Aquí describimos un nuevo método para detectar el establecimiento exitoso de circulación sanguínea compartida de dos parabiontes a través de una inyección de glucosa en venas caudales, que causa un daño mínimo y no es mortal para los parabionts.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Detectar el establecimiento de suministro de sangre compartido en ratones parabióticos mediante inyección de glucosa en vena caudal
En este artículo
Resumen
Resumen
La parabiosis es un método experimental para combinar quirúrgicamente dos animales paralelos a lo largo del eje longitudinal del cuerpo. Presentamos un protocolo para detectar el establecimiento exitoso de chimerismo sanguíneo en parabionts mediante una inyección de glucosa en vena caudal. Se construyeron ratones parabióticos. La glucosa se inyectó en el ratón del donante a través de la vena de la cola, y la fluctuación del nivel de glucosa en sangre se midió en ambos ratones utilizando un glucómetro de la sangre en diferentes momentos. Nuestros resultados mostraron que después de la inyección de glucosa, el nivel de glucosa en sangre en ratones donantes aumentó bruscamente después de 1 min y disminuyó lentamente a partir de entonces. Mientras tanto, el nivel de glucosa en sangre de los ratones receptores alcanzó un pico de 15 minutos después de la inyección. Se obtuvieron resultados similares con Evans azul, utilizado como un control positivo para la glucosa. La fluctuación sincrónica de los niveles de glucosa en sangre indica que el flujo sanguíneo entre los dos ratones se estableció con éxito.
Introducción
La parabiosis es un método de modelado en el que dos organismos vivos se unen quirúrgicamente y se desarrollan como un único sistema fisiológico con un sistema circulatorio compartido1. Estos modelos se han utilizado ampliamente para estudiar la fisiología debido a la ventaja de que las sustancias producidas por un solo individuo pueden actuar sobre ambos animales al mismo tiempo a través del sistema circulatorio compartido. Desde mediados de la década de 1800, cuando los experimentos parabóticos fueron pioneros por Paul Bert2,los métodos para construir modelos parabióticos se han estandarizado. Sin embargo, ha faltado u....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
Todos los procedimientos relacionados con los animales y su cuidado fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Médica de Harbin.
NOTA: Las herramientas y equipos necesarios para el método se enumeran en la Tabla de materiales.
1. Preparación de materiales y animales
- Pedir ratones macho C57BL/6 con peso entre 20 g-25 g de un proveedor de animales de laboratorio estándar.
- Casar a los ratones en un ciclo de 12 h de luz: 12 h de oscuridad a 24 o 26 oC con acceso ad libitum al agua y a los alimentos.
2....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
En seis ratones donantes, los niveles de glucosa en sangre aumentaron bruscamente a 26,5 émol/L (aumento del 173%) a un promedio de 1 min después de la inyección de 100 ml de glucosa (1,2 g/kg) a través de la vena de la cola y luego disminuyeron gradualmente a 13,3 mol/L a los 60 min. En ratones receptores, la glucosa en sangre aumentó lentamente después de la inyección y alcanzó el primer nivel máximo a 15 min (47% de aumento, 12,2 mol/L). Sobre la base de los resultados anteriores, el e.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
La parabiosis se refiere a la técnica quirúrgica de conectar dos animales vivos para establecer un sistema vascular común por medios experimentales6,7,8. La ventaja de este modelo es que las sustancias producidas por un solo individuo pueden actuar sobre ambos animales al mismo tiempo. Por lo tanto, el modelo de parabiosis se puede utilizar para explorar el papel de una sustancia o factor en una enfermedad relacionada, producien.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por la National Nature Science Foundation of China (81570399 y 81773735), el Programa Nacional De Investigación y Desarrollo Clave de China - Proyecto de Investigación de Modernización de la Medicina Tradicional China (2017YFC1702003), y Hei Long Jiang Fondo de Ciencia Juvenil Sobresaliente (JC2017020).
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| pinza curvada | JZ Instrumentos quirúrgicos, China | J31340 | |
| tijeras finas | JZ Instrumentos quirúrgicos, China | WA1030 | |
| pinza de aguja | JZ Instrumentos quirúrgicos, China | 60017961 | |
| Jeringas de 2,5 mL | Agilent, EE. UU. | 5182-9642 | |
| Tribromoethano | Sigma-Aldrich, EE. UU. | T48402-5G | |
| penicilina | Solarbio, China | IP0150 | |
| tramadol | Yijishiye, China | YJT712520 | |
| glucómetro | Roche Diabetes Care, Indiana | Accu-Chek Tiras reactivas activas | |
| Evan's blue Counterstain | Solarbio, China | G1810 | |
| crema depilatoria | Nair, EE. UU. | LL9161 | |
| Manta térmica ( Almohadilla térmica) | Kent Scientific Corp, EE. UU. | TP-22G | |
| Afeitadora eléctrica | Codos, China | CP-5000 | |
| 3-0,5-0 sutura quirúrgica | Fábrica de agujas de sutura médica de Shanghai, China | SYZ 3-0 #, SYZ 5-0 # |
Referencias
- Baruch, K., et al. Aging-induced type I interferon response at the choroid plexus negatively affects brain function. Science. 346 (6205), 89-93 (2014).
- Zhang, Y., et al. Positional cloning of the mouse obese gene and its human homologue. Na....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
