El ensayo mecánico de evitación de conflictos se utiliza como una lectura no reflexiva de la sensibilidad al dolor en ratones que se puede utilizar para comprender mejor las respuestas afectivo-motivacionales en una variedad de modelos de dolor de ratón.
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Artículo de método
Ensayo mecánico de evitación de conflictos para medir el comportamiento del dolor en ratones
En este artículo
Resumen
Resumen
El dolor comprende dimensiones sensoriales (nociceptivas) y afectivas (desagradables). En modelos preclínicos, el dolor se ha evaluado tradicionalmente mediante pruebas reflexivas que permiten inferencias sobre el componente nociceptivo del dolor, pero proporcionan poca información sobre el componente afectivo o motivacional del dolor. Por lo tanto, el desarrollo de pruebas que capturen estos componentes del dolor es muy importante. Por lo tanto, los investigadores necesitan usar ensayos conductuales no reflexivos para estudiar la percepción del dolor en ese nivel. La evitación mecánica de conflictos (MCA) es un ensayo de comportamiento voluntario no reflexivo establecido, para estudiar las respuestas motivacionales a un estímulo mecánico nocivo en un paradigma de 3 cámaras. Un cambio en la preferencia de ubicación de un ratón, cuando se enfrenta a estímulos nocivos competidores, se utiliza para inferir lo desagradable percibido de la luz brillante frente a la estimulación táctil de las patas. Este protocolo describe una versión modificada del ensayo MCA que los investigadores del dolor pueden usar para comprender las respuestas afectivo-motivacionales en una variedad de modelos de dolor de ratón. Aunque no se describen específicamente aquí, nuestros datos de MCA de ejemplo utilizan el adyuvante de Freund completo intraplantar (CFA), la lesión nerviosa evitada (SNI) y un modelo de fractura / yeso como modelos de dolor para ilustrar el procedimiento de MCA.
Introducción
El dolor es una experiencia compleja con componentes sensoriales y afectivos. Una reducción en el umbral de percepción del dolor y la hipersensibilidad a los estímulos térmicos y/o mecánicos son características clave de esta experiencia, que las pruebas de comportamiento del dolor evocadas por estímulos pueden capturar (como la prueba de sensibilidad al calor de Hargreaves y la prueba de von Frey de sensibilidad mecánica)1,2. Aunque tales pruebas dan resultados robustos y reproducibles, están limitadas por su dependencia de la retirada reflexiva de un estímulo nocivo percibido. Esto ha puesto en duda una depen....
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Protocolo
Todos los experimentos que involucran el uso de ratones y los procedimientos seguidos en ellos fueron aprobados por los Comités Institucionales de Cuidado y Uso de Animales del MD Anderson Cancer Center y la Universidad de Stanford, en estricta conformidad con la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio de los Institutos Nacionales de Salud.
1. Construcción de MCA
- Construir cámara 1 con las siguientes dimensiones: 125 mm x 125 mm x 125 mm (ancho x fondo x alto) a partir de acrílico blanco opaco de 3 mm de espesor utilizado para las paredes laterales, piso, techo. Use un acrílico transparente ....
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Resultados
El ensayo MCA se ha utilizado con éxito con varios modelos de dolor de ratón mecánicamente distintos. La Figura 2 muestra datos en los que la medida de resultado de elección estaba cruzando el punto medio de la cámara 2 (Figura 2A). Los datos obtenidos mediante el uso del punto medio versus el escape en la cámara 3 son muy similares, ~ 40 s para la mitad del camino versus ~ 45 s para el escape de la cámara 3 en el modelo de lesión nerviosa evitada (SNI) de dolor.......
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Discusión
Al igual que con todas las pruebas de comportamiento, el manejo adecuado, la aleatorización y el cegamiento al tratamiento de los animales es esencial en todo momento. Dados los aportes multifactoriales en comportamientos complejos y toma de decisiones, es imperativo que los animales sean manejados, habituados y probados de la manera más consistente posible mientras se minimiza la angustia. También se debe tener cuidado para reproducir el momento de la colocación del mouse en la cámara 1, encender las luces LED y elimina.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen conflictos de intereses relevantes que revelar.
