La enfermedad de injerto contra huésped es una complicación importante después del trasplante alogénico de médula ósea. Las células dendríticas desempeñan un papel crítico en la patogénesis de la enfermedad del injerto contra el huésped. El artículo actual describe una nueva plataforma de trasplante de médula ósea para investigar el papel de las células dendríticas en el desarrollo de la enfermedad de injerto contra huésped y el efecto injerto-contra-leucemia.
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Artículo de método
Plataforma de trasplante de médula ósea para investigar el papel de las células dendríticas en la enfermedad de injerto contra huésped
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En este artículo
Resumen
Resumen
El trasplante alogénico de médula ósea (BMT) es una terapia eficaz para neoplasias malignas hematológicas debido al efecto injerto-contra leucemia (GVL) para erradicar los tumores. Sin embargo, su aplicación está limitada por el desarrollo de la enfermedad de injerto contra huésped (GVHD), una complicación importante de la MtB. La EICH se evoca cuando las células T en los injertos de donantes reconocen el clorótatógeno expresado por las células receptoras y montan ataques inmunológicos no deseados contra tejidos sanos receptores. Por lo tanto, las terapias tradicionales están diseñadas para suprimir la aleeactividad de las células T del donante. Sin embargo, estos enfoques perjudican sustancialmente el efecto GVL para que no se mejore la supervivencia del receptor. Por lo tanto, es esencial comprender los efectos de los enfoques terapéuticos en bMT, GVL y EICH. Debido a las capacidades de presentación de antígenos y secretodenia para estimular las células T del donante, las células dendríticas receptoras (CC) desempeñan un papel importante en la inducción de la EICH. Por lo tanto, la segmentación de los controladores de datos de los destinatarios se convierte en un enfoque potencial para controlar la EICH. Este trabajo proporciona una descripción de una nueva plataforma BMT para investigar cómo los cAños anfitriones regulan las respuestas de GVH y GVL después del trasplante. También se presenta un modelo BMT eficaz para estudiar la biología de la EICH y la EV después del trasplante.
Introducción
El trasplante alogénico de células madre hematopoyéticas (BMT) es una terapia eficaz para tratar las neoplasias malignas hematológicas1,2 a través del efecto injerto-contra-leucemia (GVL)3. Sin embargo, los linfocitos de donantes siempre montan ataques inmunológicos no deseados contra los tejidos receptores, un proceso llamado enfermedad del injerto contra el huésped (GVHD)4.
Los modelos murinos de La EICH son una herramienta eficaz para estudiar la biología de la EICH y la respuesta GVL5. Los ratones son un mod....
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Protocolo
Los procedimientos experimentales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Florida Central.
1. Inducción de la EICH
NOTA: El trasplante de células alogénicos de médula ósea (BM) (paso 1.2) se realiza dentro de las 24 h después de la irradiación. Todos los procedimientos descritos a continuación se realizan en un entorno estéril. Realice el procedimiento en una campana de cultivo de tejido y utilice reactivos filtrados.
- Día 0: Preparar los ratones receptores.
- Utilice ratones de tipo salvaje femenino (WT) en un fondo BALB/c (CD45.2+ ....
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Resultados
El principal modelo B6 (H2kb)-BALB/C (H2kd) correspondió estrechamente al desarrollo de la EICH después del trasplante(Figura 2). Los seis signos clínicos de la EICH establecidos anteriormente por Cooke et al.16 ocurrieron en los receptores trasplantados con células T WT-B6, pero no en los receptores trasplantados solo con BM (paso 1.5), que representaba el grupo negativo de la EICH. Hay dos fases en el desarrollo.......
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Discusión
El uso de células madre para adaptarse a un individuo en particular es un enfoque eficaz para tratar cánceres avanzados y resistentes18. Los productos farmacéuticos de moléculas pequeñas, sin embargo, han permanecido durante mucho tiempo un foco principal de la terapia personalizada contra el cáncer. Por otro lado, en la terapia celular una multitud de interacciones entre el donante y el huésped puede influir decisivamente en los resultados del tratamiento, como el desarrollo de la EICH después de.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen conflictos de intereses.
