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Artículo de método

In vivo Control optogenético inalámbrico del comportamiento motor calificado

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DOI:

10.3791/63082

22 de noviembre de 2021

En este artículo

Resumen

El presente protocolo describe cómo utilizar la optogenética inalámbrica combinada con videografía de alta velocidad en una sola tarea de alcance a agarre de pellets para caracterizar los circuitos neuronales involucrados en el rendimiento del comportamiento motor hábil en ratones que se mueven libremente.

Resumen

Las habilidades motoras finas son esenciales en la vida cotidiana y pueden verse comprometidas en varios trastornos del sistema nervioso. La adquisición y realización de estas tareas requieren integración sensorio-motora e implican un control preciso de los circuitos cerebrales bilaterales. La implementación de paradigmas conductuales unimanuales en modelos animales mejorará la comprensión de la contribución de las estructuras cerebrales, como el cuerpo estriado, al comportamiento motor complejo, ya que permite la manipulación y el registro de la actividad neuronal de núcleos específicos en condiciones de control y enfermedades durante el desempeño de la tarea.

Desde su creación, la optogenética ha sido una herramienta dominante para interrogar al cerebro al permitir la activación o inhibición selectiva y dirigida de las poblaciones neuronales. La combinación de optogenética con ensayos conductuales arroja luz sobre los mecanismos subyacentes de funciones cerebrales específicas. Los sistemas inalámbricos montados en la cabeza con diodos emisores de luz (LED) miniaturizados permiten el control optogenético remoto en un animal que se mueve completamente libremente. Esto evita que las limitaciones de un sistema cableado sean menos restrictivas para el comportamiento de los animales sin comprometer la eficiencia de emisión de luz. El protocolo actual combina un enfoque de optogenética inalámbrica con videografía de alta velocidad en una tarea de destreza unimanual para diseccionar la contribución de poblaciones neuronales específicas al comportamiento motor fino.

Introducción

El comportamiento hábil motor está presente durante la mayoría de los movimientos realizados por nosotros, y se sabe que se ve afectado en varios trastornos cerebrales 1,2,3,4,5,6. La implementación de tareas que permitan estudiar el desarrollo, el aprendizaje y el rendimiento de movimientos hábiles es crucial para comprender los fundamentos neurobiológicos de la función motora, especialmente en modelos de lesiones cerebrales, trastornos neurodegen....

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Protocolo

Los procedimientos relacionados con el uso de animales se llevaron a cabo siguiendo las directrices locales y nacionales y fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales correspondiente (Protocolo VLH151-19 del Instituto de Fisiología Celular IACUC). En el protocolo actual se utilizaron ratones machos transgénicos Drd1-Cre27, 35-40 días postnatal con fondo C57BL/6. Los ratones se mantuvieron bajo las siguientes condiciones: temperatura 22±1 °C; humedad 55%; horario de luz 12/12 h con las luces apagadas a las 19 horas y fueron destetados en el postnatal día 21. Los cachorros destetados fueron alojados en grupos del mis....

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Resultados

La tarea de alcanzar a la comprensión es un paradigma ampliamente utilizado para estudiar la formación, el aprendizaje, el rendimiento y la cinemática del movimiento de habilidades finas bajo diferentes manipulaciones experimentales. Los ratones aprenden a ejecutar la tarea en un par de días y logran más del 55% de precisión alcanzando una meseta después de 5 días de entrenamiento (Figura 2A, B). De manera similar a lo que se ha informado anteriormente, un porcentaje de anim.......

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Discusión

El uso de la manipulación optogenética de poblaciones neuronales en paradigmas conductuales bien definidos está avanzando en nuestro conocimiento sobre los mecanismos subyacentes al control motor 7,23. Los métodos inalámbricos son especialmente adecuados para tareas que requieren pruebas en múltiples animales o libre movimiento34,35. Sin embargo, a medida que se refinan las técnicas y los dispositivos, de.......

