Aquí, el pez cebra (Danio rerio) se utiliza como modelo para estudiar las reacciones alérgicas y las respuestas inmunes relacionadas con el síndrome alfa-Gal (AGS) mediante la evaluación de las reacciones alérgicas a la saliva de garrapatas y el consumo de carne de mamíferos.
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Artículo de método
Modelo animal de pez cebra para el estudio de reacciones alérgicas en respuesta a biomoléculas de saliva de garrapatas
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Resumen
Resumen
Las garrapatas son artrópodos vectores que causan enfermedades por transmisión de patógenos y cuyas picaduras podrían estar relacionadas con reacciones alérgicas que afectan la salud humana en todo el mundo. En algunos individuos, altos niveles de anticuerpos de inmunoglobulina E contra el glicano Galα1-3Galβ1-(3)4GlcNAc-R (α-Gal) han sido inducidos por picaduras de garrapatas. Las reacciones anafilácticas mediadas por glicoproteínas y glicolípidos que contienen el glicano α-Gal, presentes en la saliva de garrapatas, están relacionadas con el síndrome alfa-Gal (AGS) o alergia a la carne de mamíferos. El pez cebra (Danio rerio) se ha convertido en un modelo vertebrado ampliamente utilizado para el estudio de diferentes patologías. En este estudio, el pez cebra se utilizó como modelo para el estudio de las reacciones alérgicas en respuesta al consumo de carne de α-Gal y mamíferos porque, al igual que los humanos, no sintetizan este glicano. Para este propósito, se evaluaron los patrones de comportamiento y las reacciones alérgicas de tipo anafiláctico hemorrágico en respuesta a la saliva de la garrapata Ixodes ricinus y el consumo de carne de mamíferos. Este enfoque experimental permite la obtención de datos válidos que respaldan el modelo animal de pez cebra para el estudio de alergias transmitidas por garrapatas, incluido el AGS.
Introducción
Las garrapatas son vectores de patógenos que causan enfermedades y también son la causa de reacciones alérgicas, afectando la salud de humanos y animales en todo el mundo 1,2. Durante la alimentación por garrapatas, las biomoléculas en la saliva de garrapatas, especialmente proteínas y lípidos, facilitan la alimentación de estos ectoparásitos, evitando las defensas del huésped3. Algunas biomoléculas de saliva con glicano Galα1-3Galβ1-(3)4GlcNAc-R (α-Gal) modificaciones conducen a la producción de altos niveles de anticuerpos anti-α-Gal IgE después de la picadura de garrapata, solo en al....
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Protocolo
Todos los métodos aquí descritos han sido aprobados por el Comité Ético de Experimentación Animal de la Universidad de Castilla La Mancha en el marco del estudio "Evaluación de la respuesta inmune a la vacuna inactivada contra M. bovis y desafío con M. marinum en el número de modelo de pez cebra PR-2017-05-12".
Las garrapatas se obtuvieron de la colonia de laboratorio, donde se analizaron muestras representativas de garrapatas en la colonia mediante PCR para detectar patógenos comunes de garrapatas para confirmar la ausencia de patógenos, y se mantuvieron en el Instituto de Parasitología, Centro de Biología de la Academia ....
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Resultados
El protocolo aquí presentado se basa en varios aspectos de experimentos previamente publicados27,30 y resultados realizados en nuestro laboratorio donde se establece y valida el modelo de pez cebra para el estudio del AGS y la respuesta inmune al α-Gal porque tanto los humanos como el pez cebra no sintetizan esta molécula13. Este modelo permite la caracterización y evaluación de una variedad de reacciones alérgicas como resultado de la res.......
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Discusión
El pez cebra es un modelo rentable y fácil de manejar que también ha sido una herramienta muy factible para el estudio de los mecanismos moleculares de la respuesta inmune, enfermedades patógenas, pruebas de nuevos medicamentos y vacunación y protección contra infecciones33,34,35. El estudio sobre el comportamiento del pez cebra es útil ya que estudios previos han encontrado que algunas especies de peces permanecen inmóviles en .......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Queremos agradecer a los miembros del grupo SaBio su colaboración en el diseño experimental y asistencia técnica con la instalación experimental de peces y a Juan Galcerán Sáez (IN-CSIC-UMH, España) por proporcionar pez cebra. Este trabajo fue apoyado por el Ministerio de Ciencia e Innovación/Agencia Estatal de Investigación MCIN/AEI/10.13039/501100011033, España y EU-FEDER (Grant BIOGAL PID2020-116761GB-I00). Marinela Contreras está financiada por el Ministerio de Ciencia, Innovación y Universidades, España, subvención IJC2020-042710-I.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Tubo de 1,5 ml | VWR | 525-0990 | |
| All Prep DNA/RNA | Qiagen | 80284 | |
| instalaciones | |||
| Thermo Fisher Scientific | 23225 | ||
| Juego de disección | VWR | 631-1279 | |
| Alimento para perros - Red Classic | Acana | ||
| Placas ELISA-96 pocillos | Thermo Fisher Scientific | 10547781 | |
| Gala1-3Gal-BSA 3 (α-Gal) | Dextra | NGP0203 | |
| iScript Transcripción inversa Supermix | Supermix | 1708840 | |
| Jeringas de microlitros | Hamilton | 7638-01 | |
| Lector de placas | cualquier | ||
| solución salina tamponada con fosfato | Sigma | P4417-50TAB | |
| clorhidrato de pilocarpina | Sigma | P6503 | |
| Punta de pipeta P10 | VWR | 613-0364 | |
| Punta de pipeta P1000 | VWR | 613-0359 | |
| Alimento premium peces tropicales | DAPC | ||
| Esponja Soporte para animales | Hecho de espuma de desecho | ||
| Microscopio estereoscópico | cualquier | ||
| termociclador, PCR en tiempo real, | cualquier | ||
| metanasulfonato de tricaína (MS-222) | Sigma | E10521 |
Referencias
- de la Fuente, J., Estrada-Pena, A., Venzal, J. M., Kocan, K. M., Sonenshine, D. E. Overview: Ticks as vectors of pathogens that cause disease in humans and animals. Frontiers in Bioscience: A Journal and Virtual Library. 13 (18), 6938-6946 (2008).
- de la Fuente, J., et al.
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Reimpresiones y permisos
