de cortisol capilar utilizando diversos métodos en humanos¹^,², monos³^,⁴, bovino⁵, ovejas⁶, y peces^{dorados 7}^,⁸. En las especies de peces, se ....