In vitro Diferenciación de células dendríticas humanas y sus marcadores en la infección por Leishmania

Resumen

Las células dendríticas (CD) son componentes esenciales de la inmunidad innata contra la infección por Leishmania. Los mecanismos que subyacen a la compleja interacción entre las CD y la Leishmania siguen siendo poco conocidos. Aquí, describimos métodos para evaluar cómo la infección por Leishmania afecta la función inmunobiológica de las CD humanas, como la expresión de moléculas coestimuladoras y relacionadas con la migración.

Resumen

La leishmaniasis comprende un conjunto de manifestaciones clínicas asociadas a la infección de protozoos intracelulares obligados, Leishmania. El ciclo de vida de los parásitos de Leishmania consta de dos etapas de vida alternas (amastigotes y promastigotes), durante las cuales los parásitos residen dentro de los artrópodos vectores o vertebrados huéspedes, respectivamente. En particular, las complejas interacciones entre los parásitos de Leishmania y varias células del sistema inmunitario influyen en gran medida en el resultado de la infección. Es importante destacar que, aunque se sabe que los macrófagos son el principal nicho de huéspedes para la replicación de Leishmania , los parásitos también son fagocitados por otras células inmunitarias innatas, como los neutrófilos y las células dendríticas (CD).

Las CD desempeñan un papel importante en la conexión de las ramas innata y adaptativa de la inmunidad y, por lo tanto, orquestan respuestas inmunitarias contra una amplia gama de patógenos. Los mecanismos por los cuales la Leishmania y las DC interactúan siguen sin estar claros e involucran aspectos de la captura de patógenos, la dinámica de la maduración y activación de las DC, la migración de las DC a los ganglios linfáticos drenantes (dLN) y la presentación de antígenos a las células T. Aunque una gran cantidad de estudios apoyan la idea de que las CD desempeñan un doble papel en la modulación de las respuestas inmunitarias contra la Leishmania, la participación de estas células en la susceptibilidad o resistencia a la Leishmania sigue siendo poco conocida. Después de la infección, las CD experimentan un proceso de maduración asociado con la regulación positiva del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) II de superficie, además de las moléculas coestimuladoras (a saber, CD40, CD80 y CD86).

Comprender el papel de las CD en el resultado de la infección es crucial para desarrollar estrategias terapéuticas y profilácticas que modulen la respuesta inmunitaria contra la Leishmania. En este trabajo se describe un método para la caracterización de la interacción Leishmania-DC. Este protocolo detallado proporciona orientación a lo largo de los pasos de la diferenciación de las CD, la caracterización de las moléculas de la superficie celular y los protocolos de infección, lo que permite a los científicos investigar la respuesta de las CD a la infección por Leishmania y obtener información sobre las funciones que desempeñan estas células en el curso de la infección.

Introducción

La leishmaniasis constituye un complejo de enfermedades desatendidas causadas por diferentes especies del género Leishmania ¹. Leishmania es un protozoo intracelular de la familia Trypanosomatidae que infecta a humanos y otros mamíferos, causando un espectro de enfermedades que van desde lesiones cutáneas hasta formas viscerales². Las principales manifestaciones clínicas de esta enfermedad son la leishmaniasis tegumentaria (LT) y la leishmaniasis visceral (VL). La Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que anualmente se producen entre 700.000 y 1 millón de nuevos....

Protocolo

NOTA: Las células se obtuvieron de donantes voluntarios sanos. El procedimiento descrito fue aprobado por el Comité Nacional de Ética (nº 2.751.345)-Fiocruz, Bahía, Brasil).

1. Diferenciación de células dendríticas humanas

1. Pipetear 10 mL de mezcla de polisacarosa-triazoato de sodio en tubos cónicos de 50 mL.
2. Etiquete los tubos cónicos de 50 mL respectivamente para cada donante.
3. Recoja 30 ml de sangre de donantes sanos y realice todos los pasos posteriores en la campana de flujo laminar.
4. Transfiera cuidadosamente la sangre a los tubos cónicos y diluy....

Resultados

En este artículo se investiga el papel de las CD en la infección por Leishmania mediante citometría de flujo y microscopía confocal. Inicialmente, se estableció el perfil fenotípico de la CD derivada de monocitos humanos. En particular, las poblaciones de células dendríticas CD11c⁺ obtenidas fueron positivas para CCR7, CD209, CD80, CD1a y HLA-DR. Los resultados indican que la expresión de estos marcadores en las poblaciones de DC se ve profundamente afectada por la infección por Leishmania. L.......

Discusión

La leishmaniasis es un grave problema de salud pública en todo el mundo. La patogenia de esta enfermedad es bastante compleja y los mecanismos que favorecen la supervivencia del parásito en los huéspedes vertebrados siguen siendo difíciles de alcanzar¹⁷. Las CD son células presentadoras de antígenos profesionales que se encuentran en todo el cuerpo, incluidos los órganos filtrantes y linfoides. Tras la captura y procesamiento de antígenos, las CD inmaduras experim.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
anti CCR7	Thermo
anti CD209	Isofarma
anti CD83	Leica SP8
anti HLA-DR	Gibco
Albúmina sérica bovina	Thermo	A2153-100G	Sigma
Ciprofloxacina	Gibco
Microscopio confocal	Thermo Fisher Suero
	Gibco
Flow Jo	Thermo Fisher Scientific
Gentamicina	Thermo Fisher Scientific
Glutamin	Gibco
HEPES	Thermo Fisher Scientific
faloidina	Thermo Fisher Scientific
Solución tampón de fosfato	Peprotech
prolong gold antifade kit BD	pharmigen
RPMI	BD pharmigen
Saponin	BD pharmigen	47036 – 50G – F	Sigma
Software de medio para insectos de Schneider	BD biosciences

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