Cauterización de círculo completo del plexo vascular limbal para el glaucoma inducido quirúrgicamente en roedores

Resumen

El objetivo de este protocolo es caracterizar un nuevo modelo de neurodegeneración glaucomatosa basado en la cauterización térmica de 360° del plexo vascular limbal, induciendo hipertensión ocular subaguda.

Resumen

El glaucoma, la segunda causa de ceguera en todo el mundo, es un grupo heterogéneo de trastornos oculares caracterizados por daño estructural en el nervio óptico y la degeneración de las células ganglionares de la retina (RGC), lo que resulta en una disfunción visual al interrumpir la transmisión de información visual del ojo al cerebro. La presión intraocular elevada es el factor de riesgo más importante; Por lo tanto, se han desarrollado varios modelos de hipertensión ocular en roedores mediante enfoques genéticos o experimentales para investigar las causas y los efectos de la enfermedad. Entre ellas, se han descrito algunas limitaciones, como la invasividad quirúrgica, la evaluación funcional inadecuada, la necesidad de un entrenamiento extenso y la extensión muy variable del daño retiniano. El presente trabajo caracteriza un método simple, de bajo costo y eficiente para inducir hipertensión ocular en roedores, basado en la cauterización a baja temperatura y de círculo completo del plexo vascular limbal, un componente importante del drenaje acuoso del humor. El nuevo modelo proporciona una hipertensión ocular subaguda técnicamente fácil, no invasiva y reproducible, asociada a RGC progresiva y degeneración del nervio óptico, y una tasa de recuperación clínica postoperatoria única que permite estudios funcionales in vivo por métodos electrofisiológicos y conductuales.

Introducción

La literatura médica entiende el glaucoma como un grupo heterogéneo de neuropatías ópticas caracterizadas por la degeneración progresiva de las células ganglionares de la retina (CGR), dendritas, soma y axones, lo que resulta en ahuecamiento estructural (excavación) del disco óptico y deterioro funcional del nervio óptico, lo que conduce a amaurosis en casos no controlados al interrumpir la transmisión de información visual desde el ojo al cerebro¹. El glaucoma es actualmente la causa más común de ceguera irreversible en todo el mundo, y se prevé que llegue a aproximadamente 111,8 millones de personas en 2040², lo que af....

Protocolo

Todos los procedimientos fueron realizados de acuerdo con la Declaración para el Uso de Animales en la Investigación Oftálmica y Visual de la Asociación para la Investigación en Visión y Oftalmología (ARVO) y aprobados por el Comité de Ética en el Uso de Animales en la Experimentación Científica del Centro de Ciencias de la Salud de la Universidad Federal de Río de Janeiro (protocolo 083/17). En el presente trabajo se utilizaron ratas Lister Hooded de ambos sexos, de 2-3 meses de edad y con un peso de 180-320 g. Sin embargo, el procedimiento se puede adaptar en diferentes cepas de ratas de varios rangos de edad.

1. Cirugía de hiperten....

Resultados

Las variables cuantitativas se expresan como media ± error estándar de la media (SEM). A excepción de la comparación de la dinámica de la PIO entre los grupos OHT y control (Figura 1F), el análisis estadístico se realizó mediante ANOVA de dos vías seguido de la prueba de comparaciones múltiples de Sidak. Un valor de p < 0,05 se consideró estadísticamente significativo.

La Figura 1 ilustra los pasos quirúrgicos del modelo de cauteri.......

