Aislamiento primario de microglía a partir de cerebros de ratones postnatales

Siling Du; Shanshan Xiong; Xiangjuan Du; Ti-Fei Yuan; Bo Peng; Yanxia Rao

doi:10.3791/62237

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Artículo de método

Aislamiento primario de microglía a partir de cerebros de ratones postnatales

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DOI:

10.3791/62237

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25 de febrero de 2021

Siling Du^*¹^,² , Shanshan Xiong^*³ , Xiangjuan Du⁴ , Ti-Fei Yuan¹ , Bo Peng³^,⁴^,⁵ , Yanxia Rao¹

¹Shanghai Key Laboratory of Psychotic Disorders, Shanghai Mental Health Center, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, ²Division of Biology and Biomedical Science, Washington University in St. Louis, ³Shenzhen Institutes of Advanced Technology, Chinese Academy of Sciences, ⁴Department of Neurosurgery, Huashan Hospital, Institute for Translational Brain Research, State Key Laboratory of Medical Neurobiology, MOE Frontiers Center for Brain Science, Fudan University, ⁵Co-innovation Center of Neuroregeneration, Nantong University

^* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

El cultivo celular primario es uno de los enfoques más utilizados para estudiar la biología microglial in vitro. Aquí, desarrollamos un método para el aislamiento simple y rápido de la microglía desde el día postnatal del ratón 1 (P1) hasta el P4.

Resumen

La microglía son los fagocitos mononucleares del sistema nervioso central (SNC), que desempeñan un papel clave en el mantenimiento de la homeostasis y la regulación del proceso inflamatorio en el SNC. Para estudiar la biología microglial in vitro, la microglía primaria muestra grandes ventajas en comparación con las líneas celulares microgliales inmortalizadas. Sin embargo, el aislamiento de la microglía del cerebro de ratón postnatal es relativamente menos eficiente y requiere mucho tiempo. En este protocolo, proporcionamos un método rápido y fácil de seguir para aislar la microglía primaria del cerebro de ratón neonatal. Los pasos generales de este protocolo incluyen la disección del cerebro, el cultivo primario de células cerebrales y el aislamiento de la microglía. Con este enfoque, los investigadores pueden obtener microglía primaria con alta pureza. Además, la microglía primaria recolectada fue capaz de responder al desafío de los lipopolisacáridos, lo que indica que conservaron su función inmunitaria. Colectivamente, desarrollamos un enfoque simplificado para aislar de manera eficiente la microglía primaria con alta pureza, lo que facilita una amplia gama de investigaciones de biología microglial in vitro.

Introducción

La microglía, las células inmunitarias residentes en el sistema nervioso central (SNC), desempeñan un papel fundamental en el mantenimiento de la homeostasis, que responde a los desafíos neuropatológicos¹. Recientemente, se han llevado a cabo investigaciones intensivas para descubrir las funciones fisiológicas de la microglía, por ejemplo, en la enfermedad de Alzheimer². En la actualidad, el perfil transcripcional de la microglía a la resolución de una sola célula obtenida durante el desarrollo del SNC, el envejecimiento y la enfermedad proporciona una mejor comprensión de la función mic....