Este protocolo describe una novedosa técnica de medir los tres parámetros más importantes de la lesión cerebral isquémica en el mismo conjunto de muestras cerebrales de roedores. El uso de una sola muestra cerebral es altamente ventajoso en términos de costos éticos y económicos.
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Artículo de método
Medición del edema cerebral post-accidente cerebrovascular, zona infarta y descomposición de la barrera hematoencefálica en un solo conjunto de muestras cerebrales de roedores
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En este artículo
Resumen
Resumen
Una de las causas más comunes de morbilidad y mortalidad en todo el mundo es el accidente cerebrovascular isquémico. Históricamente, un modelo animal utilizado para estimular el accidente cerebrovascular isquémico implica oclusión arterial cerebral media (MCAO). La zona infarta, el edema cerebral y la descomposición de la barrera hematoencefálica (BBB) se miden como parámetros que reflejan el alcance de la lesión cerebral después del MCAO. Una limitación significativa a este método es que estas mediciones se obtienen normalmente en diferentes muestras de cerebro de rata, lo que conduce a cargas éticas y financieras debido al gran número de ratas que necesitan ser eutanasiadas para un tamaño de muestra adecuado. Aquí presentamos un método para evaluar con precisión las lesiones cerebrales después de MCAO midiendo la zona infarta, el edema cerebral y la permeabilidad bbb en el mismo conjunto de cerebros de ratas. Esta novedosa técnica proporciona una manera más eficiente de evaluar la fisiopatología del accidente cerebrovascular.
Introducción
Una de las causas más comunes de morbilidad y mortalidad en todo el mundo es el accidente cerebrovascular. A nivel mundial, el accidente cerebrovascular isquémico representa el 68% de todos los casos de accidente cerebrovascular, mientras que en los Estados Unidos el accidente cerebrovascular isquémico representa el 87% de los casos de accidente cerebrovascular1,2. Se estima que la carga económica del ictus alcanza los 34.000 millones de dólares en los Estados Unidos2.000 millones de dólares y los 45.000 millones de euros en la Unión Europea3. Los modelos animale....
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Protocolo
Los siguientes procedimientos se llevaron a cabo de acuerdo con las recomendaciones de la Declaración de Helsinki y Tokio y las Directrices para el uso de animales experimentales de la Comunidad Europea. Los experimentos también fueron aprobados por el Comité de Cuidado animal de la Universidad Ben-Gurion del Negev.
1. Preparación de ratas para el procedimiento experimental
- Seleccione ratas macho sprague-dawley adultas sin patología excesiva, cada una con un peso de entre 300 y 350 g.
- Mantenga todas las ratas a temperatura ambiente a 22 °C, con 12 horas de ciclos claros y oscuros antes del experimento.
- Asegúres....
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Resultados
Medición de zona infarto
Una prueba t de muestra independiente indicó que 19 ratas que se sometieron a MCAO permanente demostraron un aumento significativo en el volumen de infartos cerebrales en comparación con las 16 ratas operadas por sham (MCAO=7.49% ± 3.57 contra. Sham = 0,31% ± 1,9, t(28,49) = 7,56, p < 0,01 (véase la Figura 2A)). Los datos se expresan como un porcentaje medio del hemisferio contralateral ± SD.
