Artículo de método
Este protocolo utilizó un sistema de miógrafo de presión disponible comercialmente para realizar pruebas de miógrafo de presión en la vagina murina y el cuello uterino. Utilizando medios con y sin calcio, las contribuciones del tono basal de las células musculares lisas (SMC) y la matriz extracelular pasiva (ECM) se aislaron para los órganos en condiciones fisiológicas estimadas.
Los órganos reproductores femeninos, específicamente la vagina y el cuello uterino, se componen de varios componentes celulares y una matriz extracelular única (ECM). Las células musculares lisas exhiben una función contráctea dentro de las paredes vaginales y cervicales. Dependiendo del entorno bioquímico y la distensión mecánica de las paredes del órgano, las células musculares lisas alteran las condiciones contráctas. La contribución de las células musculares lisas en condiciones fisiológicas basales se clasifica como un tono basal. Más específicamente, un tono basal es la constricción parcial basal de las células musculares lisas en ausencia de estimulación hormonal y neuronal. Además, el ECM proporciona soporte estructural para las paredes de los órganos y funciona como un reservorio para señales bioquímicas. Estas señales bioquímicas son vitales para varias funciones del órgano, como incitar al crecimiento y mantener la homeostasis. El ECM de cada órgano se compone principalmente de fibras de colágeno (principalmente tipos de colágeno I, III y V), fibras elásticas y glicosaminoglicanos/proteoglicanos. La composición y organización del ECM dicta las propiedades mecánicas de cada órgano. Un cambio en la composición de la ECM puede conducir al desarrollo de patologías reproductivas, como el prolapso de órganos pélvicos o la remodelación cervical prematura. Además, los cambios en la microestructura y rigidez de ECM pueden alterar la actividad celular muscular lisa y el fenotipo, lo que resulta en la pérdida de la fuerza contráctea.
En este trabajo, los protocolos reportados se utilizan para evaluar el tono basal y las propiedades mecánicas pasivas de la vagina de la murina no embarazada y el cuello uterino a los 4-6 meses de edad en estrus. Los órganos se montaron en un miógrafo de presión disponible comercialmente y se realizaron pruebas de diámetro de presión y de longitud de fuerza. Se incluyen datos de muestra sin muestras y técnicas de análisis de datos para la caracterización mecánica de los órganos reproductivos. Dicha información puede ser útil para construir modelos matemáticos y diseñar racionalmente intervenciones terapéuticas para las patologías de salud de las mujeres.
La pared vaginal se compone de cuatro capas, el epitelio, lamina propria, muscularis, y adventitia. El epitelio se compone principalmente de células epiteliales. La lámina propria tiene una gran cantidad de fibras elásticas y fibrilares de colágeno. El muscularis también se compone de fibras de elastina y colágeno, pero tiene una mayor cantidad de células musculares lisas. La adventitia se compone de elastina, colágeno y fibroblastos, aunque en concentraciones reducidas en comparación con las capas anteriores. Las células musculares lisas son de interés para los grupos de investigación biomecánicos motivados, ya que juegan un papel en la naturaleza contráctea de los ó....
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Para este estudio se utilizaron ratones hembra Singarantías de 4-6 meses (29,4 x 6,8 gramos) en estrus. Todos los procedimientos fueron aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales del Instituto de la Universidad de Tulane. Después del parto, los ratones se aclimataron durante una semana antes de la eutanasia y fueron alojados en condiciones estándar (ciclos de luz/oscuridad de 12 horas).
1. Sacrificio del ratón en estrus
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El análisis exitoso de las propiedades mecánicas de los órganos reproductores femeninos está supeditado a la disección adecuada de órganos, la cannulación y las pruebas. Es imperativo explantar los cuernos uterinos a la vagina sin defectos (Figura1). Dependiendo del tipo de órgano, el tamaño de la cánula variará (Figura 2). La cannulación debe hacerse para que el órgano no pueda moverse durante el experimento, pero tampoco dañar la pared del órgano durante el procedimien.......
