Este artículo describe una técnica de trasplante de tejido que fue diseñada para probar las propiedades de señalización y patrones del prosencéfalo basal durante el desarrollo craneofacial.
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Artículo de método
Creación de quimeras del cerebro anterior aviar para evaluar el desarrollo facial
En este artículo
Resumen
Resumen
El embrión aviar se ha utilizado como sistema modelo durante más de un siglo y ha llevado a una comprensión fundamental del desarrollo de los vertebrados. Una de las fortalezas de este sistema modelo es que el efecto y la interacción entre los tejidos se pueden evaluar directamente en embriones quiméricos. Hemos demostrado previamente que las señales del cerebro anterior contribuyen a la morfogénesis facial al regular la forma del dominio de expresión del erizo sónico (SHH) en la zona ectodérmica frontonasal (FEZ). En este artículo, se describe el método para generar las quimeras del cerebro anterior y proporcionar ilustraciones de los resultados de estos experimentos.
Introducción
Gran parte de la investigación contemporánea en biología del desarrollo se centra en el papel de los genes en la formación de embriones. Existen buenas herramientas para examinar los mecanismos de desarrollo desde una perspectiva genética. Sin embargo, los embriones se ensamblan y sufren morfogénesis en respuesta a las interacciones tisulares. El sistema aviar es una herramienta clásica utilizada para evaluar la variedad de interacciones tisulares que regulan el desarrollo por las siguientes razones: la embriología es bien entendida, los embriones son fácilmente accesibles, las herramientas para el análisis de los sistemas aviares están bien desarrolladas y los embrio....
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Protocolo
El pato blanco de Pekín (Anas platyrhynchos), el pollo Livorno blanco (Gallus gallus) y la codorniz japonesa (Cortunix coturnix japonica) se incuban a 37 °C en una cámara humidificada hasta que se ajustan a HH7/817.
1. Preparación del tejido del donante
NOTA: Se ha descrito la preparación de reactivos y herramientas y cómo abrir huevos para la manipulación experimental6.
- Prepare medios DMEM con rojo neutro, una pipeta de transferencia de vidrio y agujas de tungsteno afiladas.
- Exponga los embriones (como se muestra en
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Resultados
Evaluación del quimerismo y la contaminación por trasplantes
Para evaluar las quimeras, se debe abordar el alcance del quimerismo y la contaminación del injerto con otros tipos de células. La creación de quimeras mediante el trasplante de tejidos de codorniz en embriones de pollo permite este tipo de análisis. Usando el anticuerpo QCPN las células de codorniz se pueden visualizar y distinguir de los tejidos del huésped (Figura 1 C, D). En este caso, solo .......
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Discusión
El método descrito permite examinar las interacciones tisulares entre el prosencéfalo basal y el ectodermo adyacente. Este enfoque difiere de los métodos anteriores de trasplante del cerebro anterior, porque el tejido del donante estaba restringido al prosencéfalo ventral. Esto elimina el trasplante de las células de la cresta neural, que han demostrado participar en la morfología facial de patrones 9,10. Por lo tanto, restringir el injerto al prosencéfalo basal .......
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Divulgaciones
Todos los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
La investigación reportada en esta publicación fue apoyada por el Instituto Nacional de Investigación Dental y Craneofacial de los Institutos Nacionales de Salud bajo los números de adjudicación R01DE019648, R01DE018234 y R01DE019638.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 1x PBS | TEK | TEKZR114 | |
| 35x10 mm Placa de Petri | Falcon | 1008 | |
| DMEM | Thermofisher | 11965084 | |
| Portaagujas | Fine Science Tools | 26016-12 | |
| Neutro Rojo | Sigma | 553-24-2 | |
| Nº 5 Pinzas Dumont | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| Pasteur Pipets | Thermofisher | 13-678-6B | |
| QCPN | anticuerpo Estudios del desarrollo Banco de hibridomas, Universidad de Iowa, Iowa, EE. UU. | ||
| Tijeras Herramientas de | ciencia fina | 14058-11 | |
| Aguja de tungsteno | Herramientas de ciencia fina | 26000 |
Referencias
- Waddington, C. Developmental Mechanics of Chicken and Duck Embryos. Nature. 125, 924-925 (1930).
- Noden, D. M. The role of the neural crest in patterning of avian cranial skeletal, connective, and muscle tissues. Developmental Biology. 96<....
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Reimpresiones y permisos
