El ensayo ex vivo descrito en este estudio utilizando extractos de homogeneización intestinal y tinción de inmunofluorescencia representa un método novedoso para examinar la morfogénesis hifágica de Candida albicans en el tracto gastrointestinal. Este método se puede utilizar para investigar las señales ambientales que regulan la transición morfogenética en el intestino.
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Artículo de método
Un ensayo ex vivo para estudiar Candida albicans Morphogenesis hifal en el tracto gastrointestinal
En este artículo
Resumen
Resumen
Candida albicans hyphal morphogenesis in the gastrointestinal (GI) está estrechamente controlada por varias señales ambientales, y desempeña un papel importante en la difusión y patogénesis de este patógeno fúngico oportunista. Sin embargo, los métodos para visualizar las hifas fúngicas en el tracto gastrointestinal in vivo son desafiantes, lo que limita la comprensión de las señales ambientales en el control de este proceso de morfogénesis. El protocolo descrito aquí demuestra un novedoso método ex vivo para la visualización de la morfogénesis hifal en extractos de homogeneización intestinal. Utilizando un ensayo ex vivo, este estudio demuestra que el contenido de cecal de ratones tratados con antibióticos, pero no de ratones de control no tratados, promueven la morfogénesis hiphal de C. albicans en el contenido intestinal. Además, la adición de grupos específicos de metabolitos intestinales al contenido de cecal de ratones tratados con antibióticos regula diferencialmente la morfogénesis hifílo ex vivo. En conjunto, este protocolo representa un método novedoso para identificar e investigar las señales ambientales que controlan la morfogénesis hipófrica de C. albicans en el tracto gastrointestinal.
Introducción
Candida albicans es un patógeno fúngico oportunista y polimórfico que normalmente es commensal, pero puede sufrir un cambio morfológico en una forma virulenta capaz de causar infecciones potencialmente mortales en individuos inmunocomprometidos1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,
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Protocolo
Todos los protocolos de animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad del Medio Oeste (IACUC) como se describió antesdel 57. El Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad del Medio Oeste aprobó este estudio bajo el Protocolo MWU IACUC #2894. Las políticas de cuidado animal de MWU siguen la Política del Servicio de Salud Pública (PHS) sobre cuidado y uso humano de animales de laboratorio y las políticas establecidas en la Ley de Bienestar Animal (AWA).
1. Los ratones estudian el protocolo estándar
- Utilice ratones C57BL/6J machos ....
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Resultados
Estos resultados junto con los hallazgos anteriores del laboratorio Thangamani60 indican que cuando C. albicans se cultiva ex vivo en extractos de homogeneato intestinal tomados del estómago, intestino delgado e intestino grueso de control no tratado y ratones tratados con antibióticos, C. albicans generalmente se desarrolla con una morf levaduraología (Figura 1B). Sin embargo, cuando se cultiva en el extracto de cecal de ratones tratados con ant.......
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Discusión
El método descrito aquí presenta una forma novedosa de investigar el efecto de los impactos antibiótico, dietético, xenobiótico y terapéutico en la morfogénesis hiphal de C. albicans en el tracto gastrointestinal. Dado que la mayoría de las infecciones sistémicas se originan en el tracto gastrointestinal21,22,23,24,25,26
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Divulgaciones
Los autores no tienen intereses financieros competidores u otros conflictos de intereses.
Agradecimientos
Los autores reconocen los recursos y el apoyo de la central de investigación de núcleos celulares y moleculares de la Universidad del Medio Oeste.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 1 - 10 y micro; L Puntas de pipeta | Fisher Scientific | 02-707-454 | Miscelánea |
| 100 - 1000 µ L Puntas de pipeta | Fisher Scientific | 02-707-400 | Miscelánea |
| 20 - 200 µ L Puntas de pipeta | Fisher Scientific | 02-707-451 | Miscelánea |
| Ácido 2-metilbutírico | Sigma | 193070-25G | Compuesto inhibidor de hifas |
| 488 cabra anti-conejo IgG | Invitrogen (Fisher) | A11008 | IF Tinción secundaria ab |
| Agar | Fisher | BP1423-500 | YPD |
| Microscopio de imagen automatizado | Keyence | BZX700 | |
| Candida Albicans Anticuerpo | Invitrogen (Fisher) | PA1-27158 | IF Tinción primaria de ab |
| cefoperazona | Cayman | 16113 | antibiótico |
| ácido desoxicólico | Sigma | 30960 | compuesto inhibidor de hifas |
| D-glucosa | Fisher | D16-500 | compuesto promotor de hifas |
| pinza Fisher | 08-885 | ||
| ácido láctico | Alfa Aesar | AAAL13242-06 | Compuesto inhibidor de hifas |
| ácido litocólico | Sigma | L6250-10G | Compuesto inhibidor de hifas |
| palmítico | Sigma | P5585-10G | Compuesto inhibidor de hifas |
| Paraformaldehído | Alfa Aesar | A11313 | IF Fijador de tinción |
| Solución salina tamponada con fosfato (PBS), 10x | Alfa Aesar | J62692 | PBS componente |
| ácido p-tolicacético | SCBT | sc-257959 | compuesto inhibidor de hifas |
| ácido sebácico | Sigma | 283258-250G | compuesto inhibidor de hifas |
| tijeras de punta afilada | Fisher | 28301 | |
| agua estéril Milli-Q N | /A | N/A | Miscelánea |
| YPD Caldo | BD Biosciences | 242810 | Componente de agar YPD |
Referencias
- Huffnagle, G. B., Noverr, M. C. The emerging world of the fungal microbiome. Trends in Microbiology. 21 (7), 334-341 (2013).
- Wisplinghoff, H., et al. Nosocomial bloodstream infections in US hospitals: analysis o....
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Reimpresiones y permisos
