Los embriones de pollo, como modelo de desarrollo clásico, se utilizan en nuestro laboratorio para evaluar las cardiotoxicidades del desarrollo después de la exposición a diversos contaminantes ambientales. Los métodos de exposición y los métodos de evaluación morfológica/funcional establecidos se describen en este manuscrito.
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Artículo de método
Uso del embrión de pollo como una herramienta poderosa en la evaluación de cardiotoxicidades del desarrollo
En este artículo
Resumen
Resumen
Los embriones de pollo son un modelo clásico en los estudios de desarrollo. Durante el desarrollo de embriones de pollo, la ventana de tiempo del desarrollo del corazón está bien definida, y es relativamente fácil lograr una exposición precisa y oportuna a través de múltiples métodos. Además, el proceso de desarrollo del corazón en embriones de pollo es similar al de los mamíferos, lo que también resulta en un corazón de cuatro cámaras, lo que lo convierte en un modelo alternativo valioso en la evaluación de cardiotoxicidades del desarrollo. En nuestro laboratorio, el modelo de embrión de pollo se utiliza rutinariamente en la evaluación de cardiotoxicidades del desarrollo después de la exposición a diversos contaminantes ambientales, incluidas las sustancias perfluoroalquiladas y polifluoroalquiladas (PFAS), las partículas (PM), el escape de diesel (DE) y los nanomateriales. El tiempo de exposición se puede seleccionar libremente en función de la necesidad, desde el comienzo del desarrollo (día embrionario 0, ED0) hasta el día anterior a la eclosión. Los principales métodos de exposición incluyen la inyección de células de aire, microinyección directa e inhalación de células de aire (desarrollada originalmente en nuestro laboratorio), y los puntos finales actualmente disponibles incluyen la función cardíaca (electrocardiografía), la morfología (evaluaciones histológicas) y las evaluaciones biológicas moleculares (inmunohistoquímica, qRT-PCR, western blotting, etc.). Por supuesto, el modelo de embrión de pollo tiene sus propias limitaciones, como la disponibilidad limitada de anticuerpos. Sin embargo, con más laboratorios que comienzan a utilizar este modelo, se puede utilizar para hacer contribuciones significativas al estudio de las cardiotoxicidades del desarrollo.
Introducción
El embrión de pollo es un modelo de desarrollo clásico, que se ha utilizado durante más de doscientos años1. El modelo de embrión de pollo tiene varias ventajas en comparación con los modelos tradicionales. En primer lugar, ya hace más de 70 años, el desarrollo normal del embrión de pollo se había ilustrado muy claramente en la guía de estadificación Hamburger-Hamilton2,en la que se definieron un total de 46 etapas durante el desarrollo embrionario de pollo con tiempo preciso y características morfológicas, facilitando la detección de desarrollo anormal. Además, el modelo de embrión de pollo tiene otras características, ....
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Protocolo
Todos los procedimientos descritos fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la Universidad de Qingdao. En nuestro laboratorio, los huevos se incubaron en dos incubadoras. Los huevos se mantuvieron erguidos en la incubadora y se colocaron al azar en los estantes. Las condiciones de incubación de los huevos fueron las siguientes: la temperatura de incubación comenzó a 37,9 °C y disminuyó gradualmente a 37,1 °C a medida que avanzaba la incubación; la humedad comenzó en el 50% y aumentó gradualmente al 70%.
1. Métodos de exposición
NOTA: La exposición de contaminantes ambient....
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Resultados
Resultados de exposición
Inyección de células de aire
La inyección de células de aire puede exponer eficazmente los embriones de pollo en desarrollo a varios agentes, que pueden detectarse posteriormente en las muestras recolectadas (suero, tejido, etc.) de embriones / pollos recién nacidos. Aquí hay un ejemplo, en el que se inyectó ácido perfluorooctanoico (PFOA) con células de aire, y luego se determinaron las concentraciones séricas de PFOA con cromatografía líquida de ultra rendimiento-espectrometría de masas. .......
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Discusión
El embrión de pollo ha sido un modelo clásico en estudios de desarrollo durante 200 años1. Nuestros métodos presentados en este manuscrito se han utilizado en la evaluación de varios contaminantes ambientales, incluyendo ácido perfluorooctanoico, material particulado y escape de diesel con éxito5,7,8,9,10,11.......
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Divulgaciones
Los autores declaran no tener conflicto de intereses.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Subvención No. 91643203, 91543208, 81502835).
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 4% de formaldefijador de formaldehído tamponado con fosfato | Biosharp, Hefei, China | REF: BL539A | |
| 75% etanol | Guoyao, Shanghai, China | CAS:64-17-5 | |
| Monitor de bioseñalización BL-420E+ | Taimeng, Chengdu, China | BL-420E+ | |
| Lámpara de ovoscopia | Zhenwei, Dezhou, China | WZ-001 | |
| Jeringa desechable | Zhiyu, Jiangsu, China | ||
| Incubadora de huevos | Keyu, Dezhou, China | KFX | |
| Balanza eléctrica | OHAUS, Shanghai, China | AR 224CN | |
| Incubadora electrotérmica | Shenxian, Shanghai, China | DHP-9022 | |
| Etanol absoluto | Guoyao, Shanghai, China | CAS:64-17-5 | |
| Huevo | de gallina fértilJianuo, Jining, China | ||
| Kit de tinción de hematoxilina y eosina | Beyotime, Pekín, China | C0105 | |
| Parafina de histología | Aladdin, Shanghai, China | P100928-500g Punto de | fusión 52 ~ 54 & deg; |
| C Histología parafina | Aladdin, Shanghai, China | P100936-500g Punto de | fusión 62 ~ 64 & deg; |
| Catéter C IV | KDL, Zhejiang, China | Los catéteres tienen que ser blandos y de plástico. | |
| Lentivirus | Genechem, Shanghai, China | Los lentivirus fueron diseñados/sintetizados individualmente por Genechem. | |
| Kit de tinción tricrómica de Masson | Solarbio, Pekín, China | G1340 | |
| Sonda metálica | Jinuotai, Pekín, China | ||
| Microinyector (5 uL) | Anting, Shanghái, China | ||
| Microscopio | CAIKON, Shanghái, China | XSP-500 | |
| Leica, Alemania | Microtomo HistoCore BIOCUT | ||
| cuchilla | Leica,Alemania | Leica 819 | |
| Pentobarbitual sodio | Yitai Technology Co. Ltd., Wuhan, China | CAS: 57-33-0 | |
| Pipeter(10ul) | Sartorius, Alemania | ||
| Yoduro de povidona | Longyuquan, Taian, China | ||
| Tijera | Anqisheng, Suzhou, China | ||
| Solución salina estéril | Kelun, Chengdu, China | ||
| Aceite de girasol | Mighty Jiage, Jiangsu, China | Cualquier aceite de girasol comercial para consumo humano debe funcionar | |
| Cinta M | & G, Shanghai, China | ||
| Tedlar PVF Bag (5L) | Delin, Dalian, China | ||
| Mezclador de vórtice | SCILOGEX, Rocky Hill, CT, US | MX-F | |
| Xylene | Guoyao, Shanghai, China | CAS: 1330-20-7 |
Referencias
- Kain, K. H., et al. The chick embryo as an expanding experimental model for cancer and cardiovascular research. Developmental Dynamics. 243 (2), 216-228 (2014).
- Menna, T. M., Mortola, J. P. Effects of posture on the respir....
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Reimpresiones y permisos