Agradecimientos
GM cuenta con el apoyo de una beca de posgrado de NDSEG. VLT cuenta con el apoyo de la subvención NIH NIGMS #GM137906 y la Fundación Rita Allen. AJS cuenta con el apoyo de las subvenciones del Departamento de Defensa W81XWH-20-1-0277, W81XWH-21-1-0197 y la Fundación Rita Allen. Estamos agradecidos al Dr. Alexxai Kravitz de la Facultad de Medicina de la Universidad de Washington por diseñar y poner a disposición gratuitamente los archivos de impresora 3D para el piso de la cámara 2 y la placa de sonda.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 32.8ft 3000K-6000K Tiras de luces LED blancas sintonizables, luces de cinta LED súper brillantes regulables con 600 LED SMD 2835 | Lepro | SKU: 410087-DWW-US | Para la cámara de iluminación 1. https://www.lepro.com/32ft-dimmable-tunable-white-led-strip-lights.html |
| 'cama de espigas' y 'piso de la cámara 2 | N/A | Opcional, para sondas mecánicas como alternativa a los pines de mapa desafilados. | |
| 70% etanol | Varios | N/A | Para limpiar MCA entre ratones. |
| Bisagra acrílica 2 | TAP Plastics | N/A | para fijar las tapas de las cámaras a las paredes traseras. https://www.tapplastics.com/product/plastics/handles_hinges_latches/acryl_hinge_2/122 |
| Lámina acrílica Chemcast Cast, | Clear TAP Plastics | N/A | espesor. Para la pared frontal de la cámara 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_cast_clear/510 |
| Chemcast Cast Acrílico de color transparente, rojo oscuro transparente - 50% | TAP Plastics | N/A | 3mm de espesor. 50% de transmisión de luz. Para paredes y tapas de las cámaras 2 y 3. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_transparent_colors/519 |
| Chemcast Translúcido & Acrílico fundido de color opaco, letrero blanco opaco - 0.1% | TAP Plastics | N/A | 3 mm de espesor. Para las paredes laterales y la tapa de la cámara 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_color/341 |
| Desinfectante (p. ej., cuatricidio) | Pharmacal Research Laboratories, Inc. | 65020F | Para desinfectar el MCA al final de una sesión de prueba. |
| Rotuladores y pizarra de borrado en seco | Varios | N/A | Para añadir información experimental al principio de las secuencias de vídeo. |
| Mapa de pines | Varios | N/A | Opcional, para sondas mecánicas. Use papel de lija para desafilar las puntas afiladas antes de usar. Se puede utilizar en lugar de piezas impresas en 3D. |
| Toallas de papel | Varios | N/A | Para limpiar/desinfectar MCA. |
| SCIGRIP Weld-On #3 Cemento Acrílico | TAP Plásticos N | /A | Para ensamblar láminas acrílicas en cámaras y fijar bisagras. https://www.tapplastics.com/product/repair_products/plastic_adhesives/weld_on_3_cement/131 |
| Cronómetro | Varios | N/A | Para registrar latencias de escape/tiempos de permanencia en tiempo real o a partir de video grabado. |
| Temporizador | Varios | N/A | Para garantizar el encendido del LED, la eliminación de la barrera y la finalización de la prueba se cronometran de manera consistente. |
| Cámara de vídeo | Varios | HDRCX405 Videocámara Handycam | Para grabar el comportamiento del ratón en el dispositivo MCA. Se puede sustituir por cualquier cámara de video de consumo con una resolución de 1080p. |
| Trípode | Famall | N/A | Cualquier trípode que pueda sostener la cámara a la altura de la mesa para grabar imágenes MCA es aceptable. |
Referencias
- Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia. Pain. 32 (1), 77-88 (1988).
- Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. Quantitative ....
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Reimpresiones y permisos