Discusión

La cauterización del plexo limbal (LPC) es un nuevo modelo posttrabecular con la ventaja de que se dirige a estructuras vasculares de fácil acceso que no requieren disección conjuntival o de tenas^17,28. A diferencia del modelo de cauterización de las venas de vórtice, un modelo de OHT de renombre basado en el deterioro quirúrgico del drenaje venoso coroideo, no se espera que la congestión venosa influya en el aumento de la PIO en el modelo LPC, ya que las venas l.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Acetona	Isofar	201	Utilizado para la preparación de tejidos por microscopía electrónica (paso 5)
Electrodo activo para electrorretinografía	Hansol Medical	Co-Aguja de	acero inoxidable 0,25 mm y veces; 15 mm
Anestalcon	Novartis Biociê ncias S/A	MS-1.0068.1087	Clorhidrato de proxymetacaína 0.5%
Cloruro de calcio	Vetec	560	Utilizado para la preparación de tejidos por microscopía electrónica (paso 5)
Cauterización de punta fina a baja temperatura 10/bx	Bovie Medical Corporation	AA00	Cauterio oftálmico de baja temperatura
Cetamin	Syntec do Brasil Ltda	000200-3-000003	Clorhidrato de ketamina 10%
DAKO	Dako North America	S3023	Medio de montaje antidecoloración
DAPI	Thermo Fisher Scientific	28718-90-3	diamidino-2-fenilindol; contratinción nuclear fluorescente azul; emisión a 452± 3 nm
Ecofilm	Cristá lia Produtos Quí micos Farmacê uticos Ltda	MS-1.0298.0487	Carmelosa sódica 0.5%
EPON Resina	Polysciences, Inc.	-	Resina epoxi utilizada para microscopía electrónica, compuesta por una mezcla de cuatro reactivos: Resina Poly/Bed 812 (CAT#08791); DDSA - Anhídrido dodecenilsuccínico (CAT#00563); NMA - Anhídrido de metilo nádico (CAT#00886); DMP-30 - 2,4,6-tris (dimetilaminometil)fenol (CAT # 00553)
de microscopía electrónica	de glutaraldehído	16110	Utilizado para la preparación de tejidos de microscopía electrónica (paso 5)
Hyabak	Uniã o Quí mica Farmacê utica Nacional S/A	MS-8042140002	Hialuronato de sodio 0.15%
Icare Tonolab	Icare Finland Oy	TV02 (número de modelo)	Tonómetro de mano de rebote
IgG burro anticuerpo anti-ratón + Alexa Fluor 555	Thermo Fisher Scientific	A31570	Solución de anticuerpos secundarios
Monitor LCD 23 pulgadas	Samsung Electronics Co. Ltd.	S23B550	Modelo LS23B550, para el registro de electrorretinogramas
LSM 510 Meta	Carl Zeiss-Microscopio		epifluorescencia confocal
Maxiflox	Cristá lia Produtos Quí micos Farmacê uticos Ltda	MS-1.0298.0489	Ciprofloxacina 3.5 mg/g
MEB-9400K	Nihon Kohden	Corporation-Sistema	para el registro de electrorretinogramas
monoclonales IgG1 de ratón anti-Brn3a	MilliporeSigma	MAB-1585	Brn3a solución de anticuerpos primarios
Neuropack Manager v08.33	Nihon Kohden	Corporation-Software	para el procesamiento
de señales de electrorretinogramaOptometría		CerebralMecánica-Sistema	para el análisis de la respuesta optomotora
Tetróxido de osmio	Ciencias de la Microscopía Electrónica	19100	Utilizado para la preparación de tejidos de microscopía electrónica (paso 5)
Ferrocianuro de potasio	Ciencias de la Microscopía Electrónica	20150	Utilizado para la preparación de tejidos por microscopía electrónica (paso 5)
Electrodos de referencia y de tierra para electrorretinografía	Chalgren Enterprises	110-63	Agujas de acero inoxidable 0,4 mm × 37 mm
Tampón de cacodilato de sodio	Electrónica Microscopy Sciences	12300	Utilizado para la preparación de tejidos por microscopía electrónica (paso 5)
Ster MD	Uniã o Quí mica Farmacê utica Nacional S/A	MS-1.0497.1287	Acetato de prednisolona 0.12%
Terolac	Cristá lia Produtos Quí micos Farmacê uticos Ltda	MS-1.0497.1286	Ketorolac trometamol 0.5%
Terramicina	Laborató rios Pfizer Ltda	MS-1.0216.0024	Clorhidrato de oxitetraciclina 30 mg/g + polimixina B 10.000 U/g
Tono-Pen XL	Reichert Technologies	230635	Tonómetro de mano de aplanación digital
TO-PRO-3	Thermo Fisher Scientific	T3605	Contratinción nuclear fluorescente de rojo lejano; emisión a 661 nm
Triton X-100	Sigma-Aldrich	9036-19-5	Surfactante no iónico
Acetato de uranilo	Ciencias de la Microscopía Electrónica	22400	Utilizado para la preparación de tejidos con microscopía electrónica (paso 5)
Xilazin	Syntec do Brasil Ltda	7899	Clorhidrato de xilacina 2%
	Carl Zeiss-Microscopio		estereoscópico para cirugía y disección de retina

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