Agradecimientos
Este estudio es apoyado por la beca de inicio de la Universidad de Florida Central College of Medicine (a HN), la beca de inicio del Centro de Cáncer Hillman de la Universidad de Pittsburgh, Hillman Cancer Center (a HL), la Subvención NIH de los Estados Unidos #1P20CA210300-01 y la Beca del Ministerio de Salud de Vietnam #4694/QD-BYT (a PTH). Agradecemos al Dr. Xue-zhong Yu de la Universidad Médica de Carolina del Sur por proporcionar materiales para el estudio.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 0,5 M EDTA pH 8.0 100ML | Fisher Scientific | BP2482100 | tampón MACS |
| 10X PBS | Fisher Scientific | BP3994 | Tampón MACS |
| A20 Linfoma de células B | Universidad de Florida Central | Experimento GVL | interno |
| ACC1 fl/fl | Jackson Lab | 30954 | Experimento GVL |
| ACC1 fl/fl CD4cre | Universidad de Florida Central | Experimento GVL | |
| Anti-Biotina MicroBeads | Miltenyi Biotec | 130-090-485 | Enriquecimiento de células T |
| Anti-Humano/Ratón CD45R (B220) | Thermo Fisher Scientific | 13-0452-85 | Enriquecimiento de células T |
| Anti-ratón B220 FITC | Thermo Fisher Scientific | 10452-85 | Análisis de citometría |
| de flujo Anti-ratón CD11c- AF700 | Thermo Fisher Scientific | 117319 | Análisis de citometría de flujo |
| Anti-Mouse CD25 PE | Thermo Fisher Scientific | 12-0251-82 | Tinción |
| de flujo Anti-Mouse CD4 Biotina | Thermo Fisher Scientific | 13-0041-86 | Enriquecimiento de células T |
| Anti-Mouse CD4 eFluor® 450 (Pacific Blue® de reemplazo) | Thermo Fisher Scientific | 48-0042-82 | Tinción |
| de flujo Anti-ratón CD45.1 PE | Thermo Fisher Scientific | 12-0900-83 | Análisis de citometría |
| de flujo Anti-ratón CD8a APC | Thermo Fisher Scientific | 17-0081-83 | Análisis de citometría de flujo |
| Anti-ratón H-2Kb PerCP-Fluor 710 | Thermo Fisher Scientific | 46-5958-82 | Análisis de citometría de flujo |
| Anticuerpo MHC de clase II APC | Thermo Fisher Scientific | 17-5320-82 Análisis de | citometría de flujo |
| Anti-Mouse TER-119 Biotina | Thermo Fisher Scientific | 13-5921-85 | Enriquecimiento de células T |
| Anti-Thy1.2 | Bio Excel | BE0066 | BM generación |
| B6 fB-/- ratones | Universidad de Florida Central | Receptores | internos |
| B6. Ratones Ly5.1 (CD45.1+) | Río Charles | 564 | Donantes |
| Ratones BALB/c | Charles River | 028 | Receptores de trasplantes |
| C57BL/6 ratones | Charles River | 027 | Donantes/Receptores |
| CD11b | Thermo Fisher Scientific | 13-0112-85 | Enriquecimiento de células T |
| CD25-biotina | Thermo Fisher Scientific | 13-0251-82 | Enriquecimiento de células T |
| CD45R | Thermo Fisher Scientific | 13-0452-82 | Enriquecimiento de células T |
| CD49b Anticuerpo monoclonal (DX5)-biotina | Thermo Fisher Scientific | 13-5971-82 | Enriquecimiento de células |
| T Filtro de células 40 uM | Thermo Fisher Scientific | 22363547 Preparación de células | |
| Filtro de células 70 uM | Thermo Fisher Scientific | 22363548 | Preparación |
| de célulasD-Luciferin | Goldbio | LUCK-1G | Imágenes de animales vivos |
| Suero fetal bovino (FBS) | Atlanta Bilogicals R& Sistema D | D17051 | Cultivo celular |
| Tubos de citometría de flujo | Fisher Scientific | 352008 | Análisis de citometría de flujo |
| FVB/NCrl | Charles River | 207 | |
| Donantes Lipopolisacárido (LPS) | Millipore Sigma | L4391-1MG | DC columna |
| LS | Mitenyi Biotec | 130-042-401 | Preparación |
| celular MidiMACS | Miltenyi Biotec | 130-042-302 | Enriquecimiento de células T |
| Incubadora New Brunswick Galaxy 170R | Eppendorf | Galaxy 170 R | Cell Culture |
| Penicilina+estreptomicinaPenicilina/Estreptomicina (10.000 unidades de penicilina / 10.000 mg/ml estreptococo) | GIBCO | 15140 | Media |
| RPMI 1640 | Thermo Fisher Scienctific | 11875-093 | Media |
| TER119 | Thermo Fisher Scientific | 13-5921-82 | Enriquecimiento de células T |
| Xenogen IVIS-200 | Perkin Elmer | Xenogen IVIS-200 | Imágenes de animales |
| vivos X-RAD 320 Irradiador biológico | precisión X-RAY | X-RAD 320 | Irradiación corporal total |
Referencias
- Shlomchik, W. D. Graft-versus-host disease. Nature Reviews Immunology. 7, 340-352 (2007).
- Appelbaum, F. R. Haematopoietic cell transplantation as immunotherapy. Nature. 411, 385-389 (2001).
- Blazar, B. R., Murphy, W. J., Abedi, M.
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Reimpresiones y permisos
