Aislamiento de líquidos proximales para investigar el microambiente tumoral del adenocarcinoma pancreático

Greta Donisi; Marialuisa Barbagallo; Giovanni Capretti; Gennaro Nappo; Panteleimon  G. Takis; Alessandro Zerbi; Federica Marchesi; Nina Cortese

doi:10.3791/61687

Artículo de método

Aislamiento de líquidos proximales para investigar el microambiente tumoral del adenocarcinoma pancreático

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DOI:

10.3791/61687

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5 de noviembre de 2020

Greta Donisi^*¹ , Marialuisa Barbagallo^*² , Giovanni Capretti¹^,³ , Gennaro Nappo¹^,³ , Panteleimon G. Takis⁴^,⁵^,⁶ , Alessandro Zerbi¹^,³ , Federica Marchesi²^,⁷ , Nina Cortese²

¹Section of Pancreatic Surgery, Humanitas Clinical and Research Center-IRCCS, ²Department of Immunology and Inflammation, Humanitas Clinical and Research Center-IRCCS, ³Department of Biomedical Sciences, Humanitas University, ⁴Giotto Biotech S.R.L., ⁵Section of Bioanalytical Chemistry, Division of Systems Medicine, Department of Metabolism, Digestion and Reproduction, Imperial College London, ⁶National Phenome Centre, Department of Metabolism, Digestion and Reproduction, Faculty of Medicine, Imperial College London, ⁷Department of Medical Biotechnology and Translational Medicine, University of Milan

^* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

El jugo pancreático es una fuente preciosa de biomarcadores para el cáncer de páncreas humano. Describimos aquí un método para el procedimiento de recolección intraoperatoria. Para superar el desafío de adoptar este procedimiento en modelos murinos, sugerimos una muestra alternativa, el líquido intersticial tumoral, y describimos aquí dos protocolos para su aislamiento.

Resumen

El adenocarcinoma pancreático (PDAC) es la cuarta causa principal de muerte relacionada con el cáncer, y pronto se convertirá en la segunda. Existe una necesidad urgente de variables asociadas a patologías pancreáticas específicas para ayudar al diagnóstico diferencial preoperatorio y al perfil del paciente. El jugo pancreático es un fluido corporal relativamente inexplorado que, debido a su proximidad al sitio del tumor, refleja cambios en el tejido circundante. Aquí describimos en detalle el procedimiento de recolección intraoperatoria. Desafortunadamente, traducir la recolección de jugo pancreático a modelos murinos de PDAC, para realizar estudios mecanicistas, es técnicamente muy desafiante. El líquido intersticial tumoral (TIF) es el líquido extracelular, fuera de la sangre y el plasma, que baña las células tumorales y del estroma. Al igual que el jugo pancreático, por su propiedad de recolectar y concentrar moléculas que se encuentran diluidas en plasma, TIF puede ser explotado como un indicador de alteraciones microambientales y como una valiosa fuente de biomarcadores asociados a enfermedades. Dado que TIF no es fácilmente accesible, se han propuesto varias técnicas para su aislamiento. Describimos aquí dos métodos simples y técnicamente poco exigentes para su aislamiento: centrifugación tisular y elución tisular.

Introducción

El adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC) es uno de los tumores más agresivos y pronto se convertirá en la segunda causa de muerte ^1,2,3. Es bien conocido por su microambiente inmunosupresor y por su falta de respuesta a los protocolos de inmunoterapia⁴. Actualmente, la resección quirúrgica sigue siendo la única opción curativa para el PDAC, sin embargo, hay una alta frecuencia de recaídas tempranas y complicaciones posquirúrgicas. La falta de síntomas específicos hasta una etapa avanzada no permite un diagnóstico precoz, contribuyendo a la caducidad....