El objetivo general de este artículo es describir cómo realizar la inyección intracelular ovo de materiales exógenos en embriones de pollo. Este enfoque es muy útil para estudiar la biología del desarrollo de los embriones de pollo.
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Artículo de método
En Ovo Inyección intravascular en embriones de pollo
En este artículo
Resumen
Resumen
Como un sistema modelo clásico de biología embrionaria, el embrión de pollo se ha utilizado para investigar el desarrollo embrionario y la diferenciación. La entrega de materiales exógenos en embriones de pollo tiene una gran ventaja para estudiar la función génica, la reproducción transgénica y la preparación de quimeras durante el desarrollo embrionario. Aquí mostramos el método de inyección intravascular in ovo mediante el cual los materiales exógenos como los vectores plásmidos o las células germinales primordiales modificadas (PGC) pueden transferirse a embriones de pollo de donantes en etapas tempranas de desarrollo. Los resultados muestran que la inyección intravascular a través de la aorta dorsal y la cabeza permite que los materiales inyectados se difundan en todo el embrión a través del sistema circulatorio sanguíneo. En el protocolo presentado, la eficacia de la introducción de plásmidos exógenos y vectores lentivirales, y la colonización de PGC exógenos inyectados en la gónada receptora, se determinaron mediante la observación de fluorescencia en los embriones. Este artículo describe procedimientos detallados de este método, proporcionando así un excelente enfoque para estudiar la función génica, la biología embrionaria y del desarrollo, y la producción de pollos quiméricos de gónadas. En conclusión, este artículo permitirá a los investigadores realizar in ovo inyección intravascular de materiales exógenos en embriones de pollo con gran éxito y reproducibilidad.
Introducción
Los embriones de pollo se han utilizado ampliamente durante siglos en aplicaciones biológicas, inmunológicas, patológicas y de desarrollo 1,2,3. Tienen muchas ventajas inherentes sobre otros modelos animales en el estudio de la toxicología y la biología celular4. Los embriones de pollo son fácilmente accesibles y pueden manipularse in vitro y observarse directamente en cualquier etapa del desarrollo, lo que proporciona un práctico sistema de modelo de investigación embrionaria.
En general, los métodos actuales de ad....
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Protocolo
Todos los procedimientos relacionados con el cuidado y el uso de animales se ajustaron a las directrices del Instituto Nacional de Salud de los Estados Unidos (NIH Pub. No. 85-23, revisado en 1996) y los protocolos de embriones de pollo fueron aprobados por el Comité de Ética de Animales experimentales y manejo de animales de laboratorio de la Universidad de Yangzhou, China (No.201803124).
1. Recolección y preparación de óvulos fertilizados
NOTA: A diferencia de los mamíferos, el pollo tiene millones de folículos en un solo ovario, pero solo unos pocos de estos folículos son lo suficientemente madu....
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Resultados
Mostramos aquí la inyección intravascular in ovo de embriones de pollo. En la Figura 1 se muestra un proceso esquemático de la inyección intravascular; en nuestro estudio, utilizamos varias soluciones exógenas para probar y verificar la inyección.
Para visualizar mejor los materiales inyectados, se inyectó Trypan Blue (0,4%) como trazador en el embrión. Se observó que el marcador (azul) se difunde a todo el embrión a través de la circulación sang.......
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Discusión
El método de inyección in ovo intravascular de embriones de pollo está optimizado para materiales exógenos (vectores, virales o PGC) que se transfieren al embrión. Basándonos en este método, construimos modelos de embriones de pollo con sobreexpresión o interferencia genética estable (SpinZ, JUN, UBE2I, etc.) 17,18,19. Estos modelos bien establecidos demuestran la viabilidad de este enfoque. Además, no solo transferimo.......
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Divulgaciones
No se declararon conflictos de intereses.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (31972547). Agradecemos la edición de Jing Wang y la voz en off de Malik Donlic en la Universidad Estatal de Washington, Estados Unidos.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Macromicroscopio de fluorescencia | OLYMPUS | MVX10 | |
| Capilares de vidrio | Narishige | G1 | |
| Lipofectamine 2000 | Invitrogen | 12566014 | liposoma |
| pEGFP-N1 vector | Clontech | #6085-1 | |
| PKH26 Kit enlazador de células fluorescentes rojas | Sigma | PKH26GL | |
| pLVX-EGFP vector de lentivirus | Addgene | 128652 | |
| Microinyector neumático | Narishige | IM-11-2 | |
| Extractor | Narishige | PC-100 | |
| Tinte azul de tripano | Gibco | 15250061 |
Referencias
- Bednarczyk, M., Dunislawska, A., Stadnicka, K., Grochowska, E. Chicken embryo as a model in epigenetic research. Poultry Science. 100 (7), 101164(2021).
- Darnell, D. K., Schoenwolf, G. C. The chick embryo as a model system for analyzing mechanisms of development. Developmental Biology Protocols. , Humana Press. New York, NY. 25-29 (....
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Reimpresiones y permisos
