Modelo de oclusión traqueal fetal transuterina en ratones

Resumen

Varios modelos animales de hernia diafragmática congénita y oclusión traqueal fetal presentan ventajas y desventajas con respecto a cuestiones éticas, costo, dificultad quirúrgica, tamaño, tasas de supervivencia y disponibilidad de herramientas genéticas. Este modelo proporciona una nueva herramienta para estudiar el impacto de la oclusión traqueal y el aumento de la presión luminal en el desarrollo pulmonar.

Resumen

La oclusión traqueal fetal (TO), una modalidad de tratamiento establecida, promueve el crecimiento pulmonar fetal y la supervivencia en hernia diafragmática congénita grave (CDH). Después de TO, la retención del líquido epitelial secreto aumenta la presión luminal e induce el crecimiento pulmonar. Se han definido varios modelos animales para entender la fisiopatología de CDH y TO. Todos tienen sus propias ventajas y desventajas como la dificultad de la técnica, el tamaño del animal, el costo, las altas tasas de mortalidad y la disponibilidad de herramientas genéticas. En este documento, se describe un nuevo modelo transuterino de TO fetal murino. Los ratones embarazadas fueron anestesiados y el útero expuesto a través de una laparotomía de línea media. La tráquea de fetos seleccionados se ligaron con una sola sutura transuterina colocada detrás de la tráquea, una arteria carótida y una vena yugular. La presa fue cerrada y se le permitió recuperarse. Los fetos fueron recogidos justo antes de la parto. La relación entre pulmón y peso corporal en los fetos TO fue mayor que la de los fetos de control. Este modelo proporciona a los investigadores una nueva herramienta para estudiar el impacto de to y aumento de la presión luminal en el desarrollo pulmonar.

Introducción

La hernia diafragmática congénita (CDH) ocurre en 1:2500 embarazos y da como resultado hipoplasia pulmonar e hipertensión pulmonar neonatal^1,2,3,4,5,6. La oclusión traqueal fetal (TO) es una terapia prenatal establecida en pacientes graves con CDH que involucran fetoscopia en la semana^{gestacional 26-30} en la que se coloca un globo justo por encima de la carina y luego se retira en la semana^gestacional 32. Este TEMPORAL PARA INducir el crecimiento pulm....

Protocolo

Todos los experimentos han cumplido con la Guía de Los Institutos Nacionales de Salud para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio (Nih Publications No. 80023, revisado en 1978). El procedimiento fue aprobado con el protocolo de la UICN #2016-0068 por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Fundación de Investigación Infantil de Cincinnati.

1. Preparación

1. Para aparearse con ratones tipo salvaje (WT) C57BL/6 emparejados a la edad, colóquelos en la misma jaula a las 6:00 p.m. y sepáralos a las 9:00 a.m. del día siguiente.
2. Para determinar el día embrionario 0 (E0), mira el tapón vaginal, que tiene una....

Resultados

Este estudio examinó 37 fetos: 20 (54,1%) como TO frente a 17 (45,9%) como control. Como la tráquea no podía ser ocluida en 4 fetos en el grupo TO, fueron excluidos del estudio. No hubo ninguna diferencia significativa en la mortalidad en ambos grupos: 4 fetos (25%) en el grupo TO y 2 fetos (12%) en el grupo de control (p=0,334, relación de cuotas (OR) 2,5, intervalo de confianza del 95% (CI) 0,39-16,05). El peso corporal medio, el peso pulmonar y la relación entre pulmón y peso corporal .......

Discusión

Este método describe un procedimiento quirúrgico de oclusión traqueal fetal en ratones y su impacto en el desarrollo pulmonar. Hay algunos pasos críticos en el protocolo que deben realizarse cuidadosamente para lograr un to correctamente. El calor de la plataforma en la que se lleva a cabo la cirugía y la solución salina introducida en la cavidad peritoneal es crucial para la progresión del embarazo. Además, se debe aplicar una ligera presión en la cabeza de los cachorros para garantizar la exposición del cuello.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Buprenorfina	Par Pharmaceutical	NDC 42023-179-05	Para anestesia regional
Isoflurano	Halocarbon Life Sciences	NDC 66794-017-25	Para anestesia general
Gafas de aumento EE	. UU. Médico-quirúrgico	SLR-250LBLK	Al menos 2.5x
Microscopio Nikon 90i	Nikon	3417	de fluorescencia motorizada
	Macherey-Nagel, Dü ren, Alemania	740952.5	Kit
ensayo de proteínas BCA Pierce para aislamiento de ADN	Thermo Fisher, IL, EE. UU.	23225	Cuantificación de proteínas
Sutura de poliglactina	Ethicon	VCP451H	4-0, 24 mm, portaobjetos de
polilisina de corte	VWR	48382-117	Portaobjetos de adherencia para microscopio Sutura de
polipropileno	Ethicon	Y432H	6-0, 13 mm 1/2c Tampón RIPA de punta cónica
	Sigma-Aldrich, Missouri, EE. UU	R0278-50ml	Aislamiento
proteínas Sutura de seda	Ethicon		VCP682G 4-0, 24 mm, corte
Trizol	Invitrogen	15596026	Aislamiento de ARN

Kit de tejido de nucleospina de . de