Bloqueo del flujo linfático mediante la sutura de los vasos linfáticos aferentes en ratones

Resumen

Se presenta un protocolo para bloquear el flujo linfático mediante la sutura quirúrgica de los vasos linfáticos aferentes.

Resumen

Los vasos linfáticos son fundamentales para mantener el equilibrio de líquidos tisulares y optimizar la protección inmune mediante el transporte de antígenos, citoquinas y células a los ganglios linfáticos de drenaje (LN). La interrupción del flujo linfático es un método importante al estudiar la función de los vasos linfáticos. Los vasos linfáticos aferentes desde la almohadilla murina hasta los ganglios linfáticos popliteales (pNN) están bien definidos como las únicas rutas para el drenaje linfático en los pNN. Suturar estos vasos linfáticos aferentes puede prevenir selectivamente el flujo linfático a los pNN. Este método permite la interferencia en el flujo linfático con un daño mínimo a las células endoteliales linfáticas en el pLN drenante, los vasos linfáticos aferentes, así como otros vasos linfáticos alrededor de la zona. Este método se ha utilizado para estudiar cómo afecta la linfa los altos veules endoteliales (HEV) y la expresión de quimiocina en el LN, y cómo la linfa fluye a través del tejido adiposo que rodea el LN en ausencia de vasos linfáticos funcionales. Con el creciente reconocimiento de la importancia de la función linfática, este método tendrá aplicaciones más amplias para desentrañar aún más la función de los vasos linfáticos en la regulación del microambiente LN y las respuestas inmunitarias.

Introducción

La organización espacial del sistema linfático proporciona soporte estructural y funcional para eliminar eficientemente el líquido extracelular y transportar antígenos y células que presentan antígenos (APC) a los LN drenantes. Los vasos linfáticos iniciales (también llamados capilares linfáticos) son altamente permeables debido a sus uniones intercelulares discontinuas, que facilitan la recolección efectiva de líquidos, células y otros materiales de los espacios extracelulares circundantes¹. Los vasos linfáticos iniciales se funden en vasos linfáticos recolectan, que tienen uniones intercelulares estrechas, una membrana sótano continua y cober....

Protocolo

Todo el trabajo animal debe ser aprobado por el comité institucional y gubernamental de ética y manejo de animales.  Esta es una cirugía de no supervivencia.

1. Preparación de materiales

1. Preparar 100 ml de etanol al 70% mezclando 70 ml de etanol 100% con 30 ml de agua estéril. Autoclave todas las herramientas quirúrgicas antes de la cirugía y mantener las herramientas en 70% etanol antes y durante la cirugía para mantener la esterilización.
2. Prepare un aparato de inyección.
   1. Corte de 30 cm de tubo de polietileno (0,28 mm de diámetro). Conecte la punta de una aguja de 30 G x 1/2 (aguja A) a un extremo del tubo de po....

Resultados

La sutura de vasos linfáticos se ha utilizado en estudios anteriores^15,16,17,19, donde sirvió como una herramienta importante para estudiar la función del flujo linfático antes de que se entendiera mejor la biología molecular de los vasos linfáticos. El bloqueo del flujo linfático interrumpe la homeostasis LN, lo que lleva a que los HEVs pierdan la expresión génica crítica necesaria para la loc.......

Discusión

El bloqueo del flujo linfático tendrá amplias aplicaciones en la manipulación del suministro de antígenos al LN en condiciones saludables y enfermas. Es posible utilizar este método para controlar el momento de la administración de antígenos con el fin de estudiar cómo el flujo linfático continuo regula la respuesta inmune en el drenaje de LNs. Este método de interrupción del flujo linfático también se puede utilizar para estudiar cómo afecta la linfa a la compartimentación celular, la activación celular, la migración ce.......

Materiales

denty amortiguado con fosfato (PBS)

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
0.9% cloruro de sodio salino	Baxter	JB1323
100% etanol	Greenfield Global		University of Calgary servicios de distribución UN1170.
Crema depilatoria	Nair		Nair Sensitive Formula Hair Removal Crè me con Aceite de Almendras Dulces y Aceite para Bebés, 200 ml. O producto similar.
Evans Blue dye	Sigma Life Science	E2129-10G	Para 1 ml de tinte azul Evans, agregue 0,1 g de azul Evans a 10 ml de PBS. La solución Evens Blue se filtrará a través de filtros de 0,22 mm y se mantendrá estéril en alícuotas de 1 ml.
Isómero I de isotiocianato de fluoresceína I (FITC)	Sigma Life Science	F7250-1G
Pinzas Dumont #3	WPI	500337
Pinzas Dumont #5	WPI	500233
Aparato de inyección			Conecte un extremo de la tubería de polietileno a 30G y veces; y frac12; aguja. Coloque una jeringa TB de 1 ml en la aguja. Desaloje el eje de la aguja de otros 30G y veces; y frac12; aguja. Inserte el extremo romo de la 30G y veces; y frac12; eje de la aguja en el otro extremo del tubo. El diámetro interior de este tubo es de 0,28 mm. Por lo tanto, 1,6 cm de líquido en el tubo es 1 μl.
Jeringa de insulina	Becton Dickinson and Company (BD)	329461
Pinza IRIS recta	WPI	15914
Tijeras IRIS	WPI	14218-G
Ketamina	Narketan	DIN 02374994	Los proveedores de ketamina y xilacina suelen estar bajo regulación institucional y gubernamental.
Needles (26Gx3/8)	Becton Dickinson and Company (BD)	305110
Needles (30Gx1/2)	Becton Dickinson and Company (BD)	305106
Paton Needle Holder	ROBOZ	RS6403	recta, sin bloqueo; Tubo
Sigma Life Science	P4417-100TABfuerte
>Tubo de polietileno	Becton Dickinson and Company (BD)	427401
Cinta quirúrgica (1,25 cm x 9,1 m)	Transpore	1527-0
(2,5 cm x 9,1 m)	Transpore	1527-1
Sutura	Davis y Geck CYANAMID Canadá	11/04	0.7 monofilamento métrico polipropileno
Jeringa (1ml)	Becton Dickinson and Company (BD)	309659
tijeras VANNAS	World Precision Instruments (WPI)	14122-G
xilacina	Rompun	DIN02169606	Los proveedores de ketamina y xilacina suelen estar bajo regulación institucional y gubernamental.
Equipo
Microscopio de disección	Olympus		Olympus S261 (522-STS OH141791) con fuente de luz: Olympus Highlight 3100
Confocal Microscope	Leica		SP8

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