Diferenciación de células madre pluripotentes inducidas porcinas (piPSC) en células progenitoras neurales (NPC)

Lucas Simões Machado; Kaiana Recchia; Naira Caroline Godoy Pieri; Ramon Cesar Botigelli; Raquel Vasconcelos Guimarães de Castro; Jéssica Brunhara Cruz; Laís Vicari de Figueiredo Pessôa; Fabiana Fernandes Bressan

doi:10.3791/62209

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Artículo de método

Diferenciación de células madre pluripotentes inducidas porcinas (piPSC) en células progenitoras neurales (NPC)

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DOI:

10.3791/62209

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11 de junio de 2021

Lucas Simões Machado¹ , Kaiana Recchia¹^,² , Naira Caroline Godoy Pieri² , Ramon Cesar Botigelli²^,³ , Raquel Vasconcelos Guimarães de Castro² , Jéssica Brunhara Cruz¹ , Laís Vicari de Figueiredo Pessôa² , Fabiana Fernandes Bressan¹^,²

¹Department of Surgery, Faculty of Veterinary Medicine and Animal Sciences, University of São Paulo, ²Department of Veterinary Medicine, Faculty of Animal Sciences and Food Engineering, University of São Paulo, ³Department of Pharmacology, Institute of Biosciences, São Paulo State University

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe un método para la diferenciación química y el cultivo de células progenitoras neurales derivadas de células madre pluripotentes inducidas porcinas (piPSCs).

Resumen

Las neuronas derivadas de iPSC son modelos in vitro atractivos para estudiar la neurogénesis y los cambios fenotípicos tempranos en las enfermedades mentales, principalmente cuando la mayoría de los modelos animales utilizados en la investigación preclínica, como los roedores, no pueden cumplir con los criterios para trasladar los hallazgos a la clínica. Los primates no humanos, caninos y porcinos se consideran modelos más adecuados para la investigación biomédica y el desarrollo de fármacos, principalmente debido a sus similitudes fisiológicas, genéticas y anatómicas con los humanos. El modelo porcino ha ganado un interés particular en la neurociencia traslacional, lo que permite realizar pruebas de seguridad y alotrasplante. En este trabajo se describe la generación de iPSCs porcinas junto con su posterior diferenciación en células progenitoras neurales (NPCs). Las células generadas expresaron los marcadores NPC Nestin y GFAP, confirmados por RT-qPCR, y fueron positivos para Nestin, b-Tubulin III y Vimentin por inmunofluorescencia. Estos resultados muestran la evidencia de la generación de células tipo NPC tras la inducción in vitro con inhibidores químicos a partir de un modelo animal grande, un modelo interesante y adecuado para la investigación en medicina regenerativa y traslacional.

Introducción

A pesar de que muchos investigadores tienen como objetivo comprender mejor los mecanismos celulares y el desarrollo patológico de las enfermedades neurológicas en humanos, existen muchas limitaciones para el uso de técnicas no invasivas en humanos, como la resonancia magnética (RM), y la imposibilidad, en la mayoría de los casos, de aplicar técnicas invasivas como el trazado del tracto y el registro intracelular¹. También es difícil obtener tejido cerebral post-mortem de buena calidad, ya que los estados agónicos prolongados de los donantes pueden afectar el cerebro e interferir con los estudios