Presentamos un método de inyección celular a través de la tecnología de chorro de agua sin aguja junto con una secuela de investigaciones posteriores a la entrega en términos de mediciones de viabilidad celular, proliferación y elasticidad.
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Artículo de método
Inyección de células del estroma derivadas del tejido adiposo porcino a través de la tecnología de chorro de agua
* These authors contributed equally
En este artículo
Resumen
Resumen
La incontinencia urinaria (IU) es una afección altamente prevalente caracterizada por la deficiencia del músculo del esfínter uretral. Las ramas de la medicina regenerativa, particularmente la terapia celular, son enfoques novedosos para mejorar y restaurar la función del esfínter uretral. A pesar de que la inyección de células funcionales activas se realiza rutinariamente en entornos clínicos con aguja y jeringa, estos enfoques tienen desventajas y limitaciones significativas. En este contexto, la tecnología de chorro de agua sin aguja (WJ) es un método factible e innovador que puede inyectar células viables mediante cistoscopia guiada visualmente en el esfínter uretral. En el presente estudio, utilizamos WJ para administrar células estromales derivadas del tejido adiposo porcino (pADSC) en el tejido uretral cadavérico y posteriormente investigamos el efecto de la entrega de WJ sobre el rendimiento y la viabilidad celular. También evaluamos las características biomecánicas (es decir, la elasticidad) mediante mediciones de microscopía de fuerza atómica (AFM). Demostramos que las pADSC administradas por WJ se redujeron significativamente en su elasticidad celular. La viabilidad fue significativamente menor en comparación con los controles, pero todavía está por encima del 80%.
Introducción
La incontinencia urinaria (IU) es un trastorno generalizado con una prevalencia del 1,8 al 30,5% en las poblaciones europeas1 y se caracteriza principalmente por el mal funcionamiento del esfínter uretral. Desde una perspectiva clínica, el tratamiento quirúrgico a menudo se ofrece a los pacientes cuando las terapias conservadoras o la fisioterapia no abordan y alivian los síntomas emergentes.
La terapia celular para la potencial reparación regenerativa del mal funcionamiento del complejo del esfínter ha ido emergiendo como un enfoque vanguardista para el tratamiento de la patología de la IU
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Protocolo
Las muestras de tejido adiposo porcino se obtuvieron del Instituto de Cirugía Experimental de la Universidad de Tuebingen. Todos los procedimientos fueron aprobados por las autoridades locales de bienestar animal bajo el número de experimento animal CU1/16.
1. Aislamiento de células estromales derivadas del tejido adiposo porcino
- Use tejido adiposo porcino entregado desde el Instituto de Cirugía Experimental en un tubo centrífugo de 50 ml al laboratorio.
- Transfiera el tejido a una placa de Petri estéril debajo del banco estéril y pica con dos bisturíes (No. 10) a pequeños fragmentos y papilla.
NOTA: L....
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Resultados
Después de la administración celular a través de los dos enfoques, la viabilidad de las células administradas a través del WN (97,2 ± 2%, n = 10, p<0,002) fue mayor en comparación con las inyecciones de WJ utilizando la configuración E60-10 (85,9 ± 0,16%, n = 12) (Figura 2). Los resultados de la evaluación biomecánica mostraron que: las inyecciones de WN de células en el fluido de captura no mostraron diferencias significativas con respecto a los módulos elásticos (EM; 0,992 kPa) en compa.......
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Discusión
En el presente estudio, demostramos y presentamos un enfoque paso a paso para el procedimiento de entrega de células WJ y empleamos una secuela de investigaciones cuantitativas para evaluar el efecto de la entrega de WJ en las características celulares: viabilidad celular y características biomecánicas (es decir, EM). Después de la inyección de WJ, el 85,9% de las células cosechadas eran viables. En términos de inyección de WN, el 97,2% de las células conservaron su viabilidad después de la inyección. Por lo tanto, el en.......
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Divulgaciones
Los autores J.K., M.D, T.A., A.S., W.K. A. no tienen nada que revelar. Los autores W.L. y M.D.E. son empleados de ERBE Medizintechnik Lt. Tübingen, el productor del ERBEJet2 y el prototipo WJ empleado en este estudio.