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Discusión
El objetivo principal del presente protocolo era demostrar mediciones consistentes de tres parámetros principales de lesión isquémica: IZ, BE y BBB permeabilidad. Estudios previos en este campo han demostrado la posibilidad de realizar uno o dos de estos parámetros juntos en la misma muestra. Además de la reducción de costes que ofrece este método de tres partes, también proporciona un modelo bioético más deseable que limita el número de animales que deben ser operados y posteriormente eutanasiados. Al igual que en todas.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Agradecemos a Maryna Kuscheriava, Maksym Kryvonosov, Daryna Yakumenko y Evgenia Goncharyk del Departamento de Fisiología, Facultad de Biología, Ecología y Medicina, Oles Honchar, Universidad Dnipro, Dnipro, Ucrania por su apoyo y contribuciones útiles a nuestros debates. Los datos obtenidos forman parte de la tesis doctoral de Ruslan Kuts.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Jeringa de 2 mL | Braun | 4606027V | |
| Clorhexidina al 2% en solución de alcohol al 70% | Sigma-Aldrich | 500 cc | Proporciona antisepsia general de la piel en el campo operatorio |
| Aguja de 27 G con jeringa | Braun | 305620 | |
| 3-0 Suturas de seda | Henry Schein | 1007842 | |
| 4-0 Sutura de nylon | 4-00 | ||
| Cerebro & Matrices de tejidos | Sigma-Aldrich | 15013 | |
| Cánula Venflon 22 G | KD-FIX | ||
| centrífuga Sigma 2-16P | Sigma-Aldrich | Sigma 2-16P | |
| Balanzas analíticas compactas | Sigma-Aldrich | HR-AZ/HR-A | |
| Balanza digital | Sigma-Aldrich | Rs 4.000 | |
| Tijeras de | disecciónSigma-Aldrich | Z265969 | |
| pipeta Eppendorf | Sigma-Aldrich | Z683884 | |
| tubo Eppendorf | Sigma-Aldrich | EP0030119460 | |
| Detector de fluorescencia | Tecan, Mä nnedorf Suiza | Modelo: Lector multimodo Infinite 200 PRO | Opcional. |
| Detector de fluorescencia | Molecular Devices LLC | VWR cat. # 10822 512 SpectraMax Paradigm Multi Mode Microplate Reader Base Instrument | Opcional. |
| Esponjas de gasa | Fisher | 22-362-178 | |
| Calentador con termómetro | Heatingpad-1 | Modelo: HEATINGPAD-1/2 | |
| Microclips hemostáticos | Sigma-Aldrich | ||
| Horizon-XL | Mennen Medical Ltd | ||
| Manguito de infusión | ABN | IC-500 | |
| Micro pinzas | Sigma-Aldrich | ||
| Microtijeras | Sigma-Aldrich | ||
| Multiset | Teva Medical | 998702 | |
| Microscopio Olympus BX 40 | Pinza de operación Olympus | ||
| Sigma-Aldrich | |||
| Tijeras de operación | Sigma-Aldrich | ||
| Escáner óptico | Canon | Cano Scan 4200F | Resolución Placas de Petri de 3200 x 6400 ppp |
| Sigma-Aldrich | P5606 | ||
| Purina Chow | Purina | 5001 | comida de laboratorio para roedores que se administra a ratas, ratones y hámsteres es una nutrición de ciclo de vida que se ha utilizado en la investigación biomédica durante más de 5 décadas. Proporcionado a las ratas ad libitum en este experimento. |
| Jaulas para ratas | Techniplast | 2000P | Alojamiento convencional para roedores. Se utilizaron jaulas para alojar a las ratas durante todo el experimento |
| Hojas de bisturí #11 | Sigma-Aldrich | S2771 | |
| Software | |||
| Adobe Photoshop CS2 for Windows | Adobe | ||
| ImageJ 1.37v | NIH | El código fuente está disponible de forma gratuita. El autor, Wayne Rasband (wayne@codon.nih.gov), trabaja en la Subdivisión de Servicios de Investigación del Instituto Nacional de Salud Mental, Bethesda, Maryland, EE.UU. | |
| SPSS Statistics 22 | IBM | ||
| Office 365 ProPlus | Microsoft-Microsoft | Office Excel | |
| Windows 10 | Microsoft | ||
| Reagents | |||
| Cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio | Sigma-Aldrich | 298-96-4 | |
| 50% ácido tricloroacético | Sigma-Aldrich | 76-03-9 | |
| Etanol 96 % | Rómico | Líquido inflamable | |
| Azul de Evans 2% | Sigma-Aldrich | 314-13-6 | |
| Isoflurano, USP 100% | Piramamal Critical Care, Inc | NDC 66794-017 |
Referencias
- Krishnamurthi, R. V., et al. Global and regional burden of first-ever ischaemic and haemorrhagic stroke during 1990-2010: findings from the Global Burden of Disease Study 2010. Lancet Global Health. 1, 259-281 (2013).
- Benjamin, E. J., et al.
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Reimpresiones y permisos
