Mediciones terminales del reflejo H en ratones

Resumen

La evaluación clínica de la espasticidad basada en el reflejo de Hoffmann (reflejo H) y el uso de estimulación eléctrica de los nervios periféricos es un método establecido. Aquí, proporcionamos un protocolo para una estimulación nerviosa terminal y directa para la cuantificación del reflejo H en la pata delantera del ratón.

Resumen

El reflejo de Hoffmann (reflejo H), como análogo eléctrico del reflejo de estiramiento, permite la validación electrofisiológica de la integridad de los circuitos neuronales después de lesiones como daño de la médula espinal o accidente cerebrovascular. Un aumento de la respuesta del reflejo H, junto con síntomas como contracciones musculares no voluntarias, reflejo de estiramiento patológicamente aumentado e hipertonía en el músculo correspondiente, es un indicador de espasticidad posterior al accidente cerebrovascular (PSS).

En contraste con las mediciones transcutáneas bastante inespecíficas del nervio, aquí presentamos un protocolo para cuantificar el reflejo H directamente en los nervios cubital y mediano de la pata delantera, que es aplicable, con modificaciones menores, al nervio tibial y ciático de la pata posterior. Basado en la estimulación directa y la adaptación a diferentes nervios, el método representa una herramienta fiable y versátil para validar cambios electrofisiológicos en modelos de enfermedades relacionadas con la espasticidad.

Introducción

El reflejo de Hoffmann (reflejo H), llamado así por el fisiólogo Paul Hoffmann, puede ser evocado por la estimulación eléctrica de los nervios periféricos, que transportan axones de neuronas sensoriales y motoras que surgen y conducen a los mismos músculos. Es el análogo inducido eléctricamente del reflejo de estiramiento monosináptico, y comparte la misma vía¹. A diferencia del estiramiento muscular, el reflejo H resulta de la estimulación eléctrica. Cuando los nervios periféricos se estimulan eléctricamente a baja intensidad de corriente, las fibras aferentes de Ia generalmente se despolarizan primero debido a su gran diámetro axónico

Protocolo

Todos los experimentos se llevaron a cabo de conformidad con las leyes europeas y nacionales sobre el cuidado de los animales y las directrices institucionales, y fueron aprobados por el Landesamt für Natur-, Umwelt-, und Verbraucherschutz Renania del Norte-Westfalia (Az: 81-02.04.2019.A309). El protocolo está optimizado para ratones adultos (ratones C57Bl/6J de aprox. 8-16 semanas de edad) y el registro de las extremidades anteriores. Se puede adaptar fácilmente estimulando los nervios respectivos de la extremidad posterior y registrando los músculos de las patas traseras (Figura 1B). Se agrega una descripción de los electrodos de regist....

Resultados

De los n = 15 ensayos de estimulación por frecuencia de estimulación y pata, seleccione al menos n = 10 registros exitosos para el análisis. Los ensayos con errores de medición (p.ej., falta de onda M) se excluyen del análisis. Analice cada ensayo por separado y genere un promedio para las comparaciones de grupo/tiempo más adelante. La latencia entre la estimulación y la aparición de la onda M y la onda H se registra para cada ensayo. En nuestra experiencia, la onda M ocurre aproximadamente 2 ms después de la estimulació.......

Discusión

En contraste con las mediciones transcutáneas del reflejo H descritas anteriormente en el ratón⁶, proporcionamos una medición más directa y específica del nervio. Este nuevo enfoque se puede aplicar a los nervios de la extremidad anterior y posterior (por ejemplo, los nervios mediano, cubital y radial, y los nervios tibial y ciático, respectivamente), lo que hace que este método sea adaptable como herramienta de diagnóstico a muchos modelos de enfermedades (por ejemplo, accidente cerebrovascular, .......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Almohadilla absorbente	VWR	115-0684
Convertidor AD	Cambridge Electronic Design, Reino Unido	Taller de microamplificadores
	Zoológico, UoC-Taller
de estimuladores digitales	Instituto Zoológico, UoC	MS 501
Taller de electrodos EMG	Instituto Zoológico, UoC		Dos hilos de cobre trenzados y aislados (50 y micro; m diámetro exterior) se soldaron a un enchufe macho y se conectaron a un amplificador diferencial.
Ungüento para los ojos	Bayer	Bepanthen
Taller de pipetas de vidrio	Instituto Zoológico, UoC-Prepare		una pipeta de vidrio doblada en un simple gancho de vidrio en la llama de un mechero Bunsen.
Caja calefactora		MediHeat MediHeat V1200
Almohadilla térmica	WPI	61840 Almohadilla
Electrodos de gancho	Taller Instituto Zoológico, UoC-Para		producir los electrodos, doble los pasadores en miniatura de acero inoxidable en ganchos en un extremo e insértelos en cánulas romas para crear un contacto mecánico directo. Suelde el extremo de la cánula a cables de cobre (longitud aproximada de 50 cm), que están conectados al dispositivo de estimulación o de grabación.
Ketamina	Pfizer	Ketavet
Sonda rectal	WPI	RET-3
Unidad de aislamiento del estimulador	Taller Instituto Zoológico, UoC	MI 401
Esterilizador	CellPoint Scientific	Germinator 500	La desinfección rutinaria pre y postoperatoria del equipo quirúrgico debe realizarse mediante esterilización por calor. Descontamine los instrumentos durante 15 s en el baño de perlas de vidrio calentado (260 °C; C).
Controlador de temperatura	WPI	ATC200
Vaselina	Bayer-Xilacina
	Bayer	Rompun

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