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Divulgaciones

Los autores declaran que no hay divulgaciones.

Agradecimientos

Este trabajo fue apoyado por el proyecto UNAM-PAPIIT IA203520. Agradecemos a la instalación de animales de IFC por su ayuda con el mantenimiento de las colonias de ratones y a la unidad computacional por el apoyo de TI, especialmente a Francisco Pérez-Eugenio.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Máquina de anestesiaRWDR583SVaporizador de isoflurano
AnesketPiSAKetamine
BreadboardThorlabsMB3090/MPlaca de prueba óptica de aluminio sólido
Lente de cámara Canon50mmf/ 1.4 lentes de enfoque manual (montura c)Sistema de
cámaraBrainVisionMiCAM02Controlador de cámara y sincronizador
Hisopos de algodón Solución CS
PiSASolución de cloruro de sodio 9%
Cámara de entrenamiento personalizadacasa
Broca #105Dremel2 615 010 5AECortador de grabado
Pellets de chocolate de precisión sin polvoBio-ServF05301
Alcohol etílicoJ. T.  Baker9000-02
Lanzas ocularesUltracell40400-8Lanzas oculares de material PVA absorbente
FlurisoVetOneV1 502017-250Capilares de vidrio isoflurano
Drumond Scientific3-000-203-G/XPipetas para
peróxido de hidrógenoantisépticaFarmacom
BrainVisionMiCAM02-CMOSCámaras monocromáticas de alta velocidad
Emisor de infrarrojosTeleopto
Jeringa de insulina
Cánula LEDTeleoptoTelC-c-l-dCánula LED 250um 487nm
luz Micropipeta 10 uLEppendorfZ740436
Extractor de micropipetasSutterP-87Extractor horizontal
Microscopio LSM780ZeissMicroscopio confocal
Microtomo
Receptor simuladoTeleopto
NanoJect IIDrumond Scientific3-000-204Micro inyector
Tanque de oxígenoInfrana
pAAV-EF1a-double.floxed-hChR2(H134R)-mCherry-WPRE- HGHpAAddgene20297Vector viral para la expresión de ChR-2
Parafilm
ParaformaldehídoSigmaP-6148
Tampón salino de fosfatoSigmaP-4417Comprimidos de tampón salino de fosfato Puntas de
pipeta 10 uLThermoFisherAM126350,5-10 uL de volumen
PisabentalPiSAPentobarbital sódico
PlexigláscomercialLámina acrílica
Povidona yodadaFarmacomAntiséptico
Procin PiSAXilacina
PuralubePerrigo pharma1228112Lubricante ocular 15% aceite mineral/85% vaselina
Herramienta rotativaKmoonMini molinilloestándar
Bisturí
Hoja de
Aparato estereotáxicoStoelting51730D Aparatodigital
Super-Bond C& BSun MedicalCemento dental
quirúrgico desechable
Teleopto Mando a distanciaTeleopto
Tg Drd1-Cre línea de ratónGensat036916-UCDInserción Transgene FK150Gsat
Adhesivo para tejidos3M Vetbond1469SB
TPI Vibratome 1000 plusPeicoMicrotomo
Vectashield Medios de montaje con DAPIVector laboratoriesH-1200 Medios demontaje Receptor
inalámbricoTeleoptoTELER-1-P
En de etanol NanoJect II Cámara de alta velocidad bisturíGorro

Referencias

  1. Balbinot, G., et al. Post-stroke kinematic analysis in rats reveals similar reaching abnormalities as humans. Scientific Report. 8 (1), 8738(2018).
  2. Klein, A., Sacrey, L. A., Whishaw, I. Q., Dunnett, S. B.

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Etiquetas

Optogenética inalámbricahabilidades motoras finasvideografía de alta velocidadtarea de destreza unimanualneuronas espinosas de proyección D1cirugía estereotáxicaexpresión de canalrodopsinatarea de alcance y agarrecircuitería estriatal