En este informe, describimos un método de doble giro para preparar plasma rico en plaquetas activado (PRP). Utilizando trombina autóloga, se cultivaron células madre derivadas del tejido adiposo humano (hASCs). Se ha demostrado que el PRP activado promueve la proliferación de hASCs.
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Artículo de método
Preparación de plasma rico en plaquetas activado para el cultivo de células madre derivadas del tejido adiposo humano
En este artículo
Resumen
Resumen
El plasma rico en plaquetas activado (PRP) preparado a partir de sangre total mediante centrifugación demostró un efecto estimulante de la proliferación en varios tipos de células cultivadas, lo que implica un posible uso en medicina regenerativa. En este caso, se utilizó un método de doble centrifugado para preparar PRP a partir de sangre entera. El PRP se activó aún más por la trombina autóloga. Se midió el recuento de plaquetas en el PRP activado y se examinó el efecto estimulante de la proliferación en las células madre derivadas del tejido adiposo humano (hASCs). El recuento de plaquetas resultante fue 11,5 veces mayor en PRP que en plasma de sangre total. La proliferación de hASCs se incrementó notablemente con la incubación con 1% de PRP. El método descrito se puede utilizar para preparar PRP de forma reproducible con una alta concentración de plaquetas. El PRP preparado por este método promueve marcadamente la proliferación de hASCs.
Introducción
El plasma rico en plaquetas activado (PRP) se prepara por centrifugación de sangre total y se ha demostrado que contiene plaquetas muy por encima de los niveles basales1. La RPP autóloga se ha utilizado ampliamente en el tratamiento quirúrgico, incluida la cicatrización de heridas2, lesiones óseas3 y cirugías estéticas 4,5. Después de la activación de las plaquetas en el PRP, los gránulos α presentes en las plaquetas liberan varios factores de crecimiento, como el factor de crecimiento derivado de plaqueta....
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Protocolo
El estudio fue aprobado por la Junta de Revisión de Ética de la Universidad Médica de Kansai de acuerdo con las directrices éticas de la Declaración de Helsinki de 1975. Todos los especímenes fueron recolectados y utilizados con el consentimiento informado de los donantes.
1. Preparación
- Después de obtener el consentimiento informado, extraiga sangre de donantes adultos sanos. Aquí, se recolectó sangre de cuatro donantes de sangre masculinos de entre 28 y 38 años.
- Se recomienda a los donantes beber 500 mL de agua 6 h antes de la extracción de sangre.
NOTA: Los rangos de referencia p....
- Se recomienda a los donantes beber 500 mL de agua 6 h antes de la extracción de sangre.
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Resultados
Concentraciones enriquecidas de plaquetas y PDGF-BB en PRP
Las concentraciones de plaquetas y PDGF-BB en PRP aumentaron 11,5 veces y 25,9 veces, respectivamente, tan altas como las del plasma entero. Sin embargo, las concentraciones de EGF en el PRP no cambiaron y el IGF fue solo el 70% del plasma total (Tabla 1). Los experimentos se replicaron cuatro veces por el método de doble espín.
Aumento de la proliferación de hASC mediante la estimulación co.......
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Discusión
Después de la activación del PRP, varios factores de crecimiento, como PDGF, EGF, IGF, TGF-β y VEGF 1,6,7 "activan" las células y tejidos de las heridas, promoviendo la cicatrización de las heridas20,21. En el caso de la cirugía estética de reconstrucción, se ha demostrado que las células activadas inducen la cicatrización y mejoran la e.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros contrapuestos.
Agradecimientos
No aplicable.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Jeringa de 20 mL, cerradura de jeringa Terumo tipo | Terumo, Tokio, Japón. | SS-20LZP | |
| Tubo de 50 mL, Tubo Cónico de Polipropileno Corning | , NY, USA. | 352070 | |
| Sistema Automatizado de Hematología | Sysmex Corp., Tokio, Japón | XE-2100 | |
| Aguja de Extracción de Sangre, SafeTouch Juego PSV con adaptador Luer, 21 G x 3/4" | Nipro, Osaka, Japón. | 32-384 | |
| Tubo de extracción de sangre, solución ACD Un tubo de extracción de sangre, 8,5 mL | BD Vacutainer, NJ, EE. UU. | Tubo de extracción de sangre 364606 | |
| 366430 | |||
| Cloruro de calcio, 1 mEq/mL, | fábrica farmacéutica de Otsuka, Tokushima, Japón. | 3215400A1061 | |
| Cánula, aguja sin bisel BS, 18 G (1,2 mm) x 75 mm | BS Medical, Tokio, Japón. | BS-81007 | No está a la venta |
| Kit de conteo de células-8 | Dojindo Molecular Technologies, Kumamoto, Japón | Centrífuga CK04 | |
| Kokusan, Tokio, Japón. | H-19F | ||
| Eppendorf, Hamburgo, Alemania. | 5415R | ||
| EnSpire 2300 Lector multietiqueta | PerkinElmer, Inc., Waltham, MA, EE. UU | ||
| Unidad de filtro | Merck Millipore, Co. Cork, Irlanda. | ||
| Kit de ELISA Quantikine EGF Humano R | & D Systems, Minneapolis, MN, EE. UU. | DEG00 | |
| IGF-I humano Quantikine ELISA Kit | R& D Systems, Minneapolis, MN, EE. UU. | DG100 | |
| Humano PDGF-BB Quantikine ELISA Kit | R& D Systems, Minneapolis, MN, EE. UU. | DBB00 | |
| Punta de pipeta, ART 1000 Reach Barrier Tip | Thermo Scientific, MA, EE. UU. | 2079-05-HR | |
| Pipeta, Nichipet EXII 100-1000 μ L | Nichiryo, Saitama, Japón. | 00-NPX2-1000 | |
| Guantes de examen de nitrilo de libra esterlina | Kimberly-Clark | 50707 | |
| Yamazen Alcohol para desinfección | Yamazen Pharmaceutical, Osaka, Japón. | A7L07 |
Referencias
- Eppley, B. L., Woodell, J. E., Higgins, J. Platelet quantification and growth factor analysis from platelet-rich plasma: implications for wound healing. Plastic and Reconstructive Surgery. 114 (6), 1502-1508 (2004).
- Salcido, R. S.
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Reimpresiones y permisos
