Un modelo murino clínicamente relevante de fibrosis peritoneal por dializado y catéteres

Resumen

Los pacientes con fibrosis peritoneal grave tienen una alta morbilidad y mortalidad. El mecanismo de la fibrosis peritoneal no está claro. En este estudio, describimos un modelo murino experimental simple de fibrosis peritoneal inducida por la inyección de líquido de diálisis peritoneal.

Resumen

La fibrosis peritoneal puede ocurrir en pacientes sometidos a diálisis peritoneal (DP), y los pacientes con fibrosis peritoneal grave tienen una alta morbilidad y mortalidad. La peritonitis, el líquido de diálisis peritoneal con alto contenido de glucosa y un largo período de EP precipitan la aparición de la fibrosis peritoneal. Es necesario un estudio de la fibrosis peritoneal en animales debido a las limitaciones de los estudios en humanos e in vitro . Sin embargo, la mayoría de los modelos animales no imitan las condiciones clínicas. Para estudiar la fibrosis peritoneal, desarrollamos un modelo murino clínicamente relevante mediante la implantación de un catéter peritoneal y la inyección de líquido DP con alto contenido de glucosa al 2,5% más 20 mM de metilglioxal (MGO) en la cavidad peritoneal diariamente durante 21 días. El implante del catéter peritoneal evita la lesión peritoneal por agujas e imita a los pacientes clínicos con EP. La tinción con inmunofluorescencia mostró que los miofibroblastos se acumulaban en el peritoneo fibrótico. El grupo experimental presentó menor volumen de ultrafiltración y función de transporte de la membrana peritoneal (prueba de equilibrio peritoneal). En este artículo, proporcionamos un protocolo detallado del modelo.

Introducción

La diálisis peritoneal (DP) es un tipo de terapia de reemplazo renal que reciben aproximadamente el 11% de los pacientes con enfermedad renal terminal (IRT)¹. Los estudios han reportado que la fibrosis peritoneal se desarrolla en pacientes que reciben PD². La esclerosis peritoneal encapsulante (EPS), una forma grave de fibrosis peritoneal, resulta en una alta morbilidad y mortalidad³. Los factores de riesgo de la fibrosis peritoneal incluyen peritonitis, líquido de diálisis peritoneal con alto contenido de glucosa, un largo período de DP y fa....

Protocolo

Los experimentos fueron aprobados y realizados de acuerdo con el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la Facultad de Medicina y la Facultad de Salud Pública de la Universidad Nacional de Taiwán. Todos los ratones fueron alojados bajo cuidados estándar.

1. Experimento con animales

1. Utilice ratones machos y hembras C57BL/6 de tipo salvaje (WT) de más de 11 semanas de edad.
2. Prepare los materiales quirúrgicos, incluido un puerto de silicona de 4 franceses, guantes, paños, catéteres, suturas y agujas.
3. Implante el puerto del mouse de la sigui....

Resultados

Se examinó la histología del tejido peritoneal, que mostró que la fibrosis peritoneal se indujo con éxito en el grupo de líquido DP más MGO (PDF). La tinción por inmunofluorescencia del peritoneo visceral de la superficie hepática mostró más acumulación de miofibroblastos en el peritoneo lesionado del grupo PDF que en el grupo control (Figura 1). Como se muestra en la Figura 2A, el grupo PDF tuvo un volumen de ultrafiltración más bajo que el grupo control. Como .......

Discusión

El peritoneo tiene un peritoneo visceral y parietal, que cubre los órganos abdominales y las paredes abdominales. Está compuesto por una monocapa de células mesoteliales, una capa submesotelial, serosa, fibroblastos, linfocitos y proteínas secretadas¹⁴. La fibrosis peritoneal es la pérdida y denudación de células mesoteliales, engrosamiento submesotelial y acumulación de muchas células inflamatorias, como miofibroblastos y macrófagos ^4.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
anti-amplio espectro Anticuerpo de citoqueratina	ABCAM	AB9377
Beckman Coulter	Beckman Coulter	AU5800	Analizador bioquímico
DAPI, 4′,6-diamidino-2-fenilindol	anticuerpo Sigma-Aldrich	98718-90-3
Cortinas			cualquier
FITC cabra anti-conejo	Jackson ImmunoResearch Secundaria Anticuerpo	111-095-144
Guantes			cualquiera
GraphPad Prizm	GraphPad Software GraphPad	Software 9.0
Kellys			any
Methylglyoxal (MGO)	Sigma-Aldrich
Mini-UTE Mouse Port	Access Technologies	MMP-4S 061108B	Mouse 4-French silicone port
Antiactina monoclonal, α-músculo liso-Anticuerpo Cy3	Sigma-Aldrich	C6198
Agujas	cualquiera
reflex 7 mm			cualquiera
Sutura 4-0 Nylon			cualquiera

Pinzas