El presente trabajo describe una técnica modificada para el trasplante cardíaco vascularizado heterotópico con técnica aséptica actualizada, analgesia y anestesia.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Un protocolo modificado de trasplante de corazón heterotópico murino que coincide con los estándares contemporáneos de técnica aséptica, anestesia y analgesia
En este artículo
Resumen
Resumen
El desarrollo de modelos experimentales de trasplante cardíaco en animales ha contribuido a muchos avances en los campos de la inmunología y el trasplante de órganos sólidos. Si bien el modelo heterotópico de trasplante cardíaco murino vascularizado se utilizó inicialmente en estudios de rechazo de injertos utilizando combinaciones de cepas de ratones endogámicos no coincidentes, el acceso a cepas modificadas genéticamente y modalidades terapéuticas puede proporcionar nuevos y poderosos conocimientos preclínicos. Fundamentalmente, la metodología quirúrgica para esta técnica no ha cambiado desde su desarrollo, especialmente con respecto a factores importantes como la técnica aséptica, la anestesia y la analgesia, que tienen impactos materiales en la morbilidad y mortalidad postquirúrgica. Además, se espera que las mejoras en el manejo perioperatorio proporcionen mejoras tanto en el bienestar animal como en los resultados experimentales. Este artículo informa sobre un protocolo desarrollado en colaboración con un experto en anestesia veterinaria y describe la técnica quirúrgica con énfasis en el manejo perioperatorio. Además, discutimos las implicaciones de estos refinamientos y proporcionamos detalles sobre la solución de problemas de pasos quirúrgicos críticos para este procedimiento.
Introducción
Debemos gran parte de nuestra comprensión de la inmunología y el trasplante a la investigación basada en modelos experimentales de trasplante de órganos sólidos utilizando sujetos animales. Desde la primera descripción del trasplante cardíaco vascularizado en mamíferos1, tales modelos han contribuido al conocimiento en amplios dominios, incluyendo la aplicación terapéutica de la hipotermia2, los beneficios del uso de suturas especializadas3 y técnicas para homotrasplantes totales de pulmón y corazón4. El desarrollo de modelos de trasplante cardíaco en ratas
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
Esta investigación se realizó de acuerdo con el Código de Prácticas para el Cuidado y Uso de Animales con Fines Científicos15 y aprobado bajo los Protocolos de Ética Animal RA/3/100/1568 y AE173 (Comité de Ética Animal de la Universidad de Australia Occidental y Comité de Ética Animal del Instituto Harry Perkins de Investigación Médica, respectivamente). Consulte la Tabla de materiales para obtener detalles sobre todos los materiales, instrumentos y animales utilizados en este protocolo.
1. Preparación del animal para la cirugía
NOTA: El personal está dedica....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
Para determinar la efectividad de la técnica quirúrgica para promover buenos resultados de cicatrización de heridas y recuperación de ratones, los primeros experimentos en el laboratorio determinaron las características de supervivencia de una gama de injertos cardíacos de inmunogenicidad variable para el receptor. Estos incluyeron injertos congénicos (n = 5) y singénicos (n = 5), que comparten los mismos marcadores del complejo principal de histocompatibilidad (MHC) que el receptor, e injertos de desajuste mayor (n = 9).......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
El modelo de trasplante cardíaco ortotópico murino es un modelo preclínico robusto utilizado principalmente para investigar los efectos del desajuste del MHC sobre el nivel y la naturaleza del rechazo inmunológico y, más recientemente, el efecto del trasplante sobre la retención de la inmunidad residente en el tejido del injerto16. Aunque inicialmente seguimos de cerca el protocolo de Corry et al.7 , hemos refinado el protocolo para incorporar estándares de mejores práctica.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
Los autores no tienen conflictos de intereses que revelar.
Agradecimientos
Los autores desean reconocer los excelentes esfuerzos del personal de cuidado de animales de la Universidad de Australia Occidental y del Instituto Harry Perkins de Investigación Médica, cuya dedicación y experiencia contribuyeron a la viabilidad y el éxito de estas cirugías.