Agradecimientos
Agradecemos a nuestros coautores de las publicaciones originales por su ayuda y apoyo.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Tubo de centrífuga de 50 mL | Greiner BioOne | 227261 | |
| 1 mL BD Luer-LokTM Jeringa | BD Plastik Inc | n.a.100 | |
| µ tamiz de células m | Greiner BioOne | 542000 | |
| Tubo de centrífuga de 15 mL | Greiner BioOne | 188271 | |
| matraz de cultivo de tejidos de 75 cm2 | Corning Incorporated | 353136 | |
| cabezal AFM | (CellHesion 200) JPK | JPK00518 | |
| software de procesamiento | Bruker | ||
| Sistema AFM Bruker | JPK00518 | ||
| Cell Hesion 200 | Bruker | JPK00518 | |
| All-In-One-Al | Sensores Económicos | AIO-10 | punta A, Modo Conatct, Forma: Beam Constante de fuerza: 0,2 N/m (0,04 - 0,7 N/m) Frecuencia de resonancia: 15 kHz (10 - 20 kHz) Longitud: 500 & micro; m (490 - 510 y micro; m) Ancho: 30 y micro; m (35 - 45 y micro; m) Espesor: 2.7 y micro; m (1,7 - 3,7 y micro; m) |
| Solución de anfotericina B | Sigma | A2942 | 250 y micro; g/ml |
| Microscopio de fuerza atómica (AFM) | CellHesion 200, JPK Instruments, Berlín, Alemania | JPK00518 | |
| BD Microlance 3 18G | BD | 304622 | |
| albúmina sérica bovina | Gibco | A10008-01 | |
| Cantilever | All-In-One-AleTl, Sensores económicos, Sofía, Bulgaria | AIO-TL-10 | punta A, k & frac14 0,2 N/m |
| Hemocitómetro desechable C-chip | NanoEnTek | 631-1098 | |
| centrífuga: Rotina 420R | Hettich Zentrifugen | ||
| Colagenasa, Tipo I, polvo | Gibco | 17100-017 | |
| Dulbecco' s Águila Modificada' s Glucosa media - baja | Sigma | D5546 | |
| Bisturí desechable Feather (n.º 10) | Feather | 02.001.30.010 | |
| suero fetal bovino (FBS) | Sigma | F7524 | |
| HEPES solución salina sódica (1 M) | Sigma | H3662 | |
| Microscopio de contraste de fase invertida (integrado con AFM) | AxioObserver D1, Carl Zeiss Microscopy, Jena, Alemania | L201306_ 03 | |
| bolsas de laboratorio | Marca | 759705 | |
| Medio L-15 de Leibovitz sin l-glutamina | Merck | F1315 | |
| Medio L-15 de Leibovitz sin L-glutamina | (Merck KGaA, Darmstadt, Alemania) | F1315 | |
| L-glutamina | Lonza | BE 17-605C1 | 200 mM |
| LIVE/DEADTM Kit | de viabilidad/citotoxicidadInvitrogen de Thermo Fisher Scientific | L3224 | Calcein AM y EthD-1 se utilizan en este kit. |
| Software de microscopio: Zen 2.6 | Zeiss | ||
| Microscopio: AxioVertA.1 | Zeiss | ||
| Nelaton-Catéter hembra | Bicakcilar 19512051 | ||
| Penicilina-Estreptomicina | Gibco | 15140-122 | 10000 U/ml Penicilina 10000 µ g/ml Estreptomicina Calentador |
| placa de Petri asociado con AFM | Bruker | T-05-0117 | |
| Calentador de placa de Petri asociado con AFM | JPK Instruments AG, Berlín, Alemania | T-05-0117 | |
| Solución salina tamponada con fosfato (PBS) | Gibco | 10010-015 | |
| Software estadístico: SPSS Statistics 22 | Placa | ||
| - CellStar | Greiner BioOne | 664160 | |
| Placas de cultivo de tejidos | TPP AG | TPP93040 | |
| Placas de cultivo de tejidos | TPP Techno Plastic Products AG, Trasadingen, Suiza | TPP93040 | |
| Azul de tripán 0,4% 0,85% NaCl | Lonza | 17-942E | |
| Solución de tripsina-EDTA | Sigma | T3924 | |
| agua: dispositivo ERBEJET2 | Erbe Elektromedizin GmbH | ||
| Williams Aguja de inyección cistoscópica | Cook Medical | G14220 | 23G, 5.0 Fr, 35 cm |
Referencias
- Milsom, I., et al. Global prevalence and economic burden of urgency urinary incontinence: a systematic review. European Urology. 65 (1), 79-95 (2014).
- Lee, J. Y., et al.
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Reimpresiones y permisos
