Lombriz, Lumbricus terrestris: un novedoso modelo de vasculatura de microinyección in vivo en invertebrados

Asis Lopez; Yaswitha Mikkilineni; Shayna Berman; Damir Khismatullin; Gregory T. Clement; Matthew R. Myers

doi:10.3791/62449

Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.

Artículo de método

Lombriz, Lumbricus terrestris: un novedoso modelo de vasculatura de microinyección in vivo en invertebrados

2.1K visualizaciones

⸱

DOI:

10.3791/62449

⸱

1 de abril de 2021

Asis Lopez¹^,⁵ , Yaswitha Mikkilineni² , Shayna Berman³ , Damir Khismatullin¹^,⁴ , Gregory T. Clement⁵ , Matthew R. Myers⁵

¹Bioinnovation PhD Program, Tulane University, ²Biology Department, Virginia Commonwealth University, ³Mechanical Engineering Department, Montgomery College, ⁴Biomedical Engineering Department, Tulane University, ⁵US Food and Drug Administration

En este artículo

Resumen

Las lombrices de tierra son un nuevo modelo de laboratorio in vivo de invertebrados para estudios de vasculatura. Presentamos técnicas y equipos que permiten una cirugía eficiente y microinyección en la vasculatura de la lombriz de tierra. Se describen los protocolos quirúrgicos, las técnicas de microinyección y el procedimiento para producir micropipetas a medida.

Resumen

Aunque los vertebrados son indispensables para la investigación biomédica, los estudios a menudo están limitados por factores como el costo, la revisión interna prolongada y las consideraciones éticas. Presentamos la lombriz de tierra como una alternativa de bajo costo para invertebrados aplicables a ciertos estudios preliminares de vasculatura. Debido a la disponibilidad quirúrgica de los vasos dorsales de la lombriz de tierra, los vasos ventrales y cinco pares de pseudo corazones, las lombrices de tierra son fácilmente accesibles, ofrecen un mantenimiento de bajo costo y requieren la administración de solo pequeñas dosis de un compuesto dado. El modelo de lombriz de tierra proporciona un sistema circulatorio vascular cerrado simple con una estructura de hemoglobina similar a la sangre humana. Se proporciona un protocolo para anestesiar las lombrices de tierra y realizar incisiones quirúrgicas para exponer los vasos sanguíneos relevantes. Las micropipetas para la administración de compuestos se forman calentando y tirando del vidrio con un extractor de pipetas y utilizando un sistema de biselado para crear una punta de aguja fina a escala micrométrica. A continuación, las puntas se utilizan con un microposicionador y un microinyector para inyectar compuestos arbitrarios en el sistema vascular de una lombriz de tierra, de forma repetida, con la disponibilidad de grandes tamaños de muestra y pequeños volúmenes de compuestos. Se proporcionan detalles sobre las complejidades del procedimiento de inyección. El pequeño tamaño de los vasos de la lombriz de tierra es un desafío, particularmente en el caso del vaso ventral; Sin embargo, el dominio de las técnicas presentadas ofrece una alta repetibilidad como una solución de bajo costo, lo que hace que los estudios de tamaño de muestra muy grande sean prácticos.

Introducción

La lombriz de tierra se ha utilizado como un importante bioindicador y bioensayo para aplicaciones científicas previas 1,2,3,4,5,6; Es un organismo ideal para evaluar los riesgos biológicos de los residuos peligrosos y tóxicos en ambientes terrestres para estudios in situ y de bioacumulación, como biocidas (insecticidas) en el suelo y efectos ecotoxicológicos adversos 7,8,9,10.