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 2030 Rycroft cánula irrigadora 30 G | McFarlane | 56005HU | |
| Seda quirúrgica trenzada 7-0 | |||
| Pinza Bulldog curva - 35 mm | Roboz | RS-7441-5 | |
| Bupivacaína 0.25% | |||
| Buprenorfina | |||
| Castroviejo portaagujas enganche curvo - 145 mm | Haag-Streit | 11.62.15 | |
| Clorhexidina 5% solución | Ebos | JJ61371 | |
| Aplicador con punta de algodón - 7,5 cm | Dove | SN109510 | |
| Etanol 70% solución | Ebos | WH130192EE | |
| Gasa 5 x 5 cm blanco | Aero | AGS50 | |
| Gelfoam 80 mm x 125 mm | Pfizer | 7481D | |
| Cortapelos | Wahl | 9860L | |
| Heparina 1.000 UI en 1 mL | |||
| Tijeras Iris SuperCut rectas - 11,5 cm | Inka Quirúrgico | 11550.11 | |
| Vaporizador de isoflurano | Darvall | 9176 | |
| Micro pinza bulldog - 3,7 cm | Greman | 14119-G | |
| Micro tijeras curvadas 105 mm | |||
| Cinta quirúrgica de papel normal Micropore - 2,5 cm de ancho | Tijeras | 7810L | |
| - punta | |||
| Sutura de polipropileno monofilamento - 5/0 | Surgipro | P-205-X | |
| Báscula de precisión Myweigh i101 100 g x 0,005 g | Myweigh | Kit00053 | |
| Aguja - 30 G x 0,5 pulgadas | BD | BD304000 | |
| Portaagujas 15 cm curvado "super fino" | Surgical Specialists | ST-B-15-8.2 | |
| Nylene 10/0 x 15 cm en 3.8 mm 3/8 círculo de cuerpo redondo cónico (diámetro 0.07mm) CV300 | |||
| Pinza de sutura de cuerpo redondo curvada 0.3 mm 120 mm | B. Braun | FD281R | |
| Pinza de sutura de cuerpo redondo recta 0.3 mm 120 mm | B. Braun | FD280R | |
| Tijeras de muelle vannas con mango redondo-str/12,5 cm | 15400-12 | ||
| Tijeras de muelle-Cvd Sm cuchillas | 15001-08 | ||
| Tijeras Stevens romas rectas 110 mm | |||
| Tablero | Cartón laminado rígido. 15 x 15 cm | ||
| Paños quirúrgicos Cortados | en dos tamaños. 25 cm x 25 cm y 25 cm x 40 cm | ||
| Microscopio | |||
| Jeringa - 1 mL | BD | 592696 | |
| Jeringa - 3 mL | Pinza dentada Leica | M651 | |
| BD | 309657 | ||
| Solución | |||
| Almohadilla térmica Almohadilla | infrarrojo lejano 20 x 25 cm | ||
| Tijeras de resorte Westcott | |||
| Yasargil aplicador de clip bayoneta | Aesculap | FE582K | |
| Yasargil clip de titanio permanente 6.6 mm | Aesculap | A19FT222T | |
| Mouse uso | |||
| Tensión/SEXO/Peso | Donante | Recetante | |
| BALB/c, mujer, 19-23 g | 7 | 21 | |
| C57BL/6, mujer, 17-20 g | 7 | ||
| CD45.1 BALB/c, mujer, 17-21 g | 5 |
Referencias
- Mann, F. C., Priestley, J. T., Markowitz, J., Yater, W. M. Transplantation of the intact mammalian heart. Archives of Surgery. 26 (2), 219-224 (1933).
- Neptune, W. B., Cookson, B. A., Bailey, C. P., Appler, R., Rajkowski, F. Complete homologous heart transplantation. A.M.A. Archives of Surgery.
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