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El protocolo proporcionado en este artículo presenta un método para determinar las propiedades mecánicas de la vagina murina y el cuello uterino. Las propiedades mecánicas analizadas en este protocolo incluyen las condiciones de tono pasivo y basal de los órganos. Las condiciones de tono pasivo y basal se inducen alterando el entorno bioquímico en el que el órgano está sumergido. Para este protocolo, los medios involucrados en las pruebas basales contienen calcio. La prueba de la condición del tono basal permite el aisla.......
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La obra fue financiada por la concesión de la beca NSF CAREER #1751050.
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| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Catéter 2F | Millar | SPR-320 | catéter para medir la presión cervical |
| 6-0 Sutura | Fine Science Tools | 18020-60 | lazos de sutura más grandes |
| CaCl2 (anhidro) | VWR | 97062-590 | Concentración de HBSS: 140 mg/mL |
| CaCl2-2H20 | Fischer químico | BDH9224-1KG | br/> Concentración de KRB: 3,68 g/L |
| Dextrosa (D-glucosa)) | VWR | 101172-434 Concentración de | HBSS: 1000 mg/mL Concentración de KRB: 19,8 g/L |
| Pinzas Dumont #5/45 Pinzas | de ciencia fina | 11251-35 | pinza curva |
| Dumont SS Pinzas | fina | 11203-25 | Pinza recta |
| Eclipse | Nikon | E200 | Microscopio utilizado para la obtención de imágenes |
| Caudalímetro | Danés MyoTechnologies | Caudalímetro 161FM | dentro del aparato de ensayo |
| Transductor de fuerza - 110P | Transductor de fuerza | 100079 danés MyoTechnologies | |
| ImageJ | SciJava | ImageJ1 | utilizado para medir el volumen |
| Cajas de instrumentos | Fine Science Tools | 20830-00 | carcasa para sujetar herramientas de disección |
| KCl | Fisher Chemical | 97061-566 | Concentración de HBSS: 400 mg/ mL Concentración de KRB: 3,5 g/L |
| KH2PO4 | G-Biosciences | 71003-454 | Concentración de HBSS: 60 mg/mL |
| MgCl2 | VWR | 97064-150 | Concentración de KRB: 1,14 g/L |
| MgCl2-6H2O | VWR | BDH9244-500G | Concentración de HBSS: 100 mg/ mL |
| MgSO4-7H20 | VWR | 97062-134 | Concentración de HBSS: 48 mg/mL |
| 6278402 | de Microsoft | de Excel Mircosoft | utilizado para la hoja de cálculo |
| Na2HPO4 (anhidro dibásico) | VWR | 97061-588 | Concentración de HBSS: 48 mg/mL Concentración de KRB: 1,44 g/L |
| NaCl | VWR | 97061-274 | Concentración de HBSS: 8000 mg/mL Concentración de KRB: 70,1 g/L |
| NaHCO3 | VWR | 97062-460 | Concentración de HBSS: 350 mg/ mL Concentración de KRB: 21.0 g/L |
| Sistemas de miógrafos | de presión Danish MyoTechnologies | 110P y 120CP | Sistema de miógrafo de presión: programa , dispositivo de canulación y unidad de control |
| Transductor de presión | Danish Myo | 100106 | Transductor de presión |
| Estudiante Dumont #5 Pinzas | Fine Science Tools | 91150-20 | pinzas rectas |
| Student Vannas Tijeras de resorte Fine | Science Tools | 91500-09 | Microtijeras |
| Tinte para tejidos | Productos Bradley | 1101-3 | tinta para medir el estiramiento in vivo |
| Transductor de ultrasonido | FujiFilm Visual Sonics | LZ-550 | transductor de ultrasonido utilizado; 256 elementos, frecuencia central de 40 MHz |
| VEVO2100 | FujiFilm Visual Sonics | VS-20035 | ultrasonido utilizado para la obtención |
| de imágenes Wagner Scissors | Fine Science Tools | 14069-12 | tijeras más grandes |
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