Las tiras inmunocromatográficas de flujo lateral (CSI) basadas en membranas son herramientas útiles para el autodiagnóstico de bajo costo y se han aplicado de manera eficiente a la detección de toxinas, índices fisiológicos y biomarcadores clínicos. En este protocolo, proporcionamos una descripción detallada de los pasos para desarrollar un inmunoensayo de flujo lateral rápido, sensible y cuantitativo (utilizando AuNPs como marcador y mAbs como sonda). El procedimiento describe la preparación y caracterización del oro coloidal, la síntesis del conjugado AuNP-mAb, el ensamblaje de la tira inmunocromatográfica y la investigación metodológica del ensayo. Los resultados mostraron que las tiras finales se pueden utilizar aún más para el autodiagnóstico rápido y conveniente de una molécula pequeña, lo que puede proporcionar una herramienta alternativa en el análisis rápido y preciso de los índices fisiológicos y biológicos.
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Artículo de método
Desarrollo de una tira inmunocromatográfica de flujo lateral para la detección rápida y cuantitativa de compuestos de moléculas pequeñas
* These authors contributed equally
En este artículo
Resumen
Introducción
Las tiras inmunocromatográficas de flujo lateral (CSI) basadas en membranas son herramientas útiles para la detección rápida y de bajo costo. La membrana de nitrocelulosa como portadora y el oro coloidal como marcadores de los reactivos de diagnóstico rápido de cromatografía inmune son el método POCT (prueba de punto de atención) más utilizado, y el alcance de la prueba del proyecto es más amplio. Desde su aplicación original en el monitoreo durante el embarazo, su uso se ha extendido para monitorear el estado de coagulación sanguínea1,2, lesiónmiocárdica3,medicina veterinaria
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Protocolo
Todos los procedimientos realizados en este estudio fueron aprobados por el Comité de Revisión de Ética de la Universidad de Medicina China de Beijing (número de aprobación 2017BZYYL00120).
1. Preparación y caracterización del oro coloidal
NOTA: Para la síntesis de oro coloidal, como el oro coloidal se adsorbe fácilmente en la pared interna del recipiente y es propenso a la precipitación por impurezas, el recipiente para la síntesis y el almacenamiento de oro coloidal debe limpiarse a fondo y empaparse en ácido (40 ml de agua destilada, 360 ml de ácido sulfúrico concentrado, 20 g de dicromato de po....
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Resultados
Caracterización del oro coloidal
Las soluciones de oro coloidal preparadas eran de color rojo clarete. Se utilizaron análisis TEM para determinar la morfología y la forma de los AuNPs(Figura 2A-D). La Figura 2A y la Figura 2B revelan que las partículas tienen forma poliédrica y están distribuidas uniformemente. Se encontró que el diámetro promedio de AuNPs era de aproximadamente 14 nm
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Discusión
En este trabajo, presentamos un protocolo para la preparación de mAbs contra moléculas pequeñas derivadas de productos naturales. Se han esbozado los pasos esenciales y los asuntos que necesitan atención en el procedimiento, y hemos demostrado la utilidad de este protocolo utilizando la molécula pequeña SSD como ejemplo. Los espectros de ejemplo, las imágenes TEM, los resultados cuantitativos y las investigaciones metodológicas se muestran en datos representativos. Por lo tanto, hemos demostrado que la producción de oro .......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por los Fondos Especiales para Fondos de Investigación Fundamental de instituciones de educación superior afiliadas a departamentos centrales. Agradecemos el apoyo del Equipo de Investigación Básica de Prescripción Clásica de la Universidad de Medicina China de Beijing.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Solución de ácido cloroáurico (HAuCl4) | Fábrica de reactivos químicos de Tianjin Fu Chen | JY-SJ102 | |
| albúmina de suero bovino | AMRESCO | 332 | |
| 15 mL | Tubo | Corning 430645 | |
| 50 mL | Placas | ||
| ELISA de Corning, 655101 | NUNC | ||
| Papel de filtro | Sinopharm | H5072 | |
| Membranas de fibra de vidrio | Jieyi | XQ-Y6 | |
| anti-ratón Anticuerpos IgG | applygen | C1308 | |
| Membranas de nitrocelulosa | Millipore | millipore 180 | |
| ovoalbúmina | Beijing BIODEE | 5008-25g | |
| PEG20000 | Sigma Aldrich | ||
| Pipeta 10mL | COSTAR | 4488 | |
| Pipeta 25mL | FALCON | 357525 | |
| láminas semirrígidas de PVC | Jieyi | JY-C104 | |
| Citrato de sodio | Beijing Chemical Works | C1034 | |
| periodato de sodio | Sinopharm Chemical | BW-G0008 | |
| Sulfo-GMBS | Perbio Science Alemania | 22324 | |
| TipOne Tips 1.000 µ L Starlab | S1111-2021 | ||
| Tris-HCl | Solarbio | 77-86-1 | |
| TWEEN 20 | Solarbio | 9005-64-5 |
Referencias
- Huang, X., et al. Membrane-based lateral flow immunochromatographic strip with nanoparticles as reporters for detection: A review. Biosensors and Bioelectronics. 75, 166-180 (2016).
- Chang, H. -F., Wang, J. -Q., Wang, B., Deng, A. -P.
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Reimpresiones y permisos
