Este artículo describe y demuestra la administración de vacunas intranasales y la colección de leche de los conejos lactantes (Cuniculus de Oryctolagus) como medios de evaluar inmunidad de la mucosa en un modelo traslacional apropiado de la inmunización maternal.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Inmunización intranasal y recolección de leche en estudios de inmunización materna en conejos blancos de Nueva Zelanda (Oryctolagus cuniculus)
En este artículo
Resumen
Resumen
Debido a las similitudes en la placentación y la transferencia de anticuerpos con los humanos, los conejos son un excelente modelo de inmunización materna. Las ventajas adicionales de este modelo de investigación son la facilidad de reproducción y recolección de muestras, el período de gestación relativamente corto y los grandes tamaños de camada. Las vías de inmunización comúnmente evaluadas incluyen subcutánea, intramuscular, intranasal e intradérmica. La recolección de muestras no terminales para la detección cronológica de las respuestas inmunológicas a estas inmunizaciones incluye la recolección de sangre, tanto de presas como de kits, y la leche de la lactancia. En este artículo, demostraremos las técnicas que nuestro laboratorio ha utilizado en estudios de inmunización materna en conejos blancos de Nueva Zelanda(Oryctolagus cuniculus),incluida la inmunización intranasal y la recolección de leche.
Introducción
Los estudios de inmunización materna y transferencia de anticuerpos son invaluables por numerosas razones, ya que esta es la ruta inicial de transferencia de inmunidad y la posterior protección contra patógenos y enfermedades en recién nacidos y bebés. La inmunización materna tiene el potencial de tener un impacto positivo en la salud materna y del lactante/niño a nivel mundial al reducir la morbilidad y la mortalidad asociadas con ciertos patógenos durante este período vulnerable1. El objetivo principal de esta estrategia es aumentar los niveles de anticuerpos maternos específicos durante todo el embarazo. Estos anticuerpos pueden entonces ser....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
Todos los procedimientos fueron aprobados y realizados de acuerdo con las políticas de la IACUC de la Universidad de Duke.
NOTA: Los materiales necesarios se proporcionan en la Tabla de materiales.
1. Sedación y anestesia del conejo
- Sedar el conejo hembra (sexualmente maduro; aproximadamente 5-30 meses de edad) mediante la administración de acepromazina por vía intramuscular (IM) a una dosis de 1 mg/kg. Dependiendo del tamaño del animal, use una jeringa de 1 o 3 ml con una aguja de 25 G. Los músculos epaxiales son el sitio preferido de la inyección intramuscular.
NOTA: La acepromazin....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
En la Figura 1se muestra una visión general de un diseño típico de un estudio de inmunización intranasal materna, que incorpora las inmunizaciones, la reproducción, el encamiento, la lactancia y la transferencia de anticuerpos. Aunque no se ilustra, la sangre se debe recoger antes de la inmunización inicial para las medidas de la línea de fondo y a través del resto del estudio a intervalos regulares. La sangre se obtiene fácilmente a través de la arteria del oído central con sedación leve y .......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
Aunque no se describe en el protocolo anterior, la cría exitosa de los conejos es necesaria para este modelo materno y para permitir la recolección de leche. Los conejos son fácilmente criados por cubierta viva en un entorno de investigación. Se recomienda que se transfiera a la jaula del buck para la cría, ya que puede ser territorial y agresivo si se mantiene en su propia jaula con el buck. Si las hembras no son receptivas después de 15 minutos (como lo indica huir mordiendo o vocalizando), la dora debe ser colocada de.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Los autores desean agradecer a la División de Recursos de Animales de Laboratorio de la Universidad de Duke y a su equipo de cría por su asistencia y gran cuidado prestado a los animales. Además, a los autores les gustaría reconocer al equipo de PhotoPath dentro del Departamento de Patología por su asistencia con las partes de audio y video del manuscrito. Este trabajo fue apoyado por fondos de investigación discrecionales del laboratorio Staats.
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Inmunización intranasal | |||
| anestesia fuerte/Vaporizador | Vet Equip | 901807 | |
| aguja hipodérmica (25 g) | Terumo | 07-806-7584 | |
| Isoflurano (botella de 250 mL) | Patterson Veterinary | 07-893-1389 | 2-4% |
| Jeringa Luer Lock (1 mL) | Air-Tite | 07-892-7410 | |
| mucosa | N/A | N/A | Vacuna experimental |
| Cono de nariz | McCulloch Medical | 07891-1097 | |
| Puntas de pipeta | VWR | 53503-290 | |
| Pipeta | VWR | 89079-962 | |
| PromAce (Maleato de acepromazina) | Boehringer Ingelheim | 07-893-5734 | 1mg/kg IM |
| Puralube Estéril Ungüento oftálmico | Dechra | 07-888-2572 | |
| Milk Collection | |||
| Alcohol Prep 2 capas | Covidien | 07-839-8871 | |
| Máquina de Anestesia/Vaporizador | Vet Equip | 901807 | |
| Agujas Hipodérmicas (25 g) | Terumo | 07-806-7584 | |
| Isoflurano (Frasco de 250 mL) | Patterson Veterinary | 07-893-1389 | 2-4% |
| Jeringa Luer Lock (1 mL) | Air-Tite | 07-892-7410 | |
| Esponja no tejida (4x4) | Covidien | 07-891-5815 | |
| Cono de nariz | McCulloch Medical | 07891-1097 | |
| PromAce (Maleato de acepromazina) | Boehringer Ingelheim | 07-893-5734 | 1mg/kg IM |
| Puralube Estéril Pomada oftálmica | Dechra | 07-888-2572 | |
| Vial cónico estéril (15 mL) | Falcon | 14-959-49B |
Referencias
- Munoz, F. M. Current Challenges and Achievements in Maternal Immunization Research. Frontiers in Immunology. 9, 436(2018).
- Kachikis, A., Englund, J. A. Maternal immunization: Optimizing protection for the mother and infant. The Journal of Infect